教學目標和要求掌握鹽水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法原理、方法及意義。熟悉微柱凝膠法原理、方法。了解酶法、白蛋白介質(zhì)法、Liss法原理和方法。

熟悉ABO/Rh血型判定方法及影響原因熟悉抗體篩選原理和意義熟悉交叉配血方法及意義了解抗體判定原理和意義

輸血前相容性檢測閻第1頁血型判定抗體篩選及判定交叉配血紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用輸血前相容性檢測閻第2頁

微柱凝膠免疫學技術(shù)

聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)輸血前相容性檢測閻第3頁鹽水介質(zhì)凝集試驗懸浮于鹽水介質(zhì)中紅細胞與對應(yīng)抗體分子結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見凝集。主要檢測IgM類抗體（ABO系統(tǒng)、抗E）?？笰抗B特異性IgG類抗體有時可直接凝集懸浮于鹽水中紅細胞，與紅細胞表面抗原位點數(shù)目和抗原決定簇位置相關(guān)。

輸血前相容性檢測閻第4頁鹽水介質(zhì)凝集試驗方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果

試管法-適合用于不一樣溫度、便于洗滌反應(yīng)溫度：4～22℃臨床意義：鹽水凝集試驗陽性，并在37℃也有活性抗體有意義，這些抗體通常能用其它方法證實。室溫有活性，37℃無活性者臨床意義不大。

輸血前相容性檢測閻第5頁

試驗統(tǒng)計4+（++++）：一個大凝集塊，背景透明，無游離細胞3+（+++）：數(shù)個大凝集塊，背景透明，無游離細胞2+（++）：許多小凝集塊，背景稍混濁，有游離細胞1+（+）：細小凝集塊，背景渾濁W+（±）：極細小凝集塊，要用顯微鏡觀察結(jié)果0（-）：無凝集，無溶血，細胞呈游離散在狀態(tài)PH：部分溶血H：完全溶血輸血前相容性檢測閻第6頁輸血前相容性檢測閻第7頁Weakreactionsoftendifficulttointerpret.Canalsobedowngradedduetoshakingthecompletedtest.ConventionalTesting.輸血前相容性檢測閻第8頁輸血前相容性檢測閻第9頁鹽水介質(zhì)凝集試驗◆結(jié)果分析：陽性-凝集或溶血 陰性-無凝集或溶血 先觀察有沒有溶血、再觀察有沒有凝集◆注意事項：細胞濃度2～5%（嚴格按說明 書操作）、血清與細胞百分比、反應(yīng)溫 度、弱凝集分析

◆優(yōu)點：簡便、快捷、直觀?！羧秉c：不能發(fā)覺不完全抗體。輸血前相容性檢測閻第10頁

微柱凝膠免疫學技術(shù)

聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)輸血前相容性檢測閻第11頁抗人球蛋白試驗抗球蛋白試驗是1945年由Coombs等人建立，又稱Coombs試驗?？骨虻鞍自囼灲⒃谘脱鍖W上有著非常主要意義。分為直接抗球蛋白試驗（DAT）和間接抗球蛋白試驗（IAT）。輸血前相容性檢測閻第12頁抗人球蛋白試驗原理IgG類血型抗體（主要是免疫抗體，如Rh血型抗體）分子量小，與紅細胞對應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見凝集反應(yīng)，稱之為不完全抗體，但在加入抗-IgG后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。補體成份在體內(nèi)被紅細胞抗原抗體復合物激活以后，結(jié)合在紅細胞表面。在體外含補體多克隆抗體，或抗C3b、抗C3d等單特異性抗體與補體致敏紅細胞反應(yīng)，使之凝集也稱為抗球蛋白試驗。輸血前相容性檢測閻第13頁抗人球蛋白試劑多特異性抗球蛋白試劑：應(yīng)含有抗IgG和抗-C3d。單特異性抗球蛋白試劑：抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗C3、C4片段。輸血前相容性檢測閻第14頁直接抗人球蛋白試驗DAT是用來檢測體內(nèi)紅細胞致敏情況，尤其是IgG和C3d包被紅細胞。用于：HDN和本身免疫溶血性貧血診療紅細胞被藥品抗體致敏檢驗急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)檢驗輸血前相容性檢測閻第15頁輸血前相容性檢測閻第16頁間接抗人球蛋白試驗用于測定在體外能引發(fā)紅細胞致敏抗體。用不完全抗體測定紅細胞血型，如Rh血型。交叉配血。輸血前相容性檢測閻第17頁輸血前相容性檢測閻第18頁結(jié)果分析-假陽性●用免疫兔或羊制備抗人球蛋白含有種間抗體。●紅細胞在用鹽水洗滌時已經(jīng)有凝集?！馡AT試驗中所用紅細胞本身DAT陽性?！癫豢鼓龢吮驹诶洵h(huán)境里經(jīng)過一段時間保留后，本身冷抗體發(fā)生作用，激活補體，補體成份結(jié)合在紅細胞上，用多特異性抗球蛋白試劑會發(fā)生假陽性。●離心過分，紅細胞壓積過緊，不易充分搖散輸血前相容性檢測閻第19頁結(jié)果分析-假陰性致敏后紅細胞洗滌不充分,殘留球蛋白中和了試劑中抗球蛋白，造成假陰性。操作過程不連續(xù)，時間過長，結(jié)合在紅細胞上抗體解離。紅細胞、血清和抗人球蛋白試劑保留不妥都可能發(fā)生活性減弱或喪失。紅細胞過多，反應(yīng)減弱；紅細胞過少，看結(jié)果不準確，都影響結(jié)果。試劑中抗人球蛋白濃度過大，有前帶現(xiàn)象。孵育時間和溫度不妥，會使反應(yīng)結(jié)果減弱或變?yōu)榧訇幮?。觀察結(jié)果時過分搖動試管，搖散細小凝塊。輸血前相容性檢測閻第20頁注意事項每次試驗要設(shè)有陰性和陽性對照。陰性結(jié)果要加入一滴IgG致敏紅細胞試驗器材清潔。注意抗原抗體百分比、孵育時間、溫度等條件。嚴格按照試驗方法操作。排除本身抗體干擾。輸血前相容性檢測閻第21頁微柱凝膠免疫學技術(shù)

聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)抗人球蛋白試驗輸血前相容性檢測閻第22頁微柱凝膠試驗

原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定化學物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱上端有一個加樣反應(yīng)室?？乖贵w反應(yīng)后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細胞凝集塊不能經(jīng)過凝膠間隙而留在凝膠上部，未凝集紅細胞經(jīng)過凝膠間隙，沉積到底部。

輸血前相容性檢測閻第23頁微柱凝膠反應(yīng)本質(zhì)：凝集反應(yīng)紅細胞抗原與對應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)凝集。依據(jù)紅細胞在膠質(zhì)介質(zhì)中位置肉眼判斷。輸血前相容性檢測閻第24頁結(jié)果判斷標準

結(jié)果判定標準輸血前相容性檢測閻第25頁微柱凝膠試驗注意事項

▲嚴格按照試劑說明書操作?！I血者DAT陽性，干擾結(jié)果判讀?！颊弑旧砜贵w干擾?！⒁饧訕哟涡?。▲配制細胞濃度準確。

輸血前相容性檢測閻第26頁

微柱凝膠免疫學技術(shù)聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)抗人球蛋白試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗輸血前相容性檢測閻第27頁聚凝胺試驗原理：聚凝胺是一個多價陽離子聚合物，在溶液中有多個陽離子基團，能中和紅細胞表面負電荷，并籍助正負電荷作用，引發(fā)紅細胞非特異性凝集。當紅細胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育后，IgG抗體與紅細胞上對應(yīng)抗原結(jié)合，在聚凝胺作用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根負電荷與聚凝胺上正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正凝集不會消失。輸血前相容性檢測閻第28頁+++聚凝胺+無凝集+有凝集反應(yīng)-----枸櫞酸納-----輸血前相容性檢測閻第29頁聚凝胺試驗優(yōu)點：簡便快捷，可用于一些不完全抗體檢測。缺點：對無唾液酸紅細胞無作用， 比如多凝集紅細胞。 可增強本身抗體或冷凝集素干擾。注意事項：抗原抗體百分比適當 聚凝胺（1液）去除潔凈。

