精子形態(tài)分析及染色精子形態(tài)分析和染色第1頁精液常規(guī)檢驗采集：采集前必須禁欲2~7天，采集后馬上送檢，存放時間不要超出1小時，運輸時溫度與體溫相近。外觀和氣味：正常呈灰白或乳白色，厚稠膠凍狀，液化后呈乳白色半透明狀。精子數(shù)量少，精液透明且稀?。痪褐杏休^多紅細(xì)胞，可呈紅褐色；黃色精液見于精液中有較多膿細(xì)胞，或服用藥品。量：正常>=2mL，下限是1.5mL，小于1mL，視為異常，見于精囊腺和前列腺病變。精子形態(tài)分析和染色第2頁液化：室溫正常5~10分鐘液化，20~40分鐘可完全液化，1小時仍不液化應(yīng)視為異常，普通與缺乏蛋白水解酶相關(guān)。粘稠度：精液粘稠度異常可影響精子活力和穿透力。用吸管吸入精液，滴落精液觀察，粘稠度增加時，精液懸滴可形成>2cm拉絲。PH值：正常精液PH呈弱堿性，>=7.2（滴PH試紙<30秒）。精液PH過低，可影響其對陰道酸性環(huán)境調(diào)整作用，影響精子活力。亦可能與精囊發(fā)育不良相關(guān)。精子形態(tài)分析和染色第3頁精子濃度參考值下限為：15X106/mL精子總數(shù)參考值下限為：39X106/mL精子密度過低或無精見于：1、睪丸生精功效異常2、輸精管、射精管、精囊存在缺點3、精索靜脈曲張4、生殖道炎癥5、流行性腮腺炎并發(fā)睪丸炎6、絕育手術(shù)后7、放射性照射，有害化學(xué)物質(zhì)污染及藥品作用等。精子形態(tài)分析和染色第4頁精子存活率：活精子數(shù)量在精子總數(shù)量中所占百分比。伊紅-苯胺黑染色：50uL精液與等體積染液混勻，等候30秒；采取拉薄技術(shù)制成涂片，空氣中干燥，高倍鏡觀察，活精子頭部成白色或淡粉紅色，死精子頭部呈紅色或暗粉紅色。正常參考值：（參考下限是58%）>=70%（射精后1h）>=40~50%（射精后3h）>=20~30%（射精后6h）精子形態(tài)分析和染色第5頁精子活力：正常精子活動力，精子向前運動能力。計數(shù)200個精子分級情況。WHO把精子活動力分為4級。(5版分3級)d：不動PR：前向運動c：非前向運動NP：非前向運動b：慢速或呆滯前向運動IM：不活動a：快速向前運動精子形態(tài)分析和染色第6頁正常為：a級>25%或a+b>50%（5版）參考值下限是前向運動精子（PR）：32%精子總活力（PR+NP）：40%臨床意義：活力下降、弱精子癥：見于液化不良、粘稠度增高、精液凝集，精子結(jié)構(gòu)異常，內(nèi)分泌功效異常，精索靜脈曲張等。精子形態(tài)分析和染色第7頁精子細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗1、正常精子形態(tài)：正常在精液中占15%(5版)參考下限為：4%2、畸形精子：頭部形狀、大小異常；體部異常；尾部異常。臨床意義：精子形態(tài)異常與生殖系統(tǒng)感染、外傷、雄激素改變、化學(xué)藥品中毒及遺傳原因相關(guān)。精子形態(tài)分析和染色第8頁3、生精細(xì)胞、精原、初級精母、次級精母、精子細(xì)胞。正常時少許，當(dāng)曲精管生精能力受到損害時，精液中可出現(xiàn)較多病理性幼稚細(xì)胞。4、其它成份紅細(xì)胞（極少）：血精癥、睪丸瘤、前列腺瘤白細(xì)胞（<=1X106/mL）：生殖道炎癥癌細(xì)胞：輸精管惡性腫瘤精子形態(tài)分析和染色第9頁人精子形態(tài)模式圖頭部：輪廓規(guī)則，頂體清楚，頂體帽最少覆蓋頭部表面1/3。中段：細(xì)長，不超出頭寬1/3，輪廓直而規(guī)則。尾部：細(xì)長，彎曲不卷曲。精子形態(tài)分析和染色第10頁

