流式細(xì)胞儀基本原理及應(yīng)用

——檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果更準(zhǔn)確，操作更簡(jiǎn)單目前一頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)

提綱BeckmanCoulter公司介紹流式細(xì)胞技術(shù)基本原理FC500全自動(dòng)分析型流式細(xì)胞儀介紹Gallios十色分析型流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞技術(shù)科研應(yīng)用目前二頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)Dr.Beckman于1935年創(chuàng)立Beckman公司Coulter兄弟于1958年創(chuàng)立Coulter公司1997年兩大公司合并為BeckmanCoulter一直致力于為生命科學(xué)研究提供全套的解決方案，產(chǎn)品涵蓋臨床診斷和生物醫(yī)學(xué)的多個(gè)領(lǐng)域，包括臨床生化、血凝/血球、實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化、離心機(jī)、流式細(xì)胞產(chǎn)品、基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、顆粒特性分析等20多萬(wàn)臺(tái)儀器設(shè)備在全球130多個(gè)國(guó)家地區(qū)的醫(yī)院和科研院所高效運(yùn)轉(zhuǎn)年銷售額超40億美金，被財(cái)富雜志評(píng)為“最值得欽佩的公司”之一名列全球福布斯500強(qiáng)BeckmanCoulter公司介紹目前三頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)BeckmanCoulter：世界上最主要的高端流式細(xì)胞儀技術(shù)制造商目前四頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)貝克曼庫(kù)爾特細(xì)胞組學(xué)產(chǎn)品線Z1/Z2細(xì)胞分析計(jì)數(shù)儀Vicell全自動(dòng)細(xì)胞活力分析系統(tǒng)4色數(shù)字化分析型流式EpcisXL5色數(shù)字化分析型流式FC500EPICSALTRA?分選Gallios?科研型MoFloXDP高端分選MoFloAstrios高端分選QuantaSC（2007）臨床型NaviosCyAnADP（科研型）1990200520092009年12月份上市目前五頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)流式細(xì)胞技術(shù)基本原理

目前六頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)WhatisFlowCytometry？流式細(xì)胞技術(shù)(FlowCytometry,FCM)是利用流式細(xì)胞儀對(duì)處于快速流動(dòng)的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析及分選的技術(shù)。它結(jié)合了單克隆抗體技術(shù)、激光技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、細(xì)胞化學(xué)和免疫化學(xué)技術(shù)。目前七頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FCM的技術(shù)特點(diǎn)測(cè)量速度快以單一細(xì)胞為分析基礎(chǔ)多參數(shù)測(cè)量統(tǒng)計(jì)學(xué)意義高分辨率(CV<2%)、高靈敏度(熒光檢測(cè)靈敏度≤100MESF（MoleculesofEquivalentSolubleFluorochrome），前向角散射光檢測(cè)靈敏度(0.2～0.5μm)分選純度可達(dá)99%以上目前八頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)細(xì)胞的相對(duì)大小（FSC-ForwardScatter）細(xì)胞的相對(duì)顆粒度和內(nèi)部復(fù)雜度（SSC-SideScatter）細(xì)胞的相對(duì)熒光強(qiáng)度WhatCanaFlowCytometer

TellUsAboutaCell?目前九頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500流式細(xì)胞儀的檢測(cè)范圍細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞粒度細(xì)胞表面面積核漿比例DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量細(xì)胞功能細(xì)胞表面/胞漿/核的特異性抗原細(xì)胞活性細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子酶活性激素結(jié)合位點(diǎn)細(xì)胞受體目前十頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)流式細(xì)胞儀是細(xì)胞組學(xué)的定量工具可以做以下定量：細(xì)胞相對(duì)定量（％）細(xì)胞絕對(duì)定量（細(xì)胞/μl）細(xì)胞膜蛋白表達(dá)定量（蛋白分子/細(xì)胞）可溶性蛋白絕對(duì)定量（g/ml）目前十一頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)榮獲國(guó)際工業(yè)設(shè)計(jì)大獎(jiǎng)和質(zhì)量最高獎(jiǎng)，得到國(guó)際公認(rèn)獲得FDA和中國(guó)SDA認(rèn)證，安全性和結(jié)果可靠性得到肯定全自動(dòng)5色流式細(xì)胞儀Cytomics?FC500FlowCytometer先進(jìn)的光路設(shè)計(jì)高分辨20Bit數(shù)字化電子系統(tǒng)豐富靈活的進(jìn)樣系統(tǒng)基于Windows界面的高度人性化軟件目前十二頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500Flowcytometry的基本結(jié)構(gòu)流路：