輸血前相容性檢測閻第30頁

微柱凝膠免疫學技術(shù)

聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)抗人球蛋白試驗輸血前相容性檢測閻第31頁酶介質(zhì)凝集試驗

原理：紅細胞表面有豐富唾液酸，帶有負電荷，使紅細胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，降低紅細胞表面負電荷以及紅細胞之間排斥力，縮短了紅細胞之間距離，使IgG分子能與有對應(yīng)抗原紅細胞產(chǎn)生凝集。輸血前相容性檢測閻第32頁酶介質(zhì)凝集試驗

●慣用酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶?！穹椒ǎ孩衿诜?酶液直接加入血清和細胞混合物中。

Ⅱ期法-用酶處理細胞再與血清 進行反應(yīng)?！駜煞N方法比較：Ⅰ期法操作方便 Ⅱ期法敏感輸血前相容性檢測閻第33頁酶介質(zhì)凝集試驗

●優(yōu)點：能夠增強一些抗原抗體系統(tǒng)反應(yīng)活性Rh和Kidd系統(tǒng)最顯著●缺點：會破壞一些抗原結(jié)構(gòu)(M、N、Fya、Fyb)酶液批次不一樣，都需標化最適孵育時間。操作繁復，少數(shù)人對酶液過敏。輸血前相容性檢測閻第34頁

微柱凝膠免疫學技術(shù)

聚凝胺試驗酶介質(zhì)凝集試驗鹽水介質(zhì)凝集試驗抗人球蛋白試驗增強技術(shù)抗人球蛋白試驗輸血前相容性檢測閻第35頁增強技術(shù)●白蛋白增強凝集法 ★原理：白蛋白能提升紅細胞懸浮液中介電常數(shù)，從而降低zete電位，縮小了細胞間距離，增加細胞與細胞接觸面。

★應(yīng)用：血型判定和交叉配血 ★結(jié)果判定：出現(xiàn)凝集和溶血現(xiàn)象為陽性結(jié)果。

輸血前相容性檢測閻第36頁增強技術(shù)●低離子強度鹽溶液（Liss）法

★原理：在凝集反應(yīng)第一階段，若降低介質(zhì)離子強度，就會降低紅細胞周圍陽離子云，促進帶正電荷IgG與帶負電荷紅細胞發(fā)生反應(yīng)。★注意事項：不能增加額外血清量 延長孵育時間會使一些抗原 變質(zhì)，如Fya。

輸血前相容性檢測閻第37頁抗體篩選及判定交叉配血紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)血型判定輸血前相容性檢測閻第38頁ABO血型判定

●方法：慣用室溫鹽水技術(shù)檢測紅細胞上 血型抗原，以及血清中存在血型 抗體。結(jié)果判定參見凝集試驗?！馎BO血型判定常規(guī)試驗：

1、正定型：用已知抗體標準血清檢驗紅細胞上未知抗原。常規(guī)用抗A抗B

2、反定型：用已知血型標準紅細胞檢驗血清中未知抗體。常規(guī)用A、B和O三種紅細胞。輸血前相容性檢測閻第39頁正反定型意義

◆準確血型判定利于指導臨床用血◆發(fā)覺亞型◆抗原強度改變與疾病相關(guān)◆新抗原出現(xiàn)與疾病相關(guān)◆排除假陰性或假陽性結(jié)果干擾輸血前相容性檢測閻第40頁ABO血型反應(yīng)格局

