基因組概論型題：.一個典型的基因不包括（）增強子'非編碼區(qū)'非編碼區(qū)啟始密碼子終止密碼子.基因序列中保守性最高的序列（ ）內(nèi)含子外顯子整個基因'非編碼區(qū)'非編碼區(qū).基因組最大的生物（）人某些藻類某些細(xì)菌某些顯花植物和兩棲類動物某些哺乳動物.基因總數(shù)最多的生物（）人藻類水稻顯花植物和兩棲類動物某些哺乳動物研究的主要內(nèi)容不包括（）物理圖圖連鎖圖序列圖遺傳圖.模式生物基因組計劃不包括（ ）秀麗線蟲釀酒酵母黑腹果蠅小鼠.大鼠.后基因組計劃的主要目標(biāo)（）基因功能比較基因功能鑒定基因組測序基因數(shù)據(jù)分析基因結(jié)構(gòu)型題：1.基因編碼的功能產(chǎn)物（）多肽蛋白質(zhì)某些小分子基因組學(xué)（ ）研究的內(nèi)容包括（）基因組作圖核苷酸序列分析基因定位基因功能分析疾病基因定位編.功能基因組學(xué)的主要特征。（）高精度高通量大規(guī)模^算機分析高分辯率名詞解釋：.開放閱讀框.密碼子偏愛值矛盾4.基因組學(xué)問答題：.簡述基因的特點和鑒別標(biāo)準(zhǔn)。.簡述基因組學(xué)研究對醫(yī)學(xué)的影響。參考答案一、型題：二、型題：三、名詞解釋：開放閱讀框（ ）是由始于起始密碼子并終于終止密碼子的一串密碼子組成的核苷酸序列。.在不同物種的基因中經(jīng)常為某種氨基酸編碼的只是其中的某一特定的密碼子這種現(xiàn)象稱密碼子偏愛 入編.生物體的進(jìn)化程度與基因組大小之間不完全成比例的現(xiàn)象稱為值矛盾?；蚪M學(xué)（ ）指對所有基因進(jìn)行基因組作圖（包括遺傳圖譜、物理圖譜、轉(zhuǎn)錄圖譜），核苷酸序列分析，基因定位和基因功能分析的一門科學(xué)。五、問答題：對于數(shù)量很少的編碼 、 和某些小分子 的基因，我們較易通過核酸序列加以判斷。而對于數(shù)量極大的蛋白質(zhì)編碼基因，目前可根據(jù)其特點使用五項標(biāo)準(zhǔn)來鑒別：①開放閱讀框（ ）；②序列特征和密碼子偏愛；③序列保守性；④轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物；⑤基因失活。但這些標(biāo)準(zhǔn)使用起來卻往往會遇到一些困難。.基因組學(xué)研究成果惠澤最多的莫過于醫(yī)學(xué)，基因組學(xué)將改變整個醫(yī)學(xué)是必然的趨勢。人類基因組中所有基因及其表達(dá)產(chǎn)物種類的確認(rèn)和功能解析，野生型基因或突變型基因及其表達(dá)產(chǎn)物與疾病的關(guān)系的研究，將會大大加快加深人們對疾病分子機理的認(rèn)識，并描繪出能準(zhǔn)確用于每一種疾病的預(yù)測、診斷及預(yù)后的基因或蛋白質(zhì)指紋圖譜，將為藥物的研究提供更多更有效的作用靶點。人類個體之間 序列差異的研究，基因芯片與蛋白質(zhì)芯片技術(shù)及快速測序技術(shù)等的發(fā)展和普及，將使基因組和蛋白質(zhì)組范圍內(nèi)的快速、準(zhǔn)確的分子診斷成為現(xiàn)實，人們將因此最大限度地了解自身對環(huán)境和疾病的易感性，增進(jìn)健康，延長壽命。醫(yī)生將根據(jù)每個人的“基因特點”開出最優(yōu)化的個體化處方。另外，基因組學(xué)的成就將使基因治療更為切實可行。隨著更安全更有效的載體的研制（這只是時間問題），基因治療終究會被人們接受并得到普及。蛋白質(zhì)組學(xué)與基因組學(xué)相輔相成，優(yōu)勢互補。原核生物基因組型題：.下列敘述哪項是錯誤的（ ）原核生物基因組具有操縱子結(jié)構(gòu)原核生物結(jié)構(gòu)基因是斷裂基因原核生物基因組中含有插入序列原核生物基因組中含有重復(fù)順序原核生物結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為多順反子型.可以自我轉(zhuǎn)移的質(zhì)粒，其分子量一般在（ ）X以上X以下X與X之間X以下X以上.下列哪項不符合轉(zhuǎn)位因子的含義（ ）轉(zhuǎn)位因子是 重組的一種形式可在質(zhì)粒與染色體之間移動的 片段轉(zhuǎn)座子是轉(zhuǎn)位因子的一個類型可移動的基因成分能在一個 分子內(nèi)部或兩個 分子之間移動的片段.質(zhì)粒的主要成分是（ ）多糖蛋白質(zhì)氨基酸衍生物分子脂類.下列哪項不能被列入可移動基因的范疇（ ）插入序列質(zhì)粒染色體轉(zhuǎn)座子可轉(zhuǎn)座噬菌體.大腸桿菌類核結(jié)構(gòu)的組成是（ ）雙鏈B.RNA蛋白質(zhì)支架蛋白支架蛋白雙鏈.以下哪項描述是錯誤的（ ）細(xì)菌是單細(xì)胞生物細(xì)菌是原核生物細(xì)菌生長快個體小細(xì)菌以有絲分裂的方式增殖細(xì)菌無細(xì)胞核結(jié)構(gòu).操縱子結(jié)構(gòu)不存在（ ）細(xì)菌基因組中病毒基因組中真核生物基因組中大腸桿菌基因組中原核生物基因組中9下.列哪項敘述不正確（ ）質(zhì)粒的主要特征是帶有耐藥性基因質(zhì)粒又稱抗藥性質(zhì)粒質(zhì)?？僧a(chǎn)生大腸桿菌素質(zhì)粒是一種游離基因質(zhì)粒在基因克隆中應(yīng)用最多10下.列說法正確的是（ ）質(zhì)粒的主要成分是質(zhì)粒的復(fù)制依賴于宿主細(xì)胞質(zhì).宿主細(xì)胞離開了質(zhì)粒就不能生存質(zhì)粒的存在對宿主細(xì)胞沒有任何影響不同類群的質(zhì)粒不能共存于同一菌株六、 型題：基因重疊現(xiàn)象類核結(jié)構(gòu)質(zhì).斷裂基因質(zhì)粒可移動基因成分TOC\o"1-5"\h\z.原核生物具有（ ）.真核生物基因是（ ）.病毒基因組存在（ ）.轉(zhuǎn)座因子是（ ）.染色體以外的遺傳物質(zhì)是（ ）七、型題：1.下列哪些屬于染色體以外的遺傳因子（ ）轉(zhuǎn)座子病毒核酸質(zhì).細(xì)菌的質(zhì)粒高等植物的葉綠體轉(zhuǎn)位因子插入序列.真核生物的線粒體2原.核生物基因組的特征包括（ ）具有類核結(jié)構(gòu)只有一個 復(fù)制起點有大量的基因重疊現(xiàn)象存在可移動基因成分基因組中有重復(fù)序列存在結(jié)構(gòu)基因多數(shù)是多拷貝的.廣泛存在操縱子結(jié)構(gòu).原核生物基因組與真核生物基因組的區(qū)別有（）編碼序列所占的比例^操^子結(jié)構(gòu)重復(fù)序列內(nèi)含子細(xì)胞核結(jié)構(gòu).復(fù)制起點的個數(shù).質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)特點有（）.以環(huán)狀雙鏈分子存在質(zhì)粒 有超螺旋結(jié)構(gòu)以環(huán)狀單鏈 分子存在質(zhì)粒 有半開環(huán)結(jié)構(gòu)以環(huán)狀雙鏈 分子存在質(zhì)粒 有線性結(jié)構(gòu).以線性雙鏈^子存在.質(zhì)粒按功能分類主要有（）接合型質(zhì)粒型質(zhì)粒松弛型質(zhì)?？梢苿有唾|(zhì)粒型質(zhì)粒.質(zhì)粒有關(guān)質(zhì)粒敘述正確的是（）質(zhì)粒帶有抗性轉(zhuǎn)移因子質(zhì)粒又稱耐藥性質(zhì)粒質(zhì)粒帶有抗性決定因子質(zhì)粒能決定細(xì)菌的性別質(zhì)粒具有自我轉(zhuǎn)移能力.質(zhì)粒能進(jìn)行自我復(fù)制.質(zhì)粒的生物學(xué)性質(zhì)有（）質(zhì)粒攜帶的遺傳性狀也能被轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的復(fù)制可獨立于宿主細(xì)胞質(zhì)粒對宿主細(xì)胞的生存是必需的.質(zhì)粒帶有選擇性標(biāo)志質(zhì)粒有不相容性.質(zhì)粒可以與染色體發(fā)生整合.細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移的方式有（ ）接合轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)座名詞解釋：1.質(zhì)粒2.類核3.轉(zhuǎn)座4.基因組5.基因重疊6.質(zhì)粒的不相容性問答題：.敘述原核生物基因組的結(jié)構(gòu)特征。.簡述原核生物的類核組成。描述質(zhì)粒 的結(jié)構(gòu)特點。.試述質(zhì)粒的類型有哪些？.簡述原核生物轉(zhuǎn)座子的類型及特點。.通過轉(zhuǎn)座可引起哪些遺傳效應(yīng)？參考答案一、型題：1.B2.E3.A4.D5.C6.E7二、型題：3C.4A.E5.D三、型題：四、名詞解釋：1．質(zhì)粒：細(xì)菌染色體以外，能獨立復(fù)制并穩(wěn)定遺傳的共價閉合環(huán)狀（ ， ）分子稱為質(zhì)粒 s類核：原核生物基因組 通常位于菌細(xì)胞的中央，與支架蛋白和 結(jié)合在一起，以復(fù)合體的形式存在，經(jīng)高度盤旋聚集形成一個較為致密的區(qū)域，稱為類核（e轉(zhuǎn)座：轉(zhuǎn)座（ ）是指遺傳物質(zhì)被轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象。這種轉(zhuǎn)移可以發(fā)生在同一染色體中也可以發(fā)生在不同染色體之間，被轉(zhuǎn)移的片段稱為轉(zhuǎn)座因子（或轉(zhuǎn)座元件）?；蚪M：基因組（ ）是一個細(xì)胞或一個生物體中的全套遺傳物質(zhì)。.基因重疊：（ ）,指基因組 中某些序列被兩個或兩個以上的基因所共用。質(zhì)粒的不相容性：同一類群的不同質(zhì)粒通常不能在同一菌株內(nèi)穩(wěn)定共存，當(dāng)細(xì)胞分裂時就會分別進(jìn)入不同的子代細(xì)胞，這種現(xiàn)象叫做質(zhì)粒的不相容性（ t五、問答題：.在原核生物基因組中只有一個 復(fù)制起點。基因組通常是由一條環(huán)狀雙鏈（ ，）分子組成?；蚪M 與支架蛋白和 結(jié)合在一起，以復(fù)合體的形式存在。廣泛存在操縱子結(jié)構(gòu)。操縱子結(jié)構(gòu)是原核生物基因組的功能單位，在原核基因調(diào)控中具有普遍的意義。原核生物的結(jié)構(gòu)基因多數(shù)是單拷貝的并且結(jié)構(gòu)基因中沒有內(nèi)含子成分。編碼順序一般不重疊。具有編碼同工酶的不同基因?；蚪M中編碼區(qū)所占比例為 ％，不編碼區(qū)中常常含有基因表達(dá)調(diào)控的序列?；蚪M 分子中存在多種功能的識別區(qū)域，這些區(qū)域經(jīng)常有反向重復(fù)序列存在，并能形成特殊的結(jié)構(gòu)。