流動(dòng)室鞘液sheath

樣本流sample光路：

光源

光學(xué)收集系統(tǒng)電路：

光電倍增管(PMT)、光電二極管、放大器（線性、對(duì)數(shù)）

A/D轉(zhuǎn)換（光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)之后的處理分析道數(shù)和電信號(hào)的脈沖轉(zhuǎn)換）統(tǒng)計(jì)：計(jì)算機(jī)軟件目前十三頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)流路流動(dòng)室側(cè)向及熒光信號(hào)前向散射光信號(hào)鞘液激光

樣品管、鞘液管和流動(dòng)室等由于鞘液的作用，待測(cè)細(xì)胞被限制在液流的軸線上——流體動(dòng)力學(xué)聚焦目前十四頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500的光源和光路先進(jìn)的單激光激發(fā)5色系統(tǒng)單激光就能激發(fā)5色熒光20mW@488nmBlueair-cooledargon(氬離子激光)單激光同時(shí)激發(fā)5色熒光，確保信號(hào)來(lái)源于同一個(gè)細(xì)胞，結(jié)果準(zhǔn)確可靠其它公司同檔機(jī)器單激光只能激發(fā)4色，第5色需要安裝第二根激光激發(fā)。由于有兩個(gè)檢測(cè)點(diǎn)，在鞘液壓力變化、樣品濃度、樣品大小不均、轉(zhuǎn)換采樣速度時(shí)不能確保信號(hào)來(lái)源于同一個(gè)細(xì)胞而是兩個(gè)細(xì)胞，信號(hào)收集發(fā)生錯(cuò)誤目前十五頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)

雙激光排列方式：共線性排列（只有一個(gè)檢測(cè)點(diǎn)）FC500的光源和光路488nm激光633nm激光雙激光共線性：信號(hào)來(lái)源于一個(gè)檢測(cè)點(diǎn)目前十六頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)散射光測(cè)量原理RightAngleLightDetector

CellComplexitySSCForwardLightDetector

CellSurfaceArea

FSCIncidentLightSourceFSCSensorLaserSSCSensor目前十七頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)散射光的性質(zhì)

波長(zhǎng)與入射光一致，為細(xì)胞固有的物理及生理特性，可依此對(duì)未染色的細(xì)胞進(jìn)行分析

--前向散射光(FSC):與細(xì)胞大小有關(guān)

--側(cè)向散射光(SSC):與細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu)及顆粒性有關(guān)。SCFS外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖

（紅細(xì)胞溶解后）目前十八頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500提供兩種檢測(cè)角度的前向角散射光，更好通過(guò)大小區(qū)分不同細(xì)胞目前十九頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)熒光信號(hào)檢測(cè)原理520nmFSCSensorLaserFluorescenceSensorPMT(FL)目前二十頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)

ATOM熒光素及熒光發(fā)生機(jī)理簡(jiǎn)介目前二十一頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FITC熒光素的激發(fā)和發(fā)射光譜Ex

