β-胡蘿卜素和番茄紅素的分離提取和鑒定β-胡蘿卜素和番茄紅素的分離提取和鑒定/NUMβ-胡蘿卜素和番茄紅素的分離提取和鑒定β-胡蘿卜素和番茄紅素的分離提取和鑒定β-胡蘿卜素和番茄紅素的提取分離與測定一、實驗?zāi)康?.掌握從胡蘿卜或番茄中提取分離β-胡蘿卜素和番茄紅素的原理與方法；2.鞏固用柱色譜和薄層色譜分離、檢測有機(jī)化合物的實驗技術(shù)；3.學(xué)會用分光光度法測定β-胡蘿卜素和番茄紅素的方法。二、胡蘿卜素和番茄紅素的主要理化性質(zhì)名稱分子式相對分子質(zhì)量顏色熔點溶解度最大吸收峰β-胡蘿卜素C40H56536.85黃色184℃不溶于水451nm番茄紅素C40H56536.85紅色174℃不溶于水472nm三、實驗原理β-胡蘿卜素和番茄紅素是脂溶性的不飽和碳?xì)浠衔铮y溶于甲醇、乙醇，可溶于乙醚、石油醚、正已烷、丙酮，易溶于氯仿、二硫化碳、苯等有機(jī)溶劑?？衫檬兔选⒁宜嵋阴サ热鯓O性溶劑將它們從植物材料中浸提出來。然后，根據(jù)它們對吸附劑吸附能力的差異，用柱色譜進(jìn)行分離，用薄層色譜檢測分離效果。四、初步設(shè)計實驗方案1.類胡蘿卜素的提?、俜Q取20g新鮮番茄果肉，搗碎，置于50mL三角瓶中，再加入5g食鹽，用玻棒攪拌，使食鹽與番茄果肉充分混合均勻，放置一定時間，便會看到果肉組織中水分大量滲出。脫水時間持續(xù)15~30min。隨后將脫除下來的水分濾入150mL分液漏斗中。②向經(jīng)過食鹽脫水的番茄果肉加入10mL丙酮，用玻棒攪拌，并靜置5~10min。然后將丙酮提取液也濾入分液漏斗中。③向經(jīng)過丙酮處理的番茄果肉加入10mL乙酸乙酯浸提5min。浸提過程中應(yīng)不時振搖三角瓶，使番茄果肉與溶劑充分接觸；若室溫過低，可將三角瓶置于溫水浴中溫?zé)幔珣?yīng)注意不能使浸提溶劑明顯揮發(fā)損失。5min后將提取液也濾入分液漏斗中，并用玻棒輕壓殘渣盡量使溶劑流盡。再用乙酸乙酯重復(fù)提取2次，每次10mL，合并提取液至分液漏斗中。④充分振搖分液漏斗中的混合溶液，靜置，完全分層后，分去水層，有機(jī)層（酯層）再用蒸餾水洗2次，每次8-10mL，棄去水層。酯層自分液漏斗上口倒入干燥的小三角瓶中，加入適量無水硫酸鎂（或無水硫酸鈉）干燥15min（注意：應(yīng)避光）。⑤干燥后的酯層濾入50mL干燥的蒸餾瓶中，水浴加熱，小心蒸餾（最好減壓蒸餾）濃縮至1-2mL。所得濃縮液即為類胡蘿卜素樣品。2.類胡蘿卜素的柱色譜分離選一支1.5×20cm色譜柱，用適量層析用氧化鋁（100-200目）作吸附劑干法裝柱，高度約10-20cm，要求緊密勻?qū)?。分離方式為梯度洗脫，第一步用石油醚（60-90℃）洗脫。先沿色譜柱管壁滴加5~8mL石油醚至柱體（各方向要均勻），待溶劑液面降至氧化鋁柱面頂端時，用滴管迅速地小心滴加5-10滴樣品至柱子中，待樣品液面即將在柱面上消失時，沿管壁小心滴加石油醚3-5滴，沖洗粘在管壁上的有色物質(zhì)。如此重復(fù)操作3-4次，直至管壁沖冼干凈為止。隨后，在管內(nèi)加入盡可能多的石油醚進(jìn)行洗脫，第一步收集到的洗脫液為黃色。待洗脫液清亮無色后用石油醚：丙酮=3：2（V/V）的混合液洗脫，第二步收集到的洗脫液為紅色。最后用丙酮將前兩步不能洗脫的剩余組分洗脫下來。分別收集三步洗脫液，用作薄層色譜檢測3.類胡蘿卜素的薄層色譜檢測對前面得到的類胡蘿卜素樣品以及柱色譜分離得到的樣品分別進(jìn)行薄層分析，以檢查柱色譜分離效果。薄層層析板預(yù)先用硅膠G制備并活化（110℃，1小時），展開劑為石油醚（60~90℃）：丙酮=3：2（V/V）。薄層分離后觀察斑點位置，計算各斑點的R在本實驗條件下，薄層檢測結(jié)果為：β-胡蘿卜素，黃色，Rf值為0.89；番茄紅素，深紅色，Rf值為0.84。五、修改完善后的實驗類胡蘿卜的提取做出修改后，方法如下：①稱取0.3g番茄（或胡蘿卜）干粉，置于干燥的研缽中，加入2ml石油醚研磨，以利提取完全。未研磨細(xì)之前，若石油醚揮發(fā)，應(yīng)補(bǔ)加2ml繼續(xù)研磨。②將研缽中的番茄細(xì)粉轉(zhuǎn)移到干燥的50ml燒瓶中，用5ml石油醚洗滌研缽和研缽錘，洗滌液一并加入燒瓶中，回流10min。冷卻至室溫，傾出提取液至另一干燥的50ml的燒瓶中。③水浴加熱，小心蒸餾，濃縮提取液至1ml。所得的濃縮液即為類胡蘿卜素樣品。類胡蘿卜素的柱色譜分離和薄層色譜檢驗仍按上述設(shè)設(shè)計。六、思考題根據(jù)本實驗結(jié)果，試提出從植物材料中提取分離脂溶性色素和水溶性色素的一