原核生物基因組存在著可移動的 序列這些可移動的 序列，通過不同的轉(zhuǎn)移方式發(fā)生基因重組，使生物體更適應(yīng)環(huán)境的變化。?原核生物與真核生物的主要區(qū)別在細(xì)胞核上。原核生物沒有典型的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，基因組 位于細(xì)胞中央的核區(qū)，沒有核膜將其與細(xì)胞質(zhì)隔開，但能在蛋白質(zhì)的協(xié)助下，以一定的組織形式盤曲、折疊包裝起來，形成類核（ ）也稱擬核。類核的中央部分由 和支架蛋白（ ）組成，外圍是雙鏈閉環(huán)的超螺旋 A在超螺旋結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，分子再扭結(jié)成許多活結(jié)樣或花瓣樣的放射狀結(jié)構(gòu)的環(huán)。每個環(huán)形的活結(jié)狀結(jié)構(gòu)代表一個結(jié)構(gòu)域，在各結(jié)構(gòu)域中呈負(fù)超螺旋狀態(tài)。每個 環(huán)是一個相對獨立的功能區(qū)，可以獨立完同區(qū)域的基因表達(dá)與調(diào)控。在類核中％為，其余為 和蛋白質(zhì)。如果用 酶處理后可使基因組鏈斷裂；如果用 酶或蛋白酶處理類核，則類核變得松散，不能維持 鏈的折疊結(jié)構(gòu)，這表明 和蛋白質(zhì)對維持類核分子的折疊以及形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)是必不可少的。.多數(shù)細(xì)菌來源的質(zhì)粒核酸是環(huán)狀雙鏈 分子，沒有游離的末端，每條鏈上的核苷酸通過共價鍵頭尾相連。質(zhì)粒分子通常具有三種不同的構(gòu)型。當(dāng)其兩條核苷酸鏈均保持完整環(huán)形結(jié)構(gòu)時，為共價閉合環(huán)狀 分子，這樣的 常以超螺旋狀態(tài)存在；如果兩條鏈中只有一條鏈保持完整環(huán)形結(jié)構(gòu)，另一條鏈出現(xiàn)一至數(shù)個缺口時，為半開環(huán) ；若兩條鏈均有缺口并發(fā)生斷裂則成為線性 分子。?根據(jù)細(xì)菌染色體對質(zhì)粒復(fù)制的控制程度是否嚴(yán)格可將質(zhì)粒分為：嚴(yán)緊型質(zhì)粒和松弛型質(zhì)粒。按轉(zhuǎn)移方式分為：接合型質(zhì)粒、可移動型質(zhì)粒、自傳遞型質(zhì)粒。按質(zhì)粒大小分為：小型質(zhì)粒、大型質(zhì)粒。按質(zhì)粒的宿主范圍分為：窄宿主譜型質(zhì)粒、廣宿主譜型質(zhì)粒。按質(zhì)粒的功能分為：質(zhì)粒、質(zhì)粒、質(zhì)粒。TOC\o"1-5"\h\z.⑴插入序列（ ）長度約 ~,由一個轉(zhuǎn)位酶基因及兩側(cè)的反向重復(fù)序列（ ~）組成。反向重復(fù)序列的對稱結(jié)構(gòu)使可以雙向插入（正向插入或反向插入）靶位點。并在插入后于兩側(cè)形成一定長度（ ~ ）的順向重復(fù)序列稱靶序列（ ）的轉(zhuǎn)位頻率為 /拷貝，即在一個世代的 細(xì)菌中有次插入。⑵轉(zhuǎn)座子（ ）是一類復(fù)雜的轉(zhuǎn)位因子。比大，約 ~ 除了攜帶有關(guān)轉(zhuǎn)座的必需基因外，還含有能決定宿主菌遺傳性狀的基因，主要是抗生素和某些藥物的抗性基因，轉(zhuǎn)座子中的轉(zhuǎn)位酶稱為轉(zhuǎn)座酶（ 0其功能是介導(dǎo)轉(zhuǎn)座子從一個位點轉(zhuǎn)座到另一個位點，或從一個復(fù)制子轉(zhuǎn)座到另一個復(fù)制子，其轉(zhuǎn)座過程與相似。⑶噬菌體是一類具有轉(zhuǎn)座功能的溫和性噬菌體。溫和性噬菌體有多種，如大腸桿菌人噬菌體、大腸桿菌 -和噬菌體等。這類噬菌體具有整合能力，可以整合到細(xì)菌染色體中去，也稱可轉(zhuǎn)座的噬菌體（ ）。當(dāng)它們感染細(xì)菌后，其溶源性整合和裂解周期的復(fù)制均以轉(zhuǎn)座方式進(jìn)行，但轉(zhuǎn)座位點是隨機的。.⑴引起突變轉(zhuǎn)位可能引起多種基因突變。當(dāng)轉(zhuǎn)位因子插入一個基因內(nèi)部，會引起這個基因的插入失活；當(dāng)插入多順反子前端的基因中時，可引起下游的所有基因停止轉(zhuǎn)錄，因為轉(zhuǎn)位因子中含P依賴的轉(zhuǎn)錄終止信號；當(dāng)插入染色體或質(zhì)粒中時，常引起缺失和倒位突變。⑵引入新的基因在插入位點上引入新的基因，如含有抗藥基因質(zhì)粒的轉(zhuǎn)位因子，轉(zhuǎn)位到染色體中時，可在該部位出現(xiàn)抗藥性基因。若將帶有 質(zhì)粒的細(xì)菌與不含質(zhì)粒的帶有轉(zhuǎn)座子的細(xì)菌進(jìn)行接合結(jié)果產(chǎn)生了 的細(xì)菌，并且能夠在含有氨芐青霉素及卡那霉素的培養(yǎng)板上生長。經(jīng)過轉(zhuǎn)位作用，在這種細(xì)菌內(nèi)產(chǎn)生 及的質(zhì)粒，經(jīng)過再次接合作用，即可產(chǎn)生含 質(zhì)粒細(xì)菌。⑶引起生物進(jìn)化基因重排經(jīng)常發(fā)生，轉(zhuǎn)座作用是基因重排的重要機理之一，如通過轉(zhuǎn)座，可將兩個本來相隔遙遠(yuǎn)的基因靠攏，從而進(jìn)行協(xié)調(diào)的控制作用，這兩段基因順序經(jīng)過轉(zhuǎn)座作用連接在一起有可能在進(jìn)化過程中產(chǎn)生新的蛋白質(zhì)。真核生物基因組一、選擇題：1下.列哪一個調(diào)控序列在斷裂基因側(cè)翼序列上不存在啟動子增強子終止子外顯子2下.列不屬于真核生物染色體基因組一般特征的是基因組龐大線狀雙鏈 和二倍體編碼區(qū)遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于非編碼區(qū)重復(fù)序列組.蛋白家族中核小體組蛋白組蛋白包括5.斷裂基因6.基因家族.假基因.端粒酶.后基因組研究10遺.傳圖譜11單.核苷酸多態(tài)性甲基特異性三、問答題：.真核生物染色體基因組的一般特點？.真核生物基因組含有的重復(fù)序列有哪些？線粒體與核 有哪些不同之處？.何謂線粒體病？簡述線粒體病的遺傳學(xué)分類。.假基因的分類及其發(fā)生機理。簡述島與 甲基化調(diào)控。作為一種遺傳標(biāo)記，人類短串聯(lián)重復(fù)序列（ ）的主要用途有哪幾個方面？人類單核苷酸的多態(tài)性（ ）的特點及主要用途有哪幾個方面？.人類基因組研究的主要內(nèi)容是什么？答案一、問答題線粒體 與核 主要不同之處有非孟德爾的母系遺傳低突變率異質(zhì)性和復(fù)制分離閾值效應(yīng)5能.夠引起遺傳性視神經(jīng)病的線粒體病遺傳學(xué)分類類型是點突變的大規(guī)模缺失的大規(guī)模插入源于核 缺陷引起 缺失下列哪項與短串聯(lián)重復(fù)序列 位點的不穩(wěn)定性相關(guān)脆性綜合癥、重癥肌無力和 舞蹈癥脆性綜合癥、重癥肌無力和 綜合癥綜合癥、慢性進(jìn)行性眼外肌癱瘓和舞蹈癥綜合癥、慢性進(jìn)行性眼外肌癱瘓和綜合癥二、名詞解釋：.外顯子與內(nèi)含子.單拷貝基因單順反子微衛(wèi)星二、名詞解釋1外.顯子與內(nèi)含子:斷裂基因的內(nèi)部非編碼序列稱為內(nèi)含子，編碼序列稱為外顯子。2單.拷貝基因:在基因組中僅出現(xiàn)一次的基因稱單拷貝基因，多為編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。單順反子 真核生物中每一個基因單獨構(gòu)成一個轉(zhuǎn)錄單位轉(zhuǎn)錄而產(chǎn)生的 ，僅編碼一種蛋白質(zhì)。微衛(wèi)星 ：存在于常染色體由~個核苷酸長的重復(fù)序列組成，又稱簡單串聯(lián)重復(fù)序列，以AT 較常見，重復(fù)次數(shù)多為~次，總長度一般在 以下。5斷.裂基因：細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)基因并非全由編碼序列組成，而是在編碼序列中插入了非編碼序列，這類基因被稱為斷裂基因。6基.因家族：一組功能相似且核苷酸序列具有同源性的基因，可能由某一共同祖先基因經(jīng)重復(fù)和突變產(chǎn)生，這一組基因就稱為基因家族。7假.基因:基因家族中一類與具正常功能的基因序列相似，但無轉(zhuǎn)錄功能或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物無功能的基因稱為假基因。端粒酶：一種由蛋白質(zhì)和 兩部分組成的以自身的 為模板，可合成端粒重復(fù)序列而延長端粒的特殊逆轉(zhuǎn)錄酶。9后.基因組研究：以全基因組測序為目標(biāo)的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)和以基因功能鑒定為目標(biāo)的功能基因組學(xué)，又稱后基因組研究。10遺.傳圖譜：是指通過計算連鎖遺傳標(biāo)志之間的重組頻率，得到基因線性排列從而確定相對距離的圖譜，又稱連鎖圖。11單.核苷酸多態(tài)性：因單個堿基的變異（主要是置換，也有缺失和插入）引起的 序列多態(tài)性，在特定核苷酸位置上存在兩種不同的堿基，其中最少一種在群體中的頻率不小于1%。甲基特異性 ： 經(jīng)亞硫酸鈉處理后，非甲基化的轉(zhuǎn)變?yōu)椋谆陌奏け３植蛔?，利用兩套不同的弓I物擴增可判斷甲基化是否發(fā)生的一種特異性 。三、問答題1答案：①真核生物基因組遠(yuǎn)大于原核生物基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大，具有多個復(fù)制起點；②真核細(xì)胞的基因組都是線狀雙鏈，而不是環(huán)狀雙鏈分子；③基因組中非編碼區(qū)多于編碼區(qū)；④真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因，由外顯子和內(nèi)含子鑲嵌而成；⑤存在大量重復(fù)序列。2答案：（一）高度重復(fù)序列重復(fù)頻度5。根據(jù)衛(wèi)星 的長度，又可分成種：衛(wèi)星 、小衛(wèi)星 、微衛(wèi)星 A（二）中度重復(fù)序列這類重復(fù)序列主要由比較大的片段（由 到幾千）串聯(lián)重復(fù)組成，分散在整個基因組中，重復(fù)頻度不等，如家族、 、 和組蛋白等。答案：（一）非孟德爾的母系遺傳因位于細(xì)胞質(zhì)中表現(xiàn)為嚴(yán)格的母性遺傳不服從孟德爾遺傳，絕大部分 是通過卵細(xì)胞遺傳。（二）高突變率突變率約為 的~ 倍，此外與有毒物質(zhì)的結(jié)合頻率比核 高數(shù)倍至數(shù)十倍。