488nmEm520nm異硫氰酸熒光素（FITC）每種熒光染料均有特定的激發(fā)波長(zhǎng),并激發(fā)后會(huì)有發(fā)射波長(zhǎng),流式細(xì)胞儀檢測(cè)的即是它特定的發(fā)射波長(zhǎng).利用各種不同波長(zhǎng)的光學(xué)濾片來(lái)收集(檢測(cè))這些光學(xué)信號(hào)目前二十二頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500流式常用熒光染料violetbluegreenyelloworangeredinfra-FITC520PE575ECD615PC5665LASER488PI620400-450l450-500l500-570l570-590l<390l590-620l620-750l>750lPC7770熒光素的使用：選擇正確的激光器確定正確的濾光片確定所需熒光探測(cè)器（PMT）目前二十三頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)LONG(700nm)(550LP)(550SP)SHORT(500nm)DichroicFiltersTransmitted<550nm>550nmDiflected90°>550nm<550nmLONG(700nm)(500LP)(500SP)SHORT(500nm)PassThroughFilters(500/50)Transmitted<500nm>500nm475-525nmWavelengthsBlocked>500nm<500nm<475nm&>525nmShortPassLongPassBandPass光學(xué)系統(tǒng)：濾光片（Filter）熒光激發(fā)波長(zhǎng)根據(jù)所選的熒光素而異，可通過(guò)一組不同的光學(xué)濾片傳遞到各個(gè)PMT(光電倍增管中)目前二十四頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500的光路——固定光路，互換式濾片矩形反射光路，光路短，能量損失小，易于低強(qiáng)度熒光檢測(cè)，并且組合濾片能保證熒光檢測(cè)的特異性完全光學(xué)線路免校正客戶可自由更換的濾片組合，且無(wú)須校正光路，可方便新熒光染料的使用，擴(kuò)展機(jī)器的功能；目前二十五頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)流式細(xì)胞儀的電路進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)和分析熒光信號(hào)由光電接收器（PMT）接收，轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，可分析電壓脈沖的高度、面積和寬度電脈沖信號(hào)經(jīng)A/D轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)數(shù)字信號(hào)傳送到計(jì)算機(jī)，進(jìn)行儲(chǔ)存、作圖、統(tǒng)計(jì)分析目前二十六頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)光電管和檢測(cè)系統(tǒng)：PMT目前二十七頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)光電管和檢測(cè)系統(tǒng)：放大器基本原則

--信號(hào)強(qiáng)弱差<10倍or需線性關(guān)系:使用線性放大器(如散射光,DNA分析)

--信號(hào)強(qiáng)弱差>10倍or需分析弱熒光:使用對(duì)數(shù)放大器(如熒光)目前二十八頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500采用20比特的信息量數(shù)字化信號(hào)采集分析數(shù)據(jù)

數(shù)據(jù)信息量和檢測(cè)精度的對(duì)應(yīng)關(guān)系3Shapiro,H.PracticalFlowCytometry,4thEd.Page206.

*LSB=leastsignificantbit,voltagedifferencebetweenchannelnandchanneln+1.

NumberofBits#ofChannelsVoltage/LSB*825639.1mV101,0249.77mV124,0962.44mV1416,384610μV1665,536153μV18262,14438.1μV201,048,5769.54μV224,194,3042.38μV2416,777,216596nVThetableshowstheattributesofanalogtodigitalconverters3.Basedonthenumberofbits,theinputsignal(orvoltage)mustincreasebythisamountinordertoaffectachangeinthechanneldisplayed.FC500目前二十九頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)SampledataOn20bitFC50010MB/sec光纖傳輸信號(hào)，反應(yīng)迅速熒光分辨率的解析度更高，細(xì)胞分群更好在熒光表達(dá)低通道處（100-101陰性細(xì)胞位置）不會(huì)出現(xiàn)低分辨率數(shù)據(jù)常見的信號(hào)不飽和現(xiàn)象220

=1,048,576channels218=262,144channelsSampledataOnother18bitAnalyzerFC500優(yōu)秀的熒光檢測(cè)靈敏度和分辨率目前三十頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)CAnalyzerNONEsmoothhistogramCD19FITCNOWASHFC500NONEsmoothhistogramCD19FITCNOWASH同一份樣本檢測(cè)，F(xiàn)C500的信噪比更好目前三十一頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500Flowcytometr的基本結(jié)構(gòu)流路：

流動(dòng)室鞘液sheath

樣本流sample光路：

光源

光學(xué)收集系統(tǒng)電路：

光電倍增管(PMT)、光電二極管、放大器（線性、對(duì)數(shù)）

A/D轉(zhuǎn)換（光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)之后的處理分析道數(shù)和電信號(hào)的脈沖轉(zhuǎn)換）統(tǒng)計(jì)：計(jì)算機(jī)軟件目前三十二頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500高度自動(dòng)化人性化的軟件系統(tǒng)Windows?2000系統(tǒng)平臺(tái)多用戶操作可以將每天的應(yīng)用預(yù)先設(shè)置和安排

