實驗土壤速效磷的測定（碳酸氫鈉法）一、目的和要求掌握比色法測定土壤速效磷的方法，了解土壤中磷素形態(tài)及其土壤供磷能力與土壤速效磷的關(guān)系。掌握土壤速效磷的浸提，浸提液的處理，標(biāo)準曲線制作，顯色，比色，計算。二、方法原理石灰性土壤由于大量游離碳酸鈣存在，不能用酸溶液來提取有效磷。一般用碳酸鹽的堿溶液。由于碳酸根的同離子效應(yīng)，碳酸鹽的堿溶液降低碳酸鈣的溶解度，也就降低了溶液中鈣的濃度，這樣就有利于磷酸鈣鹽的提取。同時由于碳酸鹽的堿溶液，也降低了鋁和鐵離子的活性，有利于磷酸鋁和磷酸鐵的提取。此外，碳酸氫鈉堿溶液中存在著OH-、HCO3-、CO32-等陰離子，有利于吸附態(tài)磷的置換，因此NaHCO3不僅適用石灰性土壤，也適用于中性和酸性土壤中速效磷的提取。待測液中的磷用鉬銻抗試劑顯色，使黃色的銻磷鉬雜多酸還原成為磷鉬藍進行比色測定。三、主要儀器及試劑配制1、儀器：往復(fù)振蕩機、分光光度計或比色計2、試劑（1）0.5mol/LNaHCO3浸提液：溶解NaHCO342.0g于800mL水中，以0.5mol/LNaOH溶液調(diào)節(jié)浸提液的pH至8.5。此溶液曝于空氣中可因失去CO2而使pH增高，可于液面加一層礦物油保存之、此溶液貯存于塑料瓶中比在玻璃中容易保存，若貯存超過一個月，應(yīng)檢查pH值是否改變。（2）硫酸鉬銻貯存液：取蒸餾水400mL于1000ml燒杯中，將燒杯浸在冷水中。緩慢地加入208.3mL濃H2SO4，邊加邊攪拌，并將其冷卻到室溫。另稱取鉬酸銨[（NH4）6Mo7O24?4H2O]20g，溶于約60°C的200ml蒸餾水里，冷卻。然后將硫酸溶液徐徐倒入鉬酸銨溶液中，不斷攪拌。再加入100ml0.5%酒石酸銻鉀溶液（取酒石酸氧銻鉀0.5g,溶解于100mL水中），用蒸餾水稀釋至1000ml，充分搖勻，貯存于棕色瓶中。（3）鉬銻抗混合顯色劑：臨用前（當(dāng)天），稱取左旋抗壞血酸（C6H8O5，化學(xué)純）1.5g，溶于100mL鉬銻混合液中，混勻，此即為鉬銻抗混合顯色劑。有效期24小時，若貯存在冰箱中則有效期更長。（4）磷標(biāo)準溶液：準確稱取在45C烘箱中烘干4—8小時的磷酸二氫鉀（分析純）0.2197g于小燒杯中，以少量水溶解，將溶液全部洗入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度，充分搖勻。此溶液即為含50ppm的磷基準溶液。吸取該標(biāo)液50mL，稀釋至500mL，即為5ppm的磷標(biāo)準溶液（此溶液不能長期保存）。比色時按標(biāo)準曲線系列配制。操作步驟稱取通過20目篩子的風(fēng)干土樣2.5g（精確到0.001g）于100mL三角瓶（具蓋）中，加入0.5mol/LNaHCO3浸提液50mL，塞緊瓶塞，在振蕩機上振蕩30min，立即用無磷濾紙過濾，濾液承接于100mL三角瓶中。吸取濾液10mL（含磷量高時吸取2.5?5.0mL，同時應(yīng)補加0.5mol/LNaHCO3溶液至10mL）于50mL容量瓶中，加硫酸鉬銻抗混合顯色劑5ml，充分搖勻，排出二氧化碳后加水定容至刻度。放置30min后，用880nm波長進行比色。以空白液的吸收值為0，讀出待測液的吸收值（A）。磷標(biāo)準曲線繪制:分別準確吸取5ppm標(biāo)準溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于50mL容量瓶中，再加入0.5mol/LNaHCO310mL，加硫酸鉬銻抗混合顯色劑5ml，加水定容，搖勻。同待測液一樣進行比色，繪制標(biāo)準曲線。最后溶液中磷的濃度分別為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5pg/mLP。結(jié)果計算土壤中有效磷（P）含量（mg/Kg）=（pXVXts/mX103Xk）X1000式中：p——從工作曲線上查得P得質(zhì)量濃度（pg/mL）；V顯色時定容體積（mL）；ts——為分取倍數(shù)（即浸提液總體積與顯色對吸取浸提液體積之比）；m——風(fēng)干土質(zhì)量（g）；k——將風(fēng)干土換算成烘干土質(zhì)量的系數(shù)；103——換算系數(shù)，將pg換算成mg；1000——換算成每kg含P量.五、作業(yè)根據(jù)以下公式計算土壤中速效磷的含量_顯色液磷mgkg-1數(shù)X顯色液體積X分取倍數(shù)土壤中速效磷mgkg-1=烘干土重（克）顯色液磷mgkg-1數(shù)：從工作曲線查