（三）異質(zhì)性和復(fù)制分離異質(zhì)性即突變 與野生型 以不同的比例共存于一個細(xì)胞內(nèi)的現(xiàn)象。復(fù)制分離即在細(xì)胞分裂的復(fù)制過程中,突變的和野生型的 隨機進(jìn)入子細(xì)胞的過程，復(fù)制分離的結(jié)果使突變 雜合體向突變純合或野生純合方向轉(zhuǎn)變但因突變復(fù)制具有優(yōu)勢,故易產(chǎn)生突變積累，突變積累的程度不同,突變 在群體中的多態(tài)性程度也不同。（四）閾值效應(yīng)每個細(xì)胞的 有多種拷貝，而一個細(xì)胞編碼基因的表現(xiàn)型依賴于一個細(xì)胞內(nèi)突變型 和野生型的相對比例， 突變導(dǎo)致氧化磷酸化水平降低當(dāng)能量降低到維持組織正常功能所需能量的最低值時即達(dá)到了表達(dá)的能量閾值，可引起某組織或器官的功能異常而出現(xiàn)臨床癥狀，這就是閾值效應(yīng)。（五）半自主復(fù)制與協(xié)同作用雖有自我復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和編碼功能，但該過程還需要數(shù)十種 編碼的酶參加，因此 基因的表達(dá)同時也受 的制約，兩者具有協(xié)同作用。答案：線粒體?。?）是指由于線粒體呼吸鏈功能不良所導(dǎo)致的臨床表現(xiàn)多樣化的一組疾病。臨床表現(xiàn)常見為眼瞼下垂、外眼肌麻痹、視神經(jīng)萎縮、神經(jīng)性耳聾、痙攣或驚厥、癡呆、偏頭痛、類卒中樣發(fā)作等。從核基因缺陷和線粒體基因缺陷的角度對線粒體病進(jìn)行遺傳學(xué)分類可分為三種類型：點突變， 的大規(guī)模缺失或插入和源于核 缺陷引起 缺失。答案：與正常功能的基因序列相似，但無轉(zhuǎn)錄功能或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物無功能的基因稱假基因 。根據(jù)是否保留相應(yīng)功能基因的間隔序列（如內(nèi)含子）,假基因分兩大類:一類保留了間隔序列，稱為非加工假基因 ，通常因基因的復(fù)制修飾,如點突變、插入、缺失和移碼突變而導(dǎo)致復(fù)制后的基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯時出現(xiàn)異常,喪失正常功能，它與功能基因一般在同一染色體上也稱復(fù)制型假基因 g假基因中大多數(shù)則缺少間隔序列的稱為已加工假基因主要是轉(zhuǎn)錄過程中 以的方式重新整合進(jìn)入基因組（很可能發(fā)生在生殖細(xì)胞中），在長期進(jìn)化選擇過程中因為隨機突變積累而喪失功能，通常這種假基因無內(nèi)含子，兩邊有小的側(cè)翼定向重復(fù)序列,端多具多聚腺苷酸尾。答案:大約有一半的人類基因富含 的順序稱為 島, 島常位于轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)或其附近，主要存在于看家基因和一些組織特異性表達(dá)基因。在正常組織，除印記基因和失活的染色體外，包括啟動子區(qū)在內(nèi)的基因5’端 島大部分是非甲基化的。 甲基化與基因表達(dá)呈負(fù)相關(guān)， 甲基化調(diào)控基因表達(dá)直接的機制可能是因為甲基從 分子的大溝中突出，阻止了轉(zhuǎn)錄因子與基因相互作用，還可能直接抑制聚合酶活性而抑制基因的表達(dá)。間接的機制包括兩種類型：①與甲基化 結(jié)合蛋白結(jié)合；②改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)，這都間接阻礙轉(zhuǎn)錄因子與 結(jié)合而抑制轉(zhuǎn)錄。 甲基化對胚胎發(fā)育非常重要，與染色體失活，基因組印記，特別是腫瘤密切相關(guān)。7答案：主要用途①人類基因遺傳圖譜的制作。②目的基因篩選和基因診斷。通常目的基因若與 位點有連鎖關(guān)系則其位置與位點鄰近故通過對 附近區(qū)域克隆測序就可能發(fā)現(xiàn)目的基因。通過家系和對照研究,運用連鎖和相關(guān)分析,可以找到與疾病高度相關(guān)的 位點。③法醫(yī)學(xué)個體識別和親權(quán)鑒定。法醫(yī)案例中對于量極少和降解嚴(yán)重的生物檢材通過進(jìn)行位點擴增并將幾個 位點聯(lián)合起來分析可得到相當(dāng)高的累積個體識別率和父權(quán)排除率。因而 用于法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著廣闊的前景，為司法偵案、破案提供有利的科學(xué)依據(jù)。8答案：疾病的連鎖分析與基因的定位：包括復(fù)雜疾病（如骨質(zhì)疏松癥、糖尿病、心血管疾病、精神性紊亂、各種腫瘤等）的基因定位、關(guān)聯(lián)分析，并可用于遺傳病的單倍型診斷。指導(dǎo)用藥和藥物設(shè)計：多態(tài)性能充分反映個體間的遺傳差異。通過研究遺傳多態(tài)性與個體對藥物敏感性或耐受性的相關(guān)性,可以闡明遺傳因素對藥物效用的影響,從而對醫(yī)生針對性的用藥和藥物的開發(fā)提供指導(dǎo)和依據(jù)。用于進(jìn)化和種群多樣性的研究：生物界的進(jìn)化及進(jìn)化過程中物種多樣性的形成與基因組的突變和突變的選擇密切相關(guān),構(gòu)建整個基因組的圖譜對于直接研究人類的起源、進(jìn)化具極大意義。對比人群之間 圖譜的異同情況可以對人類的起源、遷移等作出估計,從而理清人類進(jìn)化過程中源與流的問題。9答案：人類基因組研究主要包括兩方面的內(nèi)容：以全基因組測序為目標(biāo)的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)和以基因功能鑒定為目標(biāo)的功能基因組學(xué)，又稱后基因組研究。結(jié)構(gòu)基因組學(xué)代表基因組分析的早期階段，通過基因作圖、核苷酸序列分析確定基因組成、基因定位的科學(xué)，包括規(guī)?；販y定蛋白質(zhì)、 及其它生物大分子的三維結(jié)構(gòu)等內(nèi)容以獲得一幅完整的、能夠在細(xì)胞中定位以及在各種生物學(xué)代謝途徑、生理途徑、信號傳導(dǎo)途徑中全部蛋白質(zhì)在原子水平的三維結(jié)構(gòu)全息圖。功能基因組學(xué)代表基因分析的新階段，是利用結(jié)構(gòu)基因組學(xué)提供的信息研究基因功能，使人們有可能在基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子細(xì)胞生物學(xué)以致生物體整體水平上理解生命的原理。對疾病的防治和機理的闡明有重要應(yīng)用意義。病毒基因組十、 型題：只含小分子量 而不含蛋白質(zhì)的病毒稱（）TOC\o"1-5"\h\z類病毒（ ）衛(wèi)星（ ）類病毒（ ）朊病毒（ ）擬病毒（ ）2.只含蛋白質(zhì)而不含核酸的的病毒稱（）類病毒（ ）衛(wèi)星（ ）類病毒（ ）朊病毒（ ）擬病毒（ ）病毒基因組的帽子結(jié)構(gòu)與第二個核苷酸相連的化學(xué)鍵（）A.＇，5＇-三磷酸二酯鍵B.＇，3＇-三磷酸二酯鍵C.＇，5＇-磷酸二酯鍵D.＇，35＇-磷酸二酯鍵以上都不是基因組是（）完全雙鏈 分子不完全雙鏈 分子完全雙鏈 分子不完全雙鏈 分子單鏈分子具 模板活性的病毒基因組是（）正鏈 病毒負(fù)鏈 病毒負(fù)鏈 病毒逆轉(zhuǎn)錄科的正鏈 病毒正鏈 病毒（逆轉(zhuǎn)錄科的正鏈病毒除外）.關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄病毒敘述不正確的是（ ）迄今發(fā)現(xiàn)的 腫瘤病毒均屬 逆轉(zhuǎn)錄病毒嗜肝 病毒科屬 逆轉(zhuǎn)錄病毒。逆轉(zhuǎn)錄病毒 為正鏈病毒顆粒均攜帶逆轉(zhuǎn)錄酶TOC\o"1-5"\h\z前病毒 可以整合到宿主細(xì)胞染色體 中.逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組的結(jié)構(gòu)特點不包括（ ）‘端帽子結(jié)構(gòu)‘端尾兩端各有一個長末端重復(fù)序列（ ）編碼逆轉(zhuǎn)錄酶神經(jīng)酰胺酶分段基因組（ ）是指病毒基因組（）由數(shù)條不同的核酸分子組成由數(shù)條相同的核酸分子組成由數(shù)條互補的核酸分子組成由可分成不同功能區(qū)段的一個核酸分子組成以上都不對基因組序列的利用率（編碼基因效率）達(dá)（）的分子診斷主要是（）根據(jù)基因組序列設(shè)計特異性引物作根據(jù)基因組序列設(shè)計特異性引物作根據(jù)病毒膜蛋白作根據(jù)病毒核衣殼蛋白作根據(jù)病毒滴度十一、 型題：雙鏈單鏈雙鏈正鏈負(fù)鏈基因組是（）TOC\o"1-5"\h\z.流感病毒基因組是（ ）.人類免疫缺陷病毒的基因組（ ）十二、 型題：.述一個病毒基因組，應(yīng)涉及到（ ）核酸（或 ）的性質(zhì)核酸鏈的數(shù)量和核苷酸序列鏈末端的結(jié)構(gòu)編碼基因調(diào)控元件.病毒基因組末端重復(fù)序列結(jié)構(gòu)有（ ）粘性末端末端插入序列末端反向重復(fù)序列末端正向重復(fù)序列長末端重復(fù)序列TOC\o"1-5"\h\z.甲型流感病毒亞型的分型依據(jù)（ ）核衣殼蛋白（ i）基質(zhì)蛋白（ ,）血凝素（ ， ）的抗原性神經(jīng)酰胺酶（ n）的抗原性宿主種屬.逆轉(zhuǎn)錄病毒編碼的基本結(jié)構(gòu)基因（ ）（編碼核心蛋白）。（編碼逆轉(zhuǎn)錄酶等）（編碼 調(diào)節(jié)蛋白）（編碼 調(diào)節(jié)蛋白）基因（編碼包膜蛋白）基因組編碼的附加基因和調(diào)節(jié)基因（ ）H（IV-）1引起主要攻擊輔助性淋巴細(xì)胞導(dǎo)致免疫系統(tǒng)紊亂和免疫缺陷屬逆轉(zhuǎn)錄病毒使被感染的細(xì)胞喪失功能但不會死亡十三、名詞解釋：.重疊基因.分段基因組.抗原漂移前病毒十四、問答題：1.病毒的基本結(jié)構(gòu)成份主要有哪些？國際病毒分類委員會（ ）將病毒分成哪幾類？3.簡述長病毒末端重復(fù)序列的特點和作用。參考答案一、型題：1.C2.D3.A4.B5.E6.D7.E8.A9.C10.B二、型題：1.A2.E3.D三、型題：1.ABCD2E.ACD3E.CD4.AB5E.ABCD6E.ABCD四、名詞解釋：許多病毒基因組的一段 序列有兩個或兩個以上的開放讀碼框架，可以編碼兩種或兩種以上的多肽鏈，稱為重疊基因（ ）分段基因組（ ）是指病毒基因組由數(shù)條不同的核酸分子組成。分段基因組多見于正鏈 病毒、負(fù)鏈 病毒及雙鏈 病毒。