FCS3.0文件格式，可以直接打開多種結(jié)果輸出形式，完全與OFFICE兼容多種圖形疊加方式開放式軟件，可以在任何電腦上安裝使用目前三十三頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)Quickset——直觀的電壓調(diào)節(jié)目前三十四頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)QuickComp——直觀的補(bǔ)償調(diào)節(jié)補(bǔ)償前補(bǔ)償后目前三十五頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500豐富的上樣系統(tǒng)——高通量標(biāo)準(zhǔn)化自動(dòng)化32支試管自動(dòng)上樣盤（MCL)獨(dú)立獲取樣本簡(jiǎn)單，自動(dòng)檢測(cè)和報(bào)告，有利于實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化，減少人為誤差每支試管檢測(cè)前單獨(dú)震動(dòng)混勻，有利于均勻獲取細(xì)胞，結(jié)果更準(zhǔn)確可靠目前三十六頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500配套自動(dòng)化標(biāo)本處理系統(tǒng)全自動(dòng)標(biāo)本處理和溶血系統(tǒng)，靈活搭配，減少人為誤差，節(jié)省人力和試劑Q-PREPTQ-PREPPREPLUSII標(biāo)本處理系統(tǒng)上樣裝置與FC500完全兼容目前三十七頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500全自動(dòng)無(wú)縫連接的流水線系統(tǒng)無(wú)人值守標(biāo)準(zhǔn)化操作杜絕污染速度快模式一模式二目前三十八頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)獨(dú)家的可升級(jí)多平臺(tái)自動(dòng)上樣系統(tǒng)FC500MPL24孔96標(biāo)準(zhǔn)孔和深孔反應(yīng)板40支試管(12x75mm)可以固定體積上樣檢測(cè)可以減少高通量工作需要的煩雜的取樣過(guò)程將您的注意力從操作中解放出來(lái)，而集中于思路的創(chuàng)新FC500是一款單平臺(tái)既能96孔板又能40管常用試管上樣的流式細(xì)胞儀目前三十九頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500智能化的體現(xiàn)FC500面板LED顯示屏能隨時(shí)自動(dòng)顯示各色熒光的強(qiáng)弱，激光開啟狀態(tài)，上樣速度，鞘液、廢液水平目前四十頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FC500特點(diǎn)1根激光5色熒光分析，獲取高可信度多色數(shù)據(jù)

2種角度前向散射光檢測(cè)功能，更準(zhǔn)確定位目的細(xì)胞,20Bit高分辨電子系統(tǒng)，更精確解讀熒光信號(hào)

3種圖形顯示及更強(qiáng)大的分析工具：各種2維平面圖，三維立體圖，獨(dú)特的PRISM濃縮柱形圖，無(wú)限制的直方圖疊加功能

4種進(jìn)樣方式：?jiǎn)我辉嚬埽?2管自動(dòng)上樣，24/96

微孔板，40管自動(dòng)上樣，具有目前最豐富的進(jìn)樣模式

55X5ADC正反全矩陣高精度補(bǔ)償及離線補(bǔ)償系統(tǒng)，自動(dòng)化的電壓補(bǔ)償調(diào)節(jié)功能，強(qiáng)大的批量處理分析功能目前四十一頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)檢測(cè)的一般步驟設(shè)置檢測(cè)方案（PROTOCOL)染色標(biāo)本（同型對(duì)照，補(bǔ)償管，待測(cè)樣本）同型對(duì)照管調(diào)電壓電壓不變，補(bǔ)償管調(diào)補(bǔ)償電壓不變，補(bǔ)償不變，上檢測(cè)管檢測(cè)后直接閱讀結(jié)果目前四十二頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)電壓調(diào)節(jié)－利用同型對(duì)照：設(shè)置背景

電壓volts

增益Gain設(shè)定陰性和陽(yáng)性信號(hào)強(qiáng)度的臨界點(diǎn)目前四十三頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)熒光補(bǔ)償FITCPE受激光照射后FITC和PE分子發(fā)射光譜相互干擾目前四十四頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)FL2-%FL1FL-1(FITC)FL-2(PE)FL1-%FL2目前四十五頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)QuickComp——直觀的補(bǔ)償調(diào)節(jié)補(bǔ)償前補(bǔ)償后目前四十六頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)補(bǔ)償調(diào)節(jié)－利用單標(biāo)樣本，來(lái)消除熒光交叉原則：?jiǎn)喂軉紊珮?biāo)記交叉調(diào)節(jié)確認(rèn)電壓?jiǎn)螛?biāo)記管自動(dòng)計(jì)算CROSSOVER驗(yàn)證管目前四十七頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)補(bǔ)償調(diào)節(jié)-最精確的全矩陣軟件