血型正定型反定型抗A抗BAcBcOc

A+--+-B-++--O--++-AB++---輸血前相容性檢測閻第41頁CellsvSerumSerumvCells輸血前相容性檢測閻第42頁ABO亞型判定

◆亞型通常表現(xiàn)為凝集反應(yīng)強度弱，或正、反定型不符◆增加試劑：抗A1-區(qū)分A1和A2 抗H-有較強H抗原性 抗A,B-與Ax反應(yīng)強度增強◆增加方法：吸收放散試驗 唾液中血型物質(zhì)判定 PCR方法輸血前相容性檢測閻第43頁Rh血型判定

▲紅細胞Rh表型可用特殊含有抗D、C、c、E、和e抗血清檢測來判定。但常規(guī)只用抗D血清檢驗有沒有D抗原

▲D抗原陽性者為Rh陽性，不然為陰性

輸血前相容性檢測閻第44頁Rh血型判定方法

●

Rh抗體屬IgG類，普通不能在鹽水介質(zhì)中與紅細胞發(fā)生凝集，所以須采取以下判定方法（其中一個）：1、酶介質(zhì)法2、抗人球蛋白法+增強試驗（Liss/白蛋白技術(shù)）●RhD檢測慣用鹽水法。輸血前相容性檢測閻第45頁血型判定交叉配血紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)抗體篩選及判定輸血前相容性檢測閻第46頁抗體篩選和判定

●有臨床意義抗體：能引發(fā)新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反應(yīng)，或者使輸入紅細胞存活期降低，在37℃有反應(yīng)同種抗體?！褚馔饪贵w：抗A，抗B以外抗體。輸血前相容性檢測閻第47頁目標和標準

▲目標：對受血者血清或血漿，應(yīng)常規(guī)作抗體篩選試驗，以發(fā) 現(xiàn)有臨床意義意外抗體?！鴺藴剩鹤屖軝z血清或血漿與特殊試劑紅細胞（篩選細胞）起反應(yīng)，以發(fā)覺37℃有反應(yīng)活性抗體。輸血前相容性檢測閻第48頁對血清中抗體檢測要求

選擇足夠敏感、高特異性技術(shù)檢測出受檢者血清中低水平有臨床意義抗體。2.要高度注意，即使受血者血清中抗體對輸入不相容紅細胞抗原呈弱反應(yīng)，也能夠發(fā)生快速回想反應(yīng)，抗體快速產(chǎn)生，破壞紅細胞。輸血前相容性檢測閻第49頁對試劑紅細胞要求

●不能將多人份紅細胞混合，一定要用2-3人份試劑紅細胞，以防止紅細胞混合后，對弱抗原紅細胞稀釋?！衩绹鳩DA對注冊和同意作為商品供給用作不規(guī)則抗體篩檢試劑紅細胞要求為必須表示：D、C、E、c、e、M、N、S、s，Pl、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb，JKa、JKb。輸血前相容性檢測閻第50頁輸血前相容性檢測閻第51頁

臨床主要人血清紅細胞抗體

抗體自然發(fā)生免疫鹽水Coombs/LISSHDNHTR相容表型抗-AyesyesmostmostyesyesB、O抗-ByesyesmostmostyesyesA、O抗-AByesyesmostmostyesyesO抗-HyesyesmostmostyesyesOh輸血前相容性檢測閻第52頁抗體自然發(fā)生免疫鹽水Coombs/LISSHDNHTR相容表型抗Dyes罕見mostyesyesD陰性血抗Cyes罕見mostyesyesC陰性血抗EyessomemostyesyesC陰性血抗cyes罕見mostyesyesc陰性血抗eyes罕見mostyesyese陰性血輸血前相容性檢測閻第53頁抗體篩選方法

◆鹽水凝集法◆抗人球蛋白法◆聚凝胺法◆微柱凝膠法◆LISS抗球蛋白法輸血前相容性檢測閻第54頁DCEce患者1患者21R1R1++00++-2R2R2+0++0++3rr000++--輸血前相容性檢測閻第55頁

結(jié)果判讀和解釋

◆溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有沒有溶血，后觀察有沒有凝集?！艚y(tǒng)計結(jié)果，并與以前結(jié)果對照?！艨贵w篩選試驗不一定能檢出全部有臨床意義抗體。一些低頻抗原抗體或有劑量效應(yīng)抗體，可能被漏檢。輸血前相容性檢測閻第56頁抗體判定