7.當(dāng)宿主細(xì)胞同時感染兩種不同亞型的病毒時，毒株之間會發(fā)生基因重配現(xiàn)象，子代病毒可獲得兩個親代病毒的基因片段，導(dǎo)致子代病毒表面抗原發(fā)生變化，從而逃避機體免疫系統(tǒng)的攻擊，這種現(xiàn)象又稱為抗原漂移（ n當(dāng)逆轉(zhuǎn)錄病毒感染敏感細(xì)胞后，首先以其自身的 為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下合成 中間體，這種 分子稱原病毒或前病毒 （ ）。五、問答題：毒沒有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，由四種基本結(jié)構(gòu)成份組成：①由一種核酸 或 組成的病毒基因組。②由病毒基因組編碼的衣殼蛋白組成的衣殼。③來源于宿主細(xì)胞質(zhì)膜系統(tǒng)（細(xì)胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜或高爾基體膜）的包膜。④病毒顆粒中的其它內(nèi)容物，包括酶、核酸結(jié)合蛋白及金屬離子等。國際病毒分類委員會（ ）制定了《國際病毒分類與命名原則》。根據(jù)病毒的基因組組成及復(fù)制方式，可將病毒分為如下幾類：病毒（ ）第一組：雙鏈病毒（)第二組：單鏈病毒（II:ss)DN病毒（vi)ruses第三組：雙鏈病毒（III:d)sR第四組：正鏈病毒（IV:(+)s)第五組：負(fù)鏈病毒（V:(-)s)s與逆轉(zhuǎn)錄病毒（anscribi）ngVir第六組： 逆轉(zhuǎn)錄病毒（Transcribi）ngViruses第七組： 逆轉(zhuǎn)錄病毒（Transcribi）ngVirusesTOC\o"1-5"\h\z亞病毒因子（ ）衛(wèi)星（ ）類病毒（ ）朊病毒（ ）逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組 在逆轉(zhuǎn)錄后生成的雙鏈 中，兩端有長末端重復(fù)序列（ ， ）結(jié)構(gòu)。在結(jié)構(gòu)與功能上與上述重復(fù)序列不同。 中的重復(fù)序列只占一部分，另外還包括單一序列。,端的 包含許多特定的基因表達(dá)調(diào)控區(qū)域，是一組真核生物增強子和啟動子單位，而3＇端的 具有轉(zhuǎn)錄終止的作用。另外，逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組利用中的重復(fù)序列形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，在整合酶作用下整合入宿主細(xì)胞基因組內(nèi)。蛋白質(zhì)組學(xué)選擇題目前研究蛋白質(zhì)間相互作用最常采用的方法是 。__或質(zhì)譜分析 B二維凝膠電泳C酵母雙雜交技術(shù)D足紋分析目前進(jìn)行蛋白質(zhì)分離最有效的方法是 。___A質(zhì)譜分析B二維凝膠電泳C酵母雙雜交技術(shù)D足紋分析3．二維凝膠電泳是根據(jù)蛋白質(zhì)的 來_進(jìn)_行_分離的。A分子量和分子構(gòu)像B分子量和電荷C電荷和分子構(gòu)像D分子量4．質(zhì)譜分析技術(shù)主要是用來檢測蛋白質(zhì)的 。___A分子量B分子組成C分子構(gòu)像D分子大小5．下列技術(shù)中，不能用來檢測溶液中蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)是___A核磁共振B圓二色譜法C氫同位素交換法D小角中子衍射法.I足紋分析技術(shù)中， 工水解的是分子中的 。___A氫鍵 B磷酸二酯鍵C疏水鍵D肽鍵7.蛋白質(zhì)之間相互作用的形式主要包括 。___A分子和亞基的聚合B分子識別C分子自我裝配D多酶復(fù)合體E分子雜交名詞解釋蛋白質(zhì)組蛋白質(zhì)組學(xué)二維凝膠電泳質(zhì)譜技術(shù)凝膠滯后實驗問答題1.蛋白質(zhì)組學(xué)的研究特點有哪些？2.蛋白質(zhì)組學(xué)的研究內(nèi)容有哪些？3.目前在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中主要采用了哪些技術(shù)？4.等電聚焦凝膠電泳的原理是什么？簡述酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)缺點。答案：選擇題：名詞解釋：.蛋白質(zhì)組是指特定細(xì)胞、組織乃至機體作為一個生命單元中所擁有蛋白質(zhì)的集合，即生命體中攜帶的基因信息在某一時段所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。.蛋白質(zhì)組學(xué)是指對在特定的時間和環(huán)境下所表達(dá)的群體蛋白質(zhì)研究的一門學(xué)問。主要在蛋白質(zhì)水平上探索蛋白質(zhì)的表達(dá)模式、作用模式、功能機制、調(diào)節(jié)控制以及蛋白質(zhì)群體內(nèi)的相互作用。是在生物體或其細(xì)胞的整體蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行的，并從一個機體或一個細(xì)胞的蛋白質(zhì)整體活動來揭示生命的規(guī)律。.二維凝膠電泳是目前蛋白質(zhì)組研究中最有效的分離技術(shù)。它由兩向電泳組成，第一向以蛋白質(zhì)電荷差異為基礎(chǔ)進(jìn)行分離的等電聚焦凝膠電泳，第二向是以蛋白質(zhì)分子量差異為基礎(chǔ)的 聚丙烯酰胺凝膠電泳。.質(zhì)譜技術(shù)是樣品分子離子化后，根據(jù)不同離子間的質(zhì)量、電荷比值質(zhì)荷比， 差異來確定分子量的技術(shù)。.凝膠滯后實驗是近年來發(fā)展起來的用聚丙烯酰胺凝膠電泳直接分析核酸與蛋白質(zhì)結(jié)合的簡單、快速、敏感方法。通過蛋白質(zhì)與末端標(biāo)記的核酸探針特異性結(jié)合，電泳時這種復(fù)合物較無蛋白結(jié)合的探針在凝膠中的泳動速度要慢，即表現(xiàn)為_相對滯后。問答題：.①整體性②揭示生命的動態(tài)性過程③體現(xiàn)生命現(xiàn)象的復(fù)雜性2．蛋白質(zhì)組學(xué)的研究包括兩個方面：一是針對蛋白質(zhì)表達(dá)模式的研究，一是在蛋白質(zhì)功能模式方面的深入分析。.①蛋白質(zhì)的分離技術(shù)：二維凝膠電泳②蛋白質(zhì)的鑒定技術(shù)主要包括：質(zhì)譜技術(shù)、 降解分析技術(shù)、蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)分析技術(shù)③蛋白質(zhì)與核酸間相互作用的研究技術(shù):凝膠滯后實驗、I足紋分析、核酸一蛋白質(zhì)雜交實驗④蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間相互作用的研究技術(shù)：酵母雙雜交技術(shù)4．依據(jù)蛋白質(zhì)分子的凈電荷或等電點進(jìn)行分離的技術(shù)。在等電聚焦過程中，電場所采用的載體兩性電解質(zhì)含有脂肪族多氨基多羧酸可在電場中形成正極為酸性負(fù)極為堿性的連續(xù) 梯度，蛋白質(zhì)分子在一個載體兩性電解質(zhì) 形成的連續(xù)而穩(wěn)定的線性 梯度中電泳，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移到其等電點位置時，凈電荷為零，在電場中不再移動，因此可將各種不同等電點性質(zhì)的蛋白質(zhì)分離開來.酵母雙雜交系統(tǒng)所具有的優(yōu)點：①蛋白質(zhì)作為被研究的對象不用被純化；②檢測在活細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，可以在一定程度上反映體內(nèi)（細(xì)胞內(nèi)）的真實情況；③由于這一系統(tǒng)可以反映基因表達(dá)產(chǎn)物的累積效應(yīng)，因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間微弱或短暫的相互作用；④采用不同組織、器官、細(xì)胞類型和分化時期材料構(gòu)建文庫，可用于分析多種不同功能的蛋白。局限性：①雙雜交系統(tǒng)分析蛋白間的相互作用定位于細(xì)胞核內(nèi)，而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工如糖基化、二硫鍵形成等，這些反應(yīng)在核內(nèi)無法進(jìn)行。②由于某些蛋白本身具有激活轉(zhuǎn)錄功能或在酵母中表達(dá)時發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用，從而引起報告基因的表達(dá)，產(chǎn)生“假陽性”結(jié)果。③雙雜交只是反映蛋白質(zhì)間能發(fā)生作用的可能性，這種可能還必須經(jīng)過其他實驗驗證，尤其要與生理功能研究相結(jié)合，否則可能會誤入歧途。核酸的分離與純化一、選擇題真核生物染色體 主要以下列哪種形式存在A環(huán)狀單鏈分子B線性單鏈分子C環(huán)狀雙鏈分子D線性雙鏈分子E線性或環(huán)狀雙鏈分子［本題答案］C