利用軟件進(jìn)行全矩陣顏色補(bǔ)償（任何兩個(gè)熒光檢測(cè)通道之間都可以進(jìn)行補(bǔ)償）目前四十八頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)數(shù)據(jù)分析DotPlot（雙參數(shù)點(diǎn)圖）Histogram（單參數(shù)直方圖）

Region（門）

Statistics（統(tǒng)計(jì)結(jié)果）參數(shù)目前四十九頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)50Gallios最新產(chǎn)品多種專利技術(shù)和優(yōu)化設(shè)計(jì)全球用戶的一致認(rèn)可，全球銷售逾千臺(tái)真正支持當(dāng)前流式發(fā)展趨勢(shì)多參數(shù)（幾十個(gè)）小顆粒檢測(cè)弱熒光表達(dá)稀有細(xì)胞自動(dòng)化高通量上樣全自動(dòng)十色Gallios流式細(xì)胞分析系統(tǒng)目前五十頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)激光器的獨(dú)特設(shè)計(jì)創(chuàng)新的卡槽式設(shè)計(jì)

微馬達(dá)自動(dòng)固定激光，真正固定光路，無(wú)需調(diào)整維護(hù)，即開即用靈活開放的平臺(tái)，用戶可自行升級(jí)更換新波長(zhǎng)的激光，如561nm、375nm，保證未來(lái)的應(yīng)用不受限每根激光有單獨(dú)開關(guān)，延長(zhǎng)激光使用壽命51目前五十一頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)多色的靈活配置405nm638nm488nm2Lasers6colors(5+1)2Lasers8colors(5+3)3Lasers10colors(5+3+2)目前五十二頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)多色檢測(cè)優(yōu)勢(shì)觀察混合樣本中不同細(xì)胞亞群之間的數(shù)量變化和功能聯(lián)系減少批次操作的變異誤差準(zhǔn)確識(shí)別細(xì)胞亞群以及評(píng)價(jià)細(xì)胞功能提高檢測(cè)效率節(jié)約珍貴稀有樣本增加靈敏度和分辨率目前五十三頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)光膠耦合石英杯提高光收集效率77%利用光纖高效傳輸熒光到PMT18o

全反射收集光路減少光損失TheBoulevard高效的光收集系統(tǒng)

——保證多色分析的熒光靈敏度緊湊式設(shè)計(jì)縮短光信號(hào)傳輸距離光損失最小的反射角度用戶自由插拔式光學(xué)濾片，更換后無(wú)需調(diào)節(jié)光路，保證新染料和應(yīng)用不受限目前五十四頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)獨(dú)家提供儀器內(nèi)部溫控確保儀器始終處于工程師安裝調(diào)試時(shí)的最佳狀態(tài)保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性和重復(fù)性平均熒光強(qiáng)度變化在2%以內(nèi)Gallios平均熒光強(qiáng)度變化超過(guò)25%沒有溫控的儀器目前五十五頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)FSCW2SSCFSCW2W2可應(yīng)用于血小板微顆粒，內(nèi)皮微顆粒，紅細(xì)胞微泡，以及細(xì)菌的檢測(cè)獨(dú)有的『多角度前向角散射光』檢測(cè)功能FSC對(duì)于流式檢測(cè)至關(guān)重要，影響圈門和統(tǒng)計(jì)針對(duì)不同類型樣本，獨(dú)家提供三種前向角散射光檢測(cè)角度1-8°低角度：適用于分辨8-40um的顆粒1-19°寬角度：適用于分辨0.5-10um的顆粒W2增寬型大角度：相差0.1um的細(xì)胞顆粒以及背景噪音區(qū)分開