正常形態(tài)精子概念把“具備潛在受精能力精子”（亞群）外觀作為形態(tài)正常標(biāo)準(zhǔn)。人為設(shè)定臨界標(biāo)準(zhǔn)，要求“臨界形態(tài)精子都是異常”。精子形態(tài)分析和染色第11頁操作前準(zhǔn)備一側(cè)有磨砂載玻片蓋玻片（24mmX50mm）10uL移液器及吸頭紗布或紙巾記號筆巴氏染液或Diff染液精子形態(tài)分析和染色第12頁精液涂片制備每份新鮮精液標(biāo)本應(yīng)制備兩張或更多涂片，以防染色發(fā)生問題或載玻片破碎。每次取樣前要充分混勻精液。對于未稀釋精液，采取拉薄技術(shù)；對于已洗滌精液，采取移液管法。涂片前準(zhǔn)備：1.用紗布或紙巾擦潔凈載玻片兩面2.用記號筆在載玻片磨砂處標(biāo)識上編號、日期。精子形態(tài)分析和染色第13頁涂片方法充分混勻待涂片精液標(biāo)本，依據(jù)精子濃度，用移液器去5~10uL精液滴在載玻片一端，馬上用第二張載玻片非磨砂端以45°角（角度越小，涂片越?。┭氐谝粡堓d玻片表面移動并接觸精液滴，然后沿載玻片長軸遲緩?fù)匣乩s一秒；速度越快，涂片越厚），制成一張涂片。精子形態(tài)分析和染色第14頁對于高粘稠或低密度或充滿碎屑精液：稀釋精漿或離心去精漿。方法：取0.2~0.5mL精液，加10mL生理鹽水，800g離心10分鐘，除去大部分上清液，輕輕拍打試管，使精子團重新混懸于剩下上清液中。必要時可加生理鹽水重復(fù)洗滌一次。洗滌后精子濃度在20-50X106/ml為好。洗滌目標(biāo)是降低背景雜質(zhì)，并降低背景著色。精子形態(tài)分析和染色第15頁如圖：取5~10uL懸浮液于清潔載玻片上，用滴管使精液在載玻片上展開。然后在400倍光鏡下掃視一下確保精液涂片均勻，400倍下每個視野20-50個精子，而且沒有精子成團或重合。精子形態(tài)分析和染色第16頁注意：1.精液標(biāo)本完全液化，充分混勻；2.快速取樣，使精子沒有時間從混懸液中沉降下來；3.重復(fù)取樣前，再次混勻精液標(biāo)本；4.精液滴在載玻片上，馬上涂片，不要放置數(shù)秒后再涂片。精子形態(tài)分析和染色第17頁染色步驟1.精子懸液涂片制備完成后，水平放置，空氣中自然干燥；2.加A液覆蓋組織片室溫反應(yīng)15秒，將玻片直立吸水紙上除去多出染液；3.加B液覆蓋組織片室溫反應(yīng)10秒，將玻片直立吸水紙上除去多出染液；4.加C液覆蓋組織片室溫反應(yīng)15秒，將玻片直立吸水紙上除去多出染液；5.流水中浸洗10~15次以除去多出染液；6.將玻片垂直豎立以去除水分，待完全干燥；7.油鏡下觀察精子形態(tài)。精子形態(tài)分析和染色第18頁結(jié)果觀察1.精子頂體區(qū)染淡紫色，頂體后區(qū)染深紫色，精子體尾區(qū)染成淡紅色。2.世界衛(wèi)生組織（WHO）精子缺點類型分類以下：精子形態(tài)分析和染色第19頁精子形態(tài)分析和染色第20頁1

正常精子形態(tài)精子形態(tài)分析和染色第21頁2小頭梨形頭頂體區(qū)>70%頂體后區(qū)空泡>2過多殘留胞漿中段粗、彎曲插入雙尾彎曲精子形態(tài)分析和染色第22頁3圓形頭錐形頭不定形頭大頭針狀頂體區(qū)>70%頂體區(qū)<40%頂體后區(qū)空泡>2中段粗不規(guī)則插入精子形態(tài)分析和染色第23頁4扁平底不規(guī)則頭頂體區(qū)<40%中段粗不規(guī)則插入彎曲精子形態(tài)分析和染色第24頁5頂體區(qū)>70%頂體后區(qū)空泡中段彎曲粗、不規(guī)則插入尾環(huán)狀卷曲、彎曲雙尾精子形態(tài)分析和染色第25頁精子形態(tài)分析精子形態(tài)分析和染色第26頁6-1精子形態(tài)分析和染色第27頁6-2精子形態(tài)分析和染色第28頁7-1精子形態(tài)分析和染色第29頁7-2精子形態(tài)分析和染色第30頁8-1精子形態(tài)分析和染色第31頁8-2精子形態(tài)分析和染色第32頁9-1精子形態(tài)分析和染色