紫外分光光度法對 進(jìn)行測定中，下列哪項是正確的A蛋白質(zhì)的最大吸收波長為B糖類為的光密度大約相當(dāng)于 0雙鏈C脂類紫外分光光度法對 進(jìn)行測定中，下列哪項是正確的A蛋白質(zhì)的最大吸收波長為B糖類為的光密度大約相當(dāng)于 0雙鏈C脂類為的光密度大約相當(dāng)于 0雙鏈D無機鹽為的光密度大約相當(dāng)于 3雙鏈E水大于［本題答案］A［本題答案］B在細(xì)胞核內(nèi)通常與下列哪種物質(zhì)結(jié)合主要存在于A細(xì)胞質(zhì)B線粒體C細(xì)胞核D溶酶體E內(nèi)質(zhì)網(wǎng)［本題答案］A在核酸的提取過程中，將整個操作過程的 盡可能控制在［本題答案人的二倍體細(xì)胞大約由多少堿基對（）組成10紫.外分光光度法可對核酸純度進(jìn)行鑒定，下列說法是正確的1純的比值為2純的比值為.31.109bp純的比值為.41.109bp純的比值為.511.09bp純的比值為［本題答案］ C［本題答案]B紫.外分光光度法測定核酸溶液選用的光波波長為通過凝膠電泳法可對 分子完整性進(jìn)行鑒定提示無的降解時應(yīng)6.在純化核酸時往往含有少量共沉淀的鹽，常用下列哪種濃度的乙醇洗滌去除A28S的熒光強度約為的2倍B18S的熒光強度約為的2倍C5S的熒光強度約為的倍D5S的熒光強度約為的倍E28S的熒光強度約為的倍［本題答案］A總經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳染色后觀察不到的是［本題答案］C7.在核酸的分離與純化過程中，不需去除的污染物是A蛋白質(zhì)B脂類C對后續(xù)實驗有影響的溶液和試劑D不需要的核酸分子E水［本題答案］ E［本題答案］A以下哪項有利于 的保存溶于中 在室溫可儲存數(shù)年加入少量溶于溶液加入少量 和在樣品中加入少量氯仿，可有效避免細(xì)菌污染［本題答案］ E［本題答案酚抽提法可用于高分子量 的分離純化，所用試劑分別有不同的功能，下列正確的是為陽離子去污劑，主要引起細(xì)胞膜的降解并能乳化脂質(zhì)和蛋白質(zhì)為二價金屬離子螯合劑，可促進(jìn)的活性蛋白酶 只可消化 類蛋白質(zhì)D酚可使蛋白質(zhì)變性沉淀無的 可有效地水解［本題答案］C15下.列哪種不是對核酸分子完整性進(jìn)行鑒定的方法A凝膠電泳法雜交E生物芯片技術(shù)［本題答案］ D下列哪種方法不是分離純化高分子量 的A酚抽提法B煮沸裂解法C甲酰胺解聚法D玻棒纏繞法E異丙醇沉淀法［本題答案］ B下列哪種不是從瓊脂糖凝膠中回收 片段的方法纖維素膜插片電泳法B電泳洗脫法C冷凍擠壓法D低熔點瓊脂糖挖塊回收法E漂洗法［本題答案］ E適合從瓊脂糖凝膠中回收 的 片段的方法是纖維素膜插片電泳法B非透析袋電泳洗脫法透析袋電泳洗脫法D壓碎與浸泡法E冷凍擠壓法［本題答案］ C適合從瓊脂糖凝膠中回收 的 片段的方法是纖維素膜插片電泳法B非透析袋電泳洗脫法透析袋電泳洗脫法D壓碎與浸泡法E冷凍擠壓法適合從聚丙烯酰胺凝膠中回收 片段的標(biāo)準(zhǔn)方法是纖維素膜插片電泳法B非透析袋電泳洗脫法透析袋電泳洗脫法D壓碎與浸泡法E冷凍擠壓法［本題答案］ D21大.多數(shù)質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)特點一般為單鏈線性雙鏈線性閉合環(huán)狀單鏈閉合環(huán)狀雙鏈雜交體［本題答案］ D目前使用較為廣泛的質(zhì)粒 小量提取的方法是牙簽少量制備法B小量一步提取法裂解法D堿裂解法E煮沸裂解法［本題答案］ D有關(guān)煮沸裂解法提取質(zhì)粒 的正確敘述是A該法是一種條件比較溫和的物理方法煮沸能完全滅活核酸內(nèi)酶不適用于大多數(shù) 菌株適用于菌株適用于 的質(zhì)粒 制備［本題答案］E法中在過量存在的下，超速離心后密度最大沉于管底的是A蛋白質(zhì)帶切口的環(huán)狀或線性D復(fù)合糖類閉環(huán)質(zhì)粒［本題答案］ C用柱層析法純化質(zhì)粒 時 的何種殘基與硅基質(zhì)結(jié)合A嘌呤B 磷酸鹽殘基C嘧啶D 糖基E氫離子［本題答案在純化時，常使用的水飽和酚的 值為［本題答案］B分離與純化 可采用下列哪種方法纖維素柱層析法纖維素液相結(jié)合離心法濾紙法纖維素柱層析法纖維素液相結(jié)合離心法［本題答案］A名詞解釋酶蛋白抑制劑本題答案 酶蛋白抑制劑（ ）是從人胎盤分離的一種蛋白質(zhì)可與多種 酶緊密結(jié)合形成非共價結(jié)合的等摩爾復(fù)合物，使 酶失活。2電.泳洗脫法本題答案電泳洗脫法是將待回收的 片段電泳出凝膠介質(zhì)，使其進(jìn)入一個便于回收的固定的小容積溶液中；再通過一些方法分離純化出 片段。目前主要有透析袋電泳洗脫法與非透析袋電泳洗脫法兩大類。本題答案指核酸溶液在 和 紫外波長下的吸光度的比值，根據(jù)比值來判斷核酸樣品有無蛋白質(zhì)和酚等的污染。問答題1.在核酸的分離和純化過程中，如何保持核酸的完整性？［本題答案］為了保證核酸的完整性，首先在操作過程中，應(yīng)盡量簡化操作步驟，減少各種破壞核酸的有害因素，包括物理、化學(xué)與生物學(xué)的因素。提取應(yīng)在~℃的條件下進(jìn)行；另外避免強力的機械剪切力對核酸的破壞。細(xì)胞內(nèi)或外來的核酸酶對核酸的生物降解，而破壞核酸的一級結(jié)構(gòu)，使用 、檸檬酸鹽并在低溫條件下操作，基本上就可以抑制 酶的活性；并盡可能地抑制 酶的活性。試述舉種質(zhì)粒 提取的方法及應(yīng)用。答案質(zhì)粒 提取的方法包括堿裂解法、煮沸裂解法和裂解法。）堿裂解法：在 存在的強堿性（ ~ ）的條件下，用強陽離子去垢劑破壞細(xì)胞壁和裂解細(xì)胞，并使宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)與染色體發(fā)生變性,釋放出質(zhì)粒A它是一種適用范圍很廣的方法，能從所有的大腸桿菌（ ）菌株中分離出質(zhì)粒，制備量可大可小。）煮沸裂解法：是將細(xì)菌懸浮于含 和溶菌酶的緩沖液中， 和溶菌酶能破壞細(xì)胞壁，再用沸水浴裂解細(xì)胞，使宿主細(xì)胞的蛋白質(zhì)與染色體 發(fā)生變性。對質(zhì)粒 因結(jié)構(gòu)緊密不會解鏈，當(dāng)溫度下降后， 質(zhì)粒可重新回復(fù)其超螺旋結(jié)構(gòu)，通過離心去除變性的蛋白質(zhì)和染色體,然后回收上清液中的質(zhì)粒 A本法只能用于小質(zhì)粒（小于 ）的小量或大量制備，適用于大多數(shù)從大腸桿菌（ ）菌株中分離出質(zhì)粒 A）裂解法：它是將細(xì)菌懸浮于等滲的蔗糖溶液中，用溶菌酶和處理以破壞細(xì)胞壁，再用裂解去壁細(xì)菌，從而溫和地釋放出質(zhì)粒到等滲溶液中，然后用酚氯仿抽提。適用于大質(zhì)粒的提取。簡述哺乳動物細(xì)胞基因組 抽提的主要方法有哪幾種？本題答案哺乳動物細(xì)胞基因組 抽提的主要方法有：酚提取法、甲酰胺解聚法、玻棒纏繞法和異丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。簡述從瓊脂糖凝膠中回收 片段的主要方法有哪幾種？本題答案從瓊脂糖凝膠中回收 片段的方法主要包括纖維素膜插片電泳法、電泳洗脫法、低熔點瓊脂糖凝膠挖塊回收法、冷凍擠壓法及現(xiàn)在有試劑盒供應(yīng)的以硅為基礎(chǔ)的純化系統(tǒng)等。簡述磁性球珠分離法分離 的原理。本題答案磁性球珠分離法是基于寡聚 與 的互補配對特性、用生物素標(biāo)記寡聚 ，通過寡聚與‘端形成雜交體，這種雜交非常迅速，在-分鐘內(nèi)就可完成，可有效地除去 以及其他 而后通過生物素與鏈親和素順磁性磁珠之間的相互作用來捕獲這些雜交物而達(dá)到分離純化。重組技術(shù)一、選擇題1下列有關(guān)重組 技術(shù)的敘述，正確的是（）.重組 技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運載體.所有的限制酶都只能識別一種特定的核苷酸序列?選細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因為細(xì)菌繁殖快.只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實現(xiàn)表達(dá)2、下列不屬于獲取目的基因的方法是（ ）A．“鳥槍法”?轉(zhuǎn)錄法?反轉(zhuǎn)錄法.根據(jù)已知氨基酸序列合成法3、作為基因的運輸工具-運載體，必須具備的條件之一及理由是（ ）.能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地保存下來并大量復(fù)制，以便提供大量的目的基因.具有多個限制酶切點，以便于目的基因的表達(dá).具有某些標(biāo)記基因，以便為目的基因的表達(dá)提供條件.能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存，以便于進(jìn)行篩選4、基因治療是把健康的外源基因?qū)耄ǎ?有基因缺陷的 分子中.有基因缺陷的染色體中.有基因缺陷的細(xì)胞器中.有基因缺陷的細(xì)胞中5、應(yīng)用重組 技術(shù)診斷疾病的過程中必須使用基因探針才能達(dá)到檢測疾病的目的。這里的基因探針是指（）.用于檢測疾病的醫(yī)療器械?用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的 分子.合成B球蛋白的.合成苯丙羥化酶的 片段6基因工程的操作步驟：①使目的基因與運載體結(jié)合②將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞③檢測目的基因的表達(dá)④提取目的基因。正確的順序是（）.③②④①.②④①③.④①②③.③④①②二、名詞解釋1、限制性核酸內(nèi)切酶2、載體3、黏粒4、轉(zhuǎn)化5、轉(zhuǎn)染6、轉(zhuǎn)導(dǎo)三、問答題1、簡述質(zhì)粒的概念和特性，常用的質(zhì)粒載體有哪幾種？2簡述重組 技術(shù)的原理及技術(shù)。3簡述黏性末端 重組體的構(gòu)建過程。4舉例說出重組 技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。答案一、選擇題1.B 2.B3.A 4.A5.B6.C二、名詞解釋、限制性核酸內(nèi)切酶簡稱限制酶，是一類能識別雙鏈 分子中某特定的核苷酸序列，并在識別序列內(nèi)或附近切割 雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。它是一類專一性很強的核酸內(nèi)切酶，在基因的分離、 結(jié)構(gòu)的分析、載體的改造以及體外重組中均有重要作用。2、是指能攜帶目的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴增和表達(dá)的一類分子。載體按照基本組成元件的來源不同，可分為質(zhì)粒載體、噬菌體載體、噬菌粒載體、粘粒載體、人工染色體載體等。按功能可分為克隆載體和表達(dá)載體。3黏粒又稱柯斯質(zhì)粒，是一種人噬菌體以為基礎(chǔ)，專門為克隆大片段而設(shè)計并和質(zhì)粒共同構(gòu)建的雜合載體。它由人噬菌體的 位點序列和質(zhì)粒的復(fù)制子構(gòu)建而成。5、把帶有目的基因的重組質(zhì)粒 引入受體細(xì)胞的過程成為轉(zhuǎn)化。6將重組噬菌體 直接引入受體細(xì)胞的過程則稱為轉(zhuǎn)染。7若重組噬菌體 被包裝到噬菌體頭部成為有感染力的噬菌體顆粒，再以此噬菌體為運載體，將頭部重組 導(dǎo)入受體細(xì)胞中，這一過程成為轉(zhuǎn)導(dǎo)，通常成為感染。三、問答題1質(zhì)粒為細(xì)菌染色體外一些雙鏈、共價閉合環(huán)狀分子，是能夠進(jìn)行獨立復(fù)制并保持穩(wěn)定遺傳的復(fù)制子。質(zhì)粒具有復(fù)制和控制機構(gòu)，能夠在細(xì)胞質(zhì)中獨立自主的進(jìn)行自身復(fù)制，并使子代細(xì)胞保持它們恒定的拷貝數(shù)。