目前五十六頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)微顆粒（microparticles，MPs）近年研究熱點(diǎn)之一微顆粒是細(xì)胞激活或凋亡時(shí)從質(zhì)膜脫落的一些膜性小囊泡，有促凝、促炎癥和調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能的作用研究表明，微顆粒與血管生成的關(guān)系密切，在高血壓、糖尿病、缺血性疾病以及腫瘤的發(fā)展中發(fā)揮了重要作用微顆粒水平增加見于多種疾病，如血栓癥（血小板微顆粒）、充血性心力衰竭（內(nèi)皮微顆粒）、婦女先兆子癇（合胞體滋養(yǎng)層細(xì)胞微顆粒）目前五十七頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)微顆粒（microparticles，MPs）目前五十八頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)真實(shí)有效的分析速度和信號(hào)處理能力40MHz數(shù)字化采樣頻率最大上樣速度>25000個(gè)細(xì)胞/秒（90%產(chǎn)率），大大節(jié)省檢測(cè)時(shí)間和寶貴樣本可檢測(cè)高度、面積、寬度、時(shí)間、比率參數(shù)GalliosOtherCytometerDataRate%Yield目前五十九頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)SampledataOn20bitGallios10MB/sec光纖傳輸信號(hào)，反應(yīng)迅速熒光分辨率的解析度更高：20比特細(xì)胞分群更好，檢測(cè)、圈門和統(tǒng)計(jì)更準(zhǔn)確，尤其適于分析分選含量稀有、微弱熒光表達(dá)差異或熒光連續(xù)表達(dá)的細(xì)胞群體220

=1,048,576channels218=262,144channels數(shù)據(jù)分辨率和信號(hào)精度最高SampledataOnother18bitAnalyzer目前六十頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)?QueenMary,UniversityofLondon2005R：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)N：需要獲取的細(xì)胞總數(shù)P：陽(yáng)性率CV：變異系數(shù)單個(gè)樣本處理和儲(chǔ)存信息量：2400萬(wàn)細(xì)胞科學(xué)試驗(yàn)要求良好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，統(tǒng)計(jì)上一般要求平行試驗(yàn)的數(shù)據(jù)結(jié)果的變異系數(shù)CV<5％，流式細(xì)胞儀單次上樣處理和保存數(shù)據(jù)信息量要求更高，以便精確圈定分析分選區(qū)域尤其適合低含量稀有細(xì)胞群體（樹突細(xì)胞、抗原特異性T細(xì)胞、Treg、各種干細(xì)胞、各種實(shí)體組織來(lái)源細(xì)胞等），輕松實(shí)現(xiàn)萬(wàn)分之一以下含量的細(xì)胞檢測(cè)不同含量目的細(xì)胞需要獲取的細(xì)胞總數(shù)目前六十一頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)自動(dòng)或手動(dòng)模式，無(wú)需機(jī)械式安裝調(diào)試單管進(jìn)樣或32管連續(xù)進(jìn)樣（88管/小時(shí)），真正實(shí)現(xiàn)Walkaway

每支試管檢測(cè)前單管震動(dòng)混勻功能，避免整盤振蕩多次混勻?qū)?xì)胞形態(tài)、完整性和活性的影響全方位的條碼掃描識(shí)別功能（轉(zhuǎn)盤號(hào)、管號(hào)、單管條形碼），方便高通量大樣本信息錄入可隨時(shí)暫停/旋轉(zhuǎn)以方便添加刺激劑等樣本間自動(dòng)清洗，交叉污染<0.1%最小死體積20ul減少操作者和樣本接觸(生物安全)輪盤式高通量標(biāo)準(zhǔn)化自動(dòng)化上樣系統(tǒng)目前六十二頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)長(zhǎng)效穩(wěn)定供液設(shè)計(jì)支持長(zhǎng)時(shí)間樣本分析

液流車系統(tǒng)外接大容量鞘液桶不間斷補(bǔ)液，保證內(nèi)置鞘液盒液面恒定，消除液面下降引起系統(tǒng)壓力變化對(duì)檢測(cè)的影響外接大容量廢液桶內(nèi)置清洗液桶目前六十三頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)定時(shí)自動(dòng)開關(guān)機(jī)、清洗維護(hù)及遠(yuǎn)程診斷功能目前六十四頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)簡(jiǎn)單直觀的應(yīng)用方式實(shí)時(shí)補(bǔ)償/脫機(jī)補(bǔ)償/自動(dòng)補(bǔ)償目前六十五頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)PRISM濃縮柱形圖真正支持多色分析