經(jīng)過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)深入作抗體判定試驗，以確定其特異性。本身細胞檢驗-排除非特異性2.譜紅細胞檢驗輸血前相容性檢測閻第57頁譜紅細胞：普通是由8-16人份已知血型表現(xiàn)型O型紅細胞組成，含有各種不一樣抗原成份，依據(jù)譜紅細胞反應(yīng)格局普通能夠判定常見抗體。方法：在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技術(shù)及抗人球蛋白試驗。輸血前相容性檢測閻第58頁血型判定抗體篩選及判定交叉配血紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)應(yīng)用紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)輸血前相容性檢測閻第59頁交叉配血

◆主側(cè)：受血者血清+供者紅細胞 檢測對供者紅細胞起反應(yīng)抗體◆次側(cè)：受血者紅細胞+供者血清 檢測對受者紅細胞起反應(yīng)抗體◆本身對照：受血者紅細胞+受血者血清 排除本身抗體、直接抗球蛋白試驗陽性及紅細胞緡錢狀凝集干擾輸血前相容性檢測閻第60頁接收申請單和血標本

查對無誤（如有錯誤與醫(yī)生/護士聯(lián)絡(luò)）進行交叉配血

相合結(jié)果輸入微機不相合打印發(fā)血單血液中心交叉配血工作流程輸血前相容性檢測閻第61頁注意事項

◆用于交叉配血標本應(yīng)該是新取得（3天之內(nèi)）；供者血標本應(yīng)剛從血袋上剪下?！舨荒苡貌Ｆㄗ鹘徊媾溲??！舯匾獣r用生理鹽水洗滌細胞?！艏t細胞濃度普通是2-5%?！魢栏癜凑赵噭┱f明書操作。輸血前相容性檢測閻第62頁抗篩和配血結(jié)果分析紅細胞方面問題處理血清方面問題處理常見問題處理紅細胞抗原抗體檢測技術(shù)輸血前相容性檢測閻第63頁抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析

抗體篩選陰性，交叉配血相合◆見于臨床上絕大多數(shù)標本?！艨贵w篩選陰性，血清中仍有可能含有臨床有意義抗體（方法或篩選細胞）◆鹽水介質(zhì)試驗作配血可能漏檢有意義IgG類抗體。◆只有用非鹽水介質(zhì)交叉配血，才能確保待輸血和受者相合。輸血前相容性檢測閻第64頁抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析

抗體篩選陰性，鹽水直接離心交叉配血不合◆ABO血型錯誤?！艨笰1存在于A2或A2B，在直接鹽水交叉配血試驗中，抗A1能引發(fā)大部分A型紅細胞不相合?！舸嬖谑覝胤磻?yīng)同種抗體，如抗M。輸血前相容性檢測閻第65頁抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析

抗體篩選陰性，抗人球蛋白交叉配血不合◆獻血者紅細胞DAT陽性（約1/10000）◆患者抗體弱，獻血者紅細胞抗原性很強，表現(xiàn)為抗人球蛋白試驗陽性?！翎槍Φ皖l抗原抗體，如Diego系統(tǒng)抗-Wra。輸血前相容性檢測閻第66頁抗體篩選和交叉配血結(jié)果分析

抗體篩選陽性，交叉配血不合◆同種抗體、本身抗體、試劑問題、緡錢狀凝集，應(yīng)在輸血前查明原因。◆必須進行包含抗人球蛋白試驗在內(nèi)交叉配血?！艟o急情況下無法找到血清學配合血液時，輸血科人員應(yīng)告之主管醫(yī)生此種情況下輸血存在可能危險。輸血前相容性檢測閻第67頁同種抗體處理對策

◆交叉配合相合是否取決于包括抗原頻率?！襞卸贵w特異性后，先用抗血清篩選對應(yīng)抗原陰性者，再與受者血清作交叉配血。用受血者血