質(zhì)粒一般具有以下特性：①自主復(fù)制性，它能獨立于宿主細(xì)胞的染色體 而自主復(fù)制；②質(zhì)粒不相容性；③可擴增性；④可轉(zhuǎn)移性。理想質(zhì)粒載體應(yīng)具備①具有松弛型復(fù)制子；②在復(fù)制子外存在幾個單一的酶切位點；③具有插入失活的篩選標(biāo)記；④分子量相對較小，有較高的拷貝數(shù)。常見的質(zhì)粒載體有： 質(zhì)粒、 質(zhì)粒載體、系列載體等。2重組 是在體外利用限制性內(nèi)切酶，將不同來源的分子進(jìn)行特異的切割，獲得的目的基因或 片段與載體連接,從而組成一個新的 分子。重組的 分子能夠通過一定的方式進(jìn)入相應(yīng)的宿主細(xì)胞，并在宿主細(xì)胞中進(jìn)行無性繁殖，獲得大量的目的基因或 片段。經(jīng)重組的 分子能在宿主細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，獲得相應(yīng)的蛋白質(zhì)。大致步驟包括：①目的基因的獲??；②載體的選擇；③目的基因與運載體連接成重組 ；④重組 導(dǎo)入受種細(xì)胞；⑤重組體的篩選。3、目的基因和載體可由同一種限制酶切割后產(chǎn)生，或由不同的限制酶切割形成互補黏性末端，經(jīng)退火，彼此間很容易按堿基配對原則形成氫鍵。然后由連接酶催化連接接頭處的缺口，形成重組質(zhì)粒。載體在限制酶切割后，用堿性磷酸酶處理，除去5’端磷酸基，以避免載體 自身環(huán)化。、可以利用重組技術(shù)探明致病基因的結(jié)構(gòu)和功能，了解其致病機制；開發(fā)基因工程藥物和疫苗用于臨床；建立基因診斷、治療技術(shù)，為疾病的預(yù)防、治療提供新方法、新技術(shù)。具體可用于基因診斷：基因診斷是從基因水平上檢測人類遺傳性疾病的基因缺陷；基因治療：是指將人的正?；蚧蛴兄委熥饔玫幕蛲ㄟ^載體導(dǎo)入人體靶細(xì)胞取代靶細(xì)胞中的缺陷基因，從而達(dá)到治療疾病目的的方法；基因工程藥物、疫苗和抗體的研究和制備；利用基因敲除或轉(zhuǎn)基因技術(shù)可改造生物、培育新的生物品種或用于藥物篩選和新藥評價等。

臨床基因擴增檢驗技術(shù)一、型選擇題.下列哪種不是基因擴增檢驗技術(shù)（）.以下基因擴增檢驗技術(shù)中，哪一種屬于等溫擴增（）.能使擴增靈敏度提高的方法是（）.多重 .巢式.原位.反向.不對稱.能對未知序列進(jìn)行擴增的.多重 .巢式是（）.原位.反向 .不對稱.在定量 中，對原始模板準(zhǔn)確定量的影響因素中，最大的是（）.原始模板的量 .擴增效率 .循環(huán)次數(shù).擴增產(chǎn)物的量 .循環(huán)閾值.外標(biāo)定量方法最大的缺點是（）.不能測定原始模板的絕對量密性有問題.標(biāo)準(zhǔn)品制備困難測定差異.測定必須在擴增的指數(shù)期進(jìn)行.最早推出的熒光定量探針是（）.探針 相鄰探針．測定的重復(fù)性和精．不能排除樣本間的．測定的重復(fù)性和精．不能排除樣本間的分子信標(biāo) 陰. 測定中的污染主要是指（）.標(biāo)本間的交叉法治 .環(huán)境中的細(xì)菌污染因可能是（ ）.核酸提取中的丟失 .標(biāo)本中擴增抑制物殘留.擴增儀孔間溫度不均一.q和或逆轉(zhuǎn)錄酶失后 .擴增產(chǎn)物污染二、名詞解釋.聚合酶鏈反應(yīng).^位.RT-PCR.反向.多重.巢式.不對稱.錨定.熒光定量10.循環(huán)閾值.探針12.分子信標(biāo)三、問答題.影響 反應(yīng)的因素有哪些？.試證明值與模板 的起始拷貝數(shù)成反比。.簡述 信號放大系統(tǒng)的原理。. 檢測技術(shù)有何臨床應(yīng)用。.臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)如何設(shè)置。.如何保證臨床基因擴增檢驗實驗室的質(zhì)量。參考答案一、 型選擇題.灰塵污染擴增產(chǎn)物的污染 .試劑中的污染物防污染預(yù)防下列哪種污染（）.產(chǎn)物.靶核酸.氣溶膠.標(biāo)本間.病原微生物. 探針采用的是（）.熒光標(biāo)記的探針 .生物素標(biāo)記的探針.同位素標(biāo)記的探針. 標(biāo)記引物.圓形探針型題選擇題. 聚合酶要求下述哪些物質(zhì)才能進(jìn)行 復(fù)制（ABC）D. . .引物 .模板.小牛血清白蛋白.核酸擴增抑制物的主要來源是（ ）.血清中的血紅素 .尿標(biāo)本是的尿素 .核酸提取中的有機溶劑. .部分抗凝劑.臨床基因擴增中，弱陽性室內(nèi)質(zhì)控樣本發(fā)生失控，其原型題：二、名詞解釋.聚合酶鏈反應(yīng)： 是利用 聚合酶（如聚合酶）等在體外條件下，催化一對引物間的特異 片斷合成的基因體外擴增技術(shù)。由變性－退火－延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。.原位：是指直接用細(xì)胞涂片或石蠟片包埋組織切片在單個細(xì)胞中進(jìn)行 擴增，然后用特異探針進(jìn)行原位雜交檢測含該特異序列的細(xì)胞的一種方法。. ：逆轉(zhuǎn)錄是一種檢測的方法。其原理是先在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以 為模板合成互補的 ，再以此 為模板進(jìn)行反應(yīng)。.反向：是對已知 片斷兩側(cè)的未知序列進(jìn)行擴增和研究的一種方法。其原理是：用限制性內(nèi)切酶消化片斷，然后用連接酶將酶切產(chǎn)物連接成環(huán)狀，再用已知序列上兩端相反方向的引物進(jìn)行。5.多重：是在一次反應(yīng)中加入多種引物，同時擴增一份A樣品中的不同序列。每對引物所擴增的產(chǎn)物序列長短不一。根據(jù)不同長短的序列存在與否，檢測是否有某些基因片斷的缺失與突變。多重對于檢測疾病相關(guān)基因十分龐大的疾病很有價值。.巢式：巢式有兩對引物，一對引物對應(yīng)的序列在模板外測，稱外引物，另一對引物互補序列在同一模板的外引物的內(nèi)側(cè)，稱內(nèi)引物，即外引物擴增產(chǎn)物較長，含有內(nèi)引物擴增的靶序列，經(jīng)過二次放大將單拷貝的目的A序列檢出。巢式最大的優(yōu)點是靈敏度大大提高.不對稱 ：不對稱 的目的是擴增產(chǎn)生特異長度的單鏈A 反應(yīng)中采用兩種不同濃度的引物，一般采用5~:比例最初的~5個循環(huán)中主要產(chǎn)物還是雙鏈 A,但當(dāng)?shù)蜐舛鹊囊锉幌谋M后，以后的循環(huán)只產(chǎn)生高濃度引物的延伸產(chǎn)物，結(jié)果產(chǎn)生大量單鏈 A因 反應(yīng)中使用二種引物濃度不同，因此稱為不對稱 ：錨定 錨定主要用于擴增未知序列或未全知的序列。首先分離總 A或 A在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下合成 A通過 人末端轉(zhuǎn)移酶在 的3,端上加上 尾，與此相對應(yīng)的錨定引物為 （為保證擴增特異性，應(yīng)在十二聚以上，5,端還可帶上某些限制性酶序列或其他序列信息。?熒光定量 ：熒光定量 亦稱實時熒光 是指在 反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號檢測整個過程，獲得在線描述 過程的動力學(xué)曲線，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板核酸進(jìn)行定量分析的方法。.循環(huán)閾值：循環(huán)閾值是在擴增過程中，熒光信號開始由本底進(jìn)入指數(shù)增長階段的拐點所對應(yīng)的循環(huán)次數(shù)。值與模板A的起始拷貝數(shù)成反比。. 探針：在 探針法的定量反應(yīng)體系中，包括一對引物和一條探針。探針只與模板特異性地結(jié)合，其結(jié)合位點在兩條引物之間。探針的5,端標(biāo)記有熒光報告基團，如A、等，3,端標(biāo)有熒光淬滅基團，如A等。當(dāng)探針完整時，報告基團所發(fā)射的熒光能量被淬滅基團吸收，儀器檢測不到信號。隨著的進(jìn)行，酶在鏈延伸過程中遇到與模板結(jié)合的探針，其3,-5,外切酶活性就會將探針切斷，報告基團遠(yuǎn)離淬滅基團，其能量不能被吸收從而產(chǎn)生熒光信號。所以，每經(jīng)過一個 循環(huán)，熒光信號也和目的片段一樣，有一個同步指數(shù)增長的過程，熒光信號的強度就代表了模板A的拷貝數(shù)。.分子信標(biāo)：分子信標(biāo)探針是 探針的一種衍生方法。探針設(shè)計與 探針相似，只不過是探針5,和3,端的一小段核苷酸序列被設(shè)計成互補的，沒有與靶序列雜交時會形成發(fā)夾狀態(tài)，此時熒光基團和淬滅基團極端靠近，熒光幾乎完全淬滅。探針與靶序列雜交后，發(fā)夾展開，熒光基團與淬滅基團分開，熒光得以恢復(fù)，熒光檢測系統(tǒng)即可接收到熒光基團的熒光信號3.：連接酶鏈反應(yīng)又稱為連接酶擴增反應(yīng)。 是以人連接酶將某一 A鏈的5,磷酸與另一相鄰鏈的3,羥基連接為基礎(chǔ)的循環(huán)反應(yīng)。 擴增對象不是目標(biāo)片段，而是由引物組成的探針，是一種探針擴增技術(shù)。需要兩對引物A、B和A'、B,，其中引物A與引物A,互補，引物B與引物B,互補。模板雙鏈A經(jīng)加熱變性后，兩對引物分別與模板鏈復(fù)性退火，復(fù)性后引物A和B’的3,端分別與引物B和A’的5,端相鄰。若引物與模板完全互補，在A連接酶的作用下，使得相鄰兩個引物A和B、A和B’的5,磷酸與3,羥基形成磷酸二酯鍵而相連。連接產(chǎn)物變性后，又可作為引物的模板參加反應(yīng)，使擴增呈指數(shù)增長，經(jīng)過變性復(fù)性（退火）連接的~3個循環(huán)，檢測連接反應(yīng)的產(chǎn)物。三、問答題.影響 反應(yīng)的因素有哪些？反應(yīng)體系包含 仰模板、寡核苷酸引物、 八聚合酶、 及含有必需離子的反應(yīng)緩沖液，這些因素都對 反應(yīng)產(chǎn)生影響。.試證明值與模板 A的起始拷貝數(shù)成反比。一般來說，第次 循環(huán)的熒光信號強度（）等于背景信號強度（B）加上每個分子的熒光強度（即單位熒光強度與分子數(shù)目的乘積），用數(shù)學(xué)式表示如下：式中：代表熒光信號強度：代表背景信號強度B代表起始模板拷貝數(shù)代表擴增效率代表單位熒光強度代表循環(huán)次數(shù)當(dāng)循環(huán)次數(shù) 時，則：T=：B+Xo（1+E）xCt：s兩邊取對數(shù)，則l（g：T-：B）=lgXo+（C1t+El）xg+lg：s將其整理，則， B Ct= +對每一個特定的 反應(yīng)來說、TB、和 都是常數(shù)，所發(fā)值與 成反比，也就是說，值與起始模板 A的拷貝數(shù)（）的對數(shù)成反比，起始 A濃度每增一倍，值減小一個循環(huán)。因此，值的引入確保了實時熒光 定量的精確和嚴(yán)格。3.簡述 信號放大系統(tǒng)的原理。分枝A是人工合成的帶有側(cè)鏈的A片段，在每個側(cè)鏈上都可以標(biāo)記可被激發(fā)的標(biāo)記物。以 A為基礎(chǔ)建立的連續(xù)放大端號以檢測A的技術(shù)稱為分枝四信號放大系統(tǒng)。信號放大系統(tǒng)包括四種雜交探針，即目標(biāo)探針、前放大體、放大體和標(biāo)記探針。首先用親和素包被微孔，加入目標(biāo)探針，該組探針能與等檢核酸靶序列上不同區(qū)域互補，其5,端用生物素標(biāo)記，能與微孔中的親和素高度親和結(jié)合；再向微孔中加入待測標(biāo)本，目標(biāo)核酸與固定于微孔中的目標(biāo)探針結(jié)合；再加入