一張圖上顯示多達(dá)1024個(gè)表型組合結(jié)果（十色分析，210分析組合）將實(shí)驗(yàn)所分析的所有細(xì)胞數(shù)據(jù)結(jié)果簡(jiǎn)單地濃縮在一張直方圖上能直接讀出各種陰性或陽(yáng)性組合的結(jié)果清晰直觀且便于數(shù)據(jù)的保存顏色點(diǎn)圖組合2122332346245102561526721271045210目前六十六頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)支持最全面的生命科學(xué)研究?jī)?nèi)容細(xì)胞生理功能研究（死活鑒定、細(xì)胞內(nèi)pH值、細(xì)胞內(nèi)鈣流、膜電位、酶活性）免疫功能研究（包括淋巴細(xì)胞亞群分析、細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)、細(xì)胞活化、細(xì)胞因子、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、樹突細(xì)胞、抗原特異性T細(xì)胞、Th17細(xì)胞等）造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)血小板疾病及活化血小板檢測(cè)HLA-B27強(qiáng)制性脊柱炎篩查白血病及淋巴瘤免疫分型、殘留白血病檢測(cè)器官移植的配型及免疫狀態(tài)監(jiān)控AIDS診斷及治療監(jiān)控腫瘤相關(guān)研究（腫瘤相關(guān)基因表達(dá)、抗腫瘤藥物作用機(jī)制及多藥耐藥、放化療以及生物治療療效的研究、循環(huán)中腫瘤細(xì)胞等）藥物篩選，抗體研發(fā)，疫苗評(píng)估干細(xì)胞研究（干細(xì)胞的分離、鑒定、功能分析等）細(xì)胞周期和DNA倍體分析、DNA含量測(cè)定、細(xì)胞周期蛋白細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白磷酸化蛋白的檢測(cè)及信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究細(xì)胞治療……目前六十七頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)流式細(xì)胞儀應(yīng)用舉例

目前六十八頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)一、穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選GFP轉(zhuǎn)染后轉(zhuǎn)染細(xì)胞（藍(lán)色）與空載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞（紅色）的對(duì)比，轉(zhuǎn)染效率73％1、靶基因轉(zhuǎn)染至目的細(xì)胞2、檢測(cè)報(bào)告基因-熒光蛋白（GFP,YFP,Dsred）轉(zhuǎn)染效率3、陽(yáng)性細(xì)胞的無(wú)菌分選目前六十九頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)二、細(xì)胞周期/DNA含量的分析常用染料：

PI7-AADHochest33342G0/G1SG2/M腫瘤細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)：DNA指數(shù)大于1.1或小于0.9S期比例大于15%S+G2期比例大于20%對(duì)抗腫瘤藥物機(jī)制及療效評(píng)價(jià)目前七十頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)分析單細(xì)胞群體，去除粘連細(xì)胞FSSSAWAH利用脈沖高度，面積，寬度三參數(shù)去除粘連細(xì)胞目前七十一頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)細(xì)胞周期分析/DNA含量分析第三方軟件分析周期Multicycle，ModFit等等決定cellcycles數(shù) 排除細(xì)胞碎片（debris）執(zhí)行分析

分析數(shù)據(jù)信賴度分析（Confidenceanalysis）可信區(qū)間六種信賴度模式總結(jié)目前七十二頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)DNA與蛋白同時(shí)檢測(cè)Anti-CyclinA2-FITC7-AAD對(duì)照ThapsigarginPaclitaxelG039%M1.5%G05.3%M62%G028%M1.2%目前七十三頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)CellproliferationCFSE在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，它的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級(jí)遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半。Brdu是5-溴脫氧尿嘧啶核苷代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加入，而后利用抗Brdu單克隆抗體，同時(shí)結(jié)合PI/7AAD雙重染色.目前七十四頁(yè)\總數(shù)八十五頁(yè)\編于十五點(diǎn)凋亡啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+

動(dòng)員★Caspase激活脫水致細(xì)胞皺縮核染色質(zhì)凝縮★線粒體膜電位喪失★細(xì)胞膜PS外翻★核碎片形成★DNA被切割成低分子量片段細(xì)胞內(nèi)酸化凋亡小體形成