前放大體，該組探針的一段能與目標(biāo)核酸的不同區(qū)域互補結(jié)合，另一段與放大體（即分枝 ）的主鏈部分的序列互補結(jié)合，分枝由主鏈和數(shù)十根寡核苷酸組成，每個分枝上都有標(biāo)記探針的雜交位點，由酶標(biāo)寡核苷酸組成的標(biāo)記探針與上的互補序列結(jié)合，加入底物后最后經(jīng)化學(xué)發(fā)光檢測儀檢測。利用信號放大系統(tǒng)可在每個靶序列上結(jié)合~個酶分子，而且所有雜交反應(yīng)同時進(jìn)行，觀察到的信號與靶的量成正比，可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線將靶定量。. 檢測技術(shù)有何臨床應(yīng)用。（） 在病原微生物的檢測中的應(yīng)用；（）在遺傳病中的應(yīng)用；（）在腫瘤中的應(yīng)用；（）其它方面的應(yīng)用：技術(shù)除用于臨床診斷和治療外，還可用于 指紋、個體識別、親子關(guān)系識別、法醫(yī)物證等。5．臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)如何設(shè)置。由于基因擴增檢驗是對靶核酸的指數(shù)倍擴增過程，因而有大量的擴增產(chǎn)物的出現(xiàn)，這種擴增產(chǎn)物極易對以后的新擴增反應(yīng)產(chǎn)生“污染”，為防止這種污染的發(fā)生，就需要對基因擴增檢驗實驗室進(jìn)行嚴(yán)格的分區(qū)。臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個分隔開的工作區(qū)域，即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)以及擴增產(chǎn)物分析區(qū)。如果采用全自動擴增儀，后兩個區(qū)域可以合并。應(yīng)注意的是，各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按單一方向進(jìn)行，即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)一標(biāo)本制備區(qū)一擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)-擴增產(chǎn)物分析區(qū)。各區(qū)的儀器設(shè)備包括工作服、鞋子、實驗記錄本和筆等都必須專用，不得混淆。此外，上述四個工作區(qū)域內(nèi)還應(yīng)有固定于房頂?shù)淖贤鉄簦员阌诠ぷ骱髤^(qū)域內(nèi)的空氣照射。6．如何保證臨床基因擴增檢驗實驗室的質(zhì)量。臨床基因擴增檢驗實驗室的常規(guī)測定由一系列步驟組成，包括樣本收集、樣本處理（核酸提?。?、核酸擴增、產(chǎn)物檢測結(jié)果報告及解釋等。室內(nèi)質(zhì)量控制僅涉及樣本處理、核酸擴增和產(chǎn)物分析等測定分析步驟，而室間質(zhì)量評價則除了監(jiān)測測定分析步驟外，還包括較大范圍的實驗室活動，諸如樣本接收中的可靠性、結(jié)果報告及解釋等。則是覆蓋更廣范圍的活動，包括樣本收集、結(jié)果報告和解釋等。核酸分子雜交技術(shù)一、 型題：要探知細(xì)胞內(nèi)某一蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，可以通過___實_現(xiàn)_。__印跡雜交原位雜交吸附雜交印跡雜交．染色體原位雜交結(jié)果如圖所示羊水細(xì)胞間期核與3 8 1和 染色體的探針雜交。左圖顯示細(xì)胞核與13號染色體（綠）和21號染色體（紅）的探針雜交。右圖顯示細(xì)胞核與18號染色體（淺藍(lán)i染色體綠和染色體（紅）的探針雜交。請根據(jù)該結(jié)果得出診斷為 。___A．21三體B．女性胎兒C．染色體微缺失D．正常男性胎兒．染色體原位雜交結(jié)果如下圖左圖：用13號染色體（綠）和21號染色體（紅）的探針與來自羊水的間期細(xì)胞雜交，右圖：用18號染色體（淺藍(lán)色）、染色體（綠）和染色體紅的探針與羊水細(xì)胞雜交。針對該檢測結(jié)果判斷疾病為 。__A．男性21三體女性21三體? 綜合癥D．正常胎兒原位分子雜交．核酸的變性是 。__一級結(jié)構(gòu)的斷裂二級結(jié)構(gòu)的破壞伴有共價鍵的斷裂是的降解過程。．固相雜交不包括 。_原位分子雜交．核酸的變性是 。__一級結(jié)構(gòu)的斷裂二級結(jié)構(gòu)的破壞伴有共價鍵的斷裂是的降解過程。．固相雜交不包括 。_染色體著絲粒探針（ ）和探針都用紅色熒光標(biāo)記，根據(jù)該結(jié)果可診斷為 。___染色體微缺失三體男性胎兒正常女性胎兒?熒光素是_A．異硫氰酸熒光素B?四乙基羅達(dá)明C?德克薩斯紅D?吲哚二羧菁型題著絲粒探針染色體涂抹探針基因座特異探針端粒重復(fù)序列探針可用于中期及間期細(xì)胞，檢測染色體的非整倍性可用于中期及間期細(xì)胞，檢測微缺失和微重復(fù)可用于中期及間期細(xì)胞，檢測染色體的非整倍性和端粒微小末端重排只能用于中期細(xì)胞，確定小標(biāo)識染色體或畸變重復(fù)序列探針固相雜交液相雜交印跡菌落原位雜交斑點和狹縫雜交印跡雜交

印跡雜交.復(fù)性速率液相雜交.吸附雜交.發(fā)光液相雜交.液相夾心雜交.原位雜交的大小和復(fù)雜性溫度離子強度影響 復(fù)性的因素影響 變性的因素17.影響核酸分子雜交的因素型題1?根據(jù)性質(zhì)及來源不同，核酸探針又可被分為基因組探針探針探針寡核苷酸探針等2?常用的核酸探針非放射性標(biāo)記物有地高辛生物素酶熒光素系統(tǒng)3?常用的核酸探針熒光素標(biāo)記物有A?異硫氰酸熒光素B?四乙基羅達(dá)明C?德克薩斯紅D?吲哚二羧菁等4?非放射性探針檢測方法有A?直接法B?間接免疫法C?直接親合法D?間接親合法等. 印跡技術(shù)是.檢測 的核酸雜交技術(shù)B?是以發(fā)明者的名字命名的C?屬于固相雜交的范疇D?可用于遺傳病的檢測. 印跡技術(shù)是.檢測 的核酸雜交技術(shù)B?是以發(fā)明者的名字命名的C?屬于固相雜交的范疇.與 印跡雜交的方法類似，只是變性劑不同7?核酸原位雜交是A?核酸分子雜交技術(shù)與組織細(xì)胞化學(xué)和免疫組織化學(xué)結(jié)合起來的一種雜交方法，B?基本原理及探針的標(biāo)記方法與傳統(tǒng)核酸分子雜交技術(shù)相同C?不能確定與探針互補的核酸序列在細(xì)胞內(nèi)的空間位置D?不需要將核酸從細(xì)胞中提取出來8?熒光原位雜交的標(biāo)本的濃度A?中期染色體的濃度間期核C．完整細(xì)胞或組織切片D．最廣泛應(yīng)用的標(biāo)本是中期染色體液相分子雜交包括A．吸附雜交B．發(fā)光液相雜交C．液相夾心雜交D．復(fù)性速率液相分子雜交名詞解釋核酸分子雜交核酸探針. 印跡. 印跡. 印跡染色體原位雜交重復(fù)序列探針單一序列探針全染色體涂抹探針基因座特異探針變性復(fù)性增色效應(yīng)雜交反應(yīng)的嚴(yán)格度退火問答題1.原位雜交的基本原理2.簡述原位雜交在臨床中的應(yīng)用。簡述臨床診斷常用的 探針的類型及用途。舉例說明 技術(shù)在分子診斷上的應(yīng)用。的原理及其優(yōu)缺點。參考答案四、名詞解釋核酸分子雜交：不同來源的單鏈核酸分子在合適的溫度和離子強度下，通過堿基互補形成雙鏈雜交體的過程稱之。核酸探針：是指能與待檢測的靶核酸序列互補雜交的某種已知序列的核酸片段。它具有高度的特異性，并且一般來講帶有某種適當(dāng)?shù)臉?biāo)記以便檢測。. 印跡將待檢測的 樣品固定在固相載體上（硝酸纖維素膜或尼龍膜），與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的位置上顯示出雜交信號。通過 雜交可以判斷被檢測的樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。. 印跡指 經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移至膜性支持物上進(jìn)行雜交反應(yīng)的技術(shù)，目前主要用于檢測某一組織或細(xì)胞中已知的特異的表達(dá)水平以及比較不同組織和細(xì)胞的同一基因的表達(dá)情況。. 印跡印跡又稱免疫印跡 ，是一種通過標(biāo)記的抗體檢測經(jīng) 分離的特定蛋白質(zhì)的技術(shù)。染色體原位雜交熒光原位雜交可以檢測非分裂期即間期細(xì)胞核的染色體的數(shù)量及結(jié)構(gòu)異常這種方法稱為染色體原位雜交（）,是 優(yōu)于傳統(tǒng)細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)的重要特點。重復(fù)序列探針是指與某一條特定的染色體結(jié)構(gòu)結(jié)合、特異識別重復(fù)序列的探針如著絲粒探針、端粒探針等。單一序列探針指能與位于某條染色體特定的區(qū)域或基因的單拷貝 序列雜交的探針。全染色體涂抹探針來源于一條染色體的 文庫，這種探針可以識別一條特定染色體全長上的單一序列，從而將一條完整的染色體染色而得以顯示（ t基因座特異探針是與染色體上某一特定基因的單拷貝 序列雜交的探針。當(dāng)已經(jīng)分離到一個基因的一小段，想檢測該基因定位于哪條染色體時，應(yīng)用該探針。變性當(dāng)有酸、堿、熱及某些變性劑（如尿素、乙醇、甲酰胺、胍等）等因素存在時， 分子雙鏈間的氫鍵斷裂，解離成兩條無規(guī)則的卷曲狀單鏈 ，此現(xiàn)象稱之。復(fù)性去除變性因素后，單鏈 可通過堿基互補重新結(jié)合成穩(wěn)定的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)，此過程稱為復(fù)性（ rD13．增色效應(yīng)變性后，由于雙螺旋解體，堿基堆積不再存在，藏于螺旋內(nèi)部的堿基暴露出來，從而使變性后的 對紫外光的吸光率比變性前明顯增加，這種現(xiàn)象稱之。雜交反應(yīng)的嚴(yán)格度在雜交反應(yīng)中容許錯配的程度稱之。退火當(dāng)熱變性 緩慢冷卻時，可以復(fù)性，這種復(fù)性稱之。FISH是一種利用非放射性的熒光信號對原位雜交樣本進(jìn)行檢測的技術(shù)。它通過熒光標(biāo)記的探針與待測標(biāo)本的核酸進(jìn)行原位雜交，在熒光顯微鏡下對熒光信號進(jìn)行辨別和計數(shù)，從而對染色體或基因異常的細(xì)胞、組織標(biāo)本畸形檢測和診斷。技術(shù)是采用多種熒光素混合物標(biāo)記與人類有高度同源性的猿或其它靈長類動物的作為探針，雜交后使人類的24條染色體呈現(xiàn)特異的帶型，根據(jù)彩色的熒光條帶進(jìn)行核型分析。五、問答題原位雜交的基本原理樣本經(jīng)適當(dāng)處理后，使細(xì)胞通透性增加，讓探針進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與組織、細(xì)胞中待檢測的核酸進(jìn)行特異性結(jié)合形成雜交體，然后通過組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)方法在被檢測的核酸原位形成的雜交信號，在顯微鏡或電子顯微鏡下對待測核酸進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)定位的方法。簡述原位雜交在臨床中的應(yīng)用原位雜交技術(shù)可以通過標(biāo)記的探針與分裂中期染色體雜交來精確定位特定核苷酸序列在染色體上的位置與細(xì)胞雜交可觀察組織細(xì)胞中特定基因的表達(dá)水平；還可用特異性的細(xì)菌或病毒的核酸序列作為探針與組織、細(xì)胞雜交，以確定有無病原體的感染等。原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中對單一細(xì)胞進(jìn)行研究，不受同一組織中其它成分的影響，因此對于那些細(xì)胞數(shù)量少且散在于其它組織中的細(xì)胞內(nèi) 或 的研究更為方便。此外，原位雜交不需要從組織中提取核酸，有利于檢測組織中含量極低的靶序列，并可完整地保持組織和細(xì)胞的形態(tài)，更能準(zhǔn)確地反應(yīng)出組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。舉例：原位雜交檢測上皮細(xì)胞中人乳頭狀瘤病毒（ ）.簡述臨床診斷常用的 探針的類型及用途。根據(jù)核酸探針的序列特點，可將 探針分為三大類：重復(fù)序列探針、單一序列探針和全染色體涂抹探針。重復(fù)序列探針（ ）是指與某條特定的染色體結(jié)構(gòu)結(jié)合、特異識別重復(fù) 序列的探針如著絲粒探針、端粒探針等。一般來說，不同的染色體，著絲粒重復(fù)序列中的核苷酸序列也不同，但端粒重復(fù)序列不具有染色體特異性。單一序列探針與某條染色體上特定的區(qū)域或基因的單拷貝 序列雜交。包括帶特異性探針（）和基因座特異性探針（ ）等。全染色體涂抹探針（）是識別一條特定染色體全長上的單一序列探針的混合物。種類/主要應(yīng)用著絲粒探針：可用于中期及間期細(xì)胞，檢測染色體的非整倍性；染色體涂抹探針：只能用于中期細(xì)胞，確定小標(biāo)識染色體或畸變；基因座特異探針：可用于中期及間期細(xì)胞，檢測微缺失和微重復(fù)；端粒重復(fù)序列探針：可用于中期及間期細(xì)胞，檢測染色體的非整倍性和端粒微小末端重排.舉例說明 技術(shù)在分子診斷上的應(yīng)用21三體，微缺失，腫瘤，病原微生物等的檢測與診斷。. 的原理及其優(yōu)缺點混合數(shù)種熒光原色，形成不同顏色熒光探針，在一次雜交中使每一條染色體都涂上不同的顏色，可同時觀察全部染色體（見圖9－36。）利用這種技術(shù)可以很容易看到多條染色體間的復(fù)雜易位情況和確定標(biāo)識染色體的來源。對于不知來源的基因片段及復(fù)雜的基因重組，特別是腫瘤染色體很有幫助。缺點是分辨率不夠，細(xì)微的缺失可能無法判斷；另外接近中心體著絲粒附近的染色質(zhì)，因不易結(jié)合，也不容易判斷；同時 對同一條染色體中的易位或倒位也無法判斷，并且它也不能精確地顯示染色體斷裂的區(qū)帶。核酸測序技術(shù)一、 型題.有關(guān) 鏈末端終止法的不正確說法是（）需要需要的比例要合適需要放射性同位素,=|=,^55"需要.有關(guān) 序列自動化測定的不正確敘述是（ ）用熒光代替了同位素標(biāo)記激光掃描分析代替人工讀序基本原理與手工測序相同不再需要引物需要與手工序列分析相同的模板.有關(guān)化學(xué)法的敘述，不正確的是（ ）所用化學(xué)試劑有一定危害性所需的 模板純度要求較高測序前對待測 末端進(jìn)行放射性標(biāo)記便于自動化測序反應(yīng)分為4組或5組相互獨立的化學(xué)反應(yīng)變.形聚丙烯酰胺凝膠電泳能分離的單鏈寡核苷酸片段，一般為（ ）~ 個核苷酸~ 個核苷酸~ 個核苷酸D,5~個7個個個個核苷酸E任意長度均可要能夠獲得良好的電泳帶譜模式，使得 條帶分離效果較佳，反應(yīng)試管中 和 的比例通常為：（ ）自動化測序系統(tǒng)中，最常用的標(biāo)記物是（ ）熒光染料aY生物素E35S.有關(guān) 序列自動化測定的不正確敘述是（）用熒光代替了同位素標(biāo)記二、型題激光掃描分析代替人工讀序1．化學(xué)法測序反應(yīng)體系的組成中包括有（ ）基本原理與手工測序相同待測不需要引物待測 樣品的末端標(biāo)記需要與手工序列分析相同的模板絕對單一堿基特異性的化學(xué)裂解3.有關(guān)化學(xué)法的敘述，不正確的是（D）電泳測序圖譜的識讀所用化學(xué)試劑有一定危害性E引物所需的 模板純度要求較高2．鏈末端終止法測序反應(yīng)體系的組成中包括有（） 測序前對待測 末端進(jìn)行放射性標(biāo)記待測模板鏈D便于自動化引物E測序反應(yīng)分為4組或5組相互獨立的化學(xué)反應(yīng)聚合酶4變.形聚丙烯酰胺凝膠電泳能分離的單鏈寡核苷酸片段，一般為放射性核素標(biāo)記的（C）測序產(chǎn)物的凝膠電泳及識讀~ 個核苷酸. 序列測定的應(yīng)用有（ ）~ 個核苷酸A分析基因組核苷酸排列序列C3~個5個個個個核苷酸B分析基因序列D5~個7個個個個核苷酸C基因定點誘變的基礎(chǔ)E任意長度均可基因工程載體構(gòu)建中 序列定位和排序的基礎(chǔ)要能夠獲得良好的電泳帶譜模式，使得 條帶分離效果較E臨床疾病的分子診斷佳，反應(yīng)試管中 和 的比例通常為：（ ）. 雙脫氧鏈終止法采用 引物引導(dǎo)新生的合 ：成，采用的模板是（ ）B：11個單鏈C：115雙鏈D：12個單鏈E：125雙鏈自動化測序系統(tǒng)中，最常用的標(biāo)記物是（ ）E蛋白質(zhì)A熒光染料三、名詞解釋aY.毛細(xì)管凝膠電泳（） 生物素. 雜交測序法.引物步入法（ ）.焦磷酸測序技術(shù)（ ）ybridiEz3a5Stion,SBH）二、型題四、問答題.化學(xué)法測序反應(yīng)體系的組成中包括有（ ）.簡述鏈末端終止法測定 序列的原理待測簡述化學(xué)法測定 序列的基本原理待測 樣品的末端標(biāo)記第十章核酸測序技術(shù)試題答案絕對單一堿基特異性的化學(xué)裂解電泳測序圖譜的識讀E引物.鏈末端終止法測序反應(yīng)體系的組成中包括有（ ）一、型題待測模板鏈引物.有關(guān) 鏈末端終止法的不正確說法是聚合酶需要放射性核素標(biāo)記的需要測序產(chǎn)物的凝膠電泳及識讀: 的比例要合適. 序列測定的應(yīng)用有（ ）D需要放射性同位素A分析基因組核苷酸排列序列需要B分析基因序列C基因定點誘變的基礎(chǔ)基因工程載體構(gòu)建中 序列定位和排序的基礎(chǔ)E臨床疾病的分子診斷. 雙脫氧鏈終止法采用 引物引導(dǎo)新生的合成，采用的模板是（AB）單鏈雙鏈單鏈雙鏈E蛋白質(zhì)三、名詞解釋.毛細(xì)管凝膠電泳（ ）答：是將平板電泳的凝膠移到毛細(xì)管中做支持物進(jìn)行電泳，由于電場強度比板凝膠電泳大大提高，使分離時間縮短約25倍。. 雜交測序法答：是利用雜交技術(shù)來測定序列的方法。其基本原理是用一套已知序列、長度特異、具有所有可能的堿基序列的寡核苷酸探針，與未知序列的待測 片段進(jìn)行分子雜交，然后根據(jù)寡核苷酸探針完全雜交互補的情況推知待測的堿基序列。.引物步入法（ ）答：是從待測 片段的’端開始，利用載體上的序列設(shè)計第一次反應(yīng)的引物，測定一段序列，然后依次根據(jù)前一次測序結(jié)果，設(shè)計下一次反應(yīng)引物，循序漸進(jìn)測序，直至完成，得到靶的全部序列.焦磷酸測序技術(shù)（ ）答：是在以靶 鏈為模板指導(dǎo)核酸合成的過程中，以釋放熒光為檢測信號，從而對靶 鏈進(jìn)行實時測序的方法。四、問答題.簡述鏈末端終止法測定 序列的原理答：利用聚合酶，以待測單鏈為模板，以為底物，設(shè)立四種相互獨立的測序反應(yīng)體系，在每個反應(yīng)體系中加入不同的雙脫氧核苷三磷酸（, ）作為鏈延伸終止劑，在測序引物引導(dǎo)下，按照堿基配對原則，每個反應(yīng)體系中合成一系列長短不一的引物延伸鏈，通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測后，從凝膠底部到頂部按'-'方向讀出新合成鏈序列，由此推知待測模板鏈的序列。簡述化學(xué)法測定 序列的基本原理答：化學(xué)法是對待測 進(jìn)行化學(xué)降解。在化學(xué)法的測序系統(tǒng)中，先對待測 末端進(jìn)行放射性標(biāo)記，然后分成組或組互為獨立的化學(xué)反應(yīng)體系，每一組用不同的化學(xué)試劑特異地針對某一種或某一類堿基進(jìn)行化學(xué)切割，通過化學(xué)降解后產(chǎn)生長短不一的片段，其長度取決于改組反應(yīng)所針對的堿基在待測片斷中的位置，將各組反應(yīng)產(chǎn)物通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測后直接識讀待測 的序列。生物芯片技術(shù)一、選擇題.下面哪種生物芯片不屬于微陣列芯片（ ）基因芯片蛋白芯片反應(yīng)芯片芯片實驗室.生物芯片的主要特點是（ ）高通量微型化集成化并行化.下面哪些方法屬于基因芯片原位合成技術(shù)（ ）原位光刻合成合成點樣壓電打印