儀器設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

江蘇省中醫(yī)藥研究院

中醫(yī)藥分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)童

2008-2-29

目錄

冷凍干燥機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1

BF410發(fā)酵罐標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程4

ZEISS熒光倒置顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程6

BECKMAN臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程16

PROTEANIEF等電聚焦電泳儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程17

ProteanII電泳槽標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程18

PROTEANPlus?Dodeca?Cell標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程20

PowerPacUniversal電泳儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程23

全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(Skanltsoftware2.2)24

高壓勻質(zhì)儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(觸屏操作)32

AvantiJ-26p落地式大容量高速離心機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程34

蛋白純化系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程35

Elix/Rios純水儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程37

MILL1-Q超純水純化系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程39

臺(tái)式普通離心機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程40

臺(tái)式低溫冷凍離心機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程41

高壓蒸汽滅菌器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程42

EppendorfResearchPro電動(dòng)移液器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程43

多道移液器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程45

普通移液器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程47

MiniPellicon超濾系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程48

大型蛋白超濾系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程50

MiniProtean電泳槽標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程52

UVP高性能紫外透照儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程54

HERAcell培養(yǎng)箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程55

C.B.S液氮罐標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程59

MMMECOCELL干燥箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程60

A2型生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程63

超低溫冰箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程65

BI0-RAD1575洗板機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程66

SANYO制冰機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程68

SANYO層析柜標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程69

奧林巴斯顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程70

備注71

冷凍干燥機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

■各鍵介紹

TurnandPushbutton：導(dǎo)航鍵

Standby：停止鍵

Run：運(yùn)行鍵

℃/mbar：蒸汽壓曲線對(duì)照

LocVUnlock：鎖定鍵。長(zhǎng)按該鍵2秒鐘后，各鍵將會(huì)鎖死，避免誤操作，

再次長(zhǎng)按2秒可解鎖。

二Option菜單

導(dǎo)航鍵旋轉(zhuǎn)至option,按下確認(rèn)。

A：選擇contrast可以改變液晶顯示對(duì)比度；

B：選擇language可以選擇語(yǔ)言（英語(yǔ)和德語(yǔ)）；

C：選擇MISC,出現(xiàn)下一級(jí)菜單（Date/Time,VacuumPump,Process,

Calibration,Ulock,Security,Close）,選定Date/Time用于設(shè)定系統(tǒng)時(shí)

間；VacuumPump顯示泵油使用時(shí)間；Process用于選擇凍干類型（Process

A或者ProcessB）

三Values菜單

選中Values后，在下拉菜單中選擇showvaluewindow,凍干的設(shè)定參

數(shù)和顯示參數(shù)將采用大字體對(duì)比顯示。

進(jìn)入該顯示界面以：如果再用導(dǎo)航鍵移至Values確認(rèn)，下拉菜單中將多

出選擇項(xiàng)Displayconfiguration,旋轉(zhuǎn)至DisplayConfiguration,并確定，則可

以自定義調(diào)整各實(shí)際參數(shù)的位置等；選擇ShowMimicDiagram,系統(tǒng)將回到

原始主窗口。

四設(shè)定凍干過(guò)程參數(shù)

Value今SetValuesforManuel-Mode

然后可以使用導(dǎo)航鍵下按（選擇和退出該單項(xiàng)）或旋轉(zhuǎn)（改變?cè)搯雾?xiàng)參數(shù)），

例如：當(dāng)光標(biāo)移至NormalMain-drying（或者~>FinalFreezing等）。

按下導(dǎo)航鍵，則進(jìn)入主干燥（或后干燥等）的參數(shù)設(shè)定。然后繼續(xù)旋轉(zhuǎn)

導(dǎo)航鍵至隔板溫度（ShelfT）,真空度（Vacuum）,安全壓力（SafetyPressure）

并按下，則可以通過(guò)旋轉(zhuǎn)導(dǎo)航鍵來(lái)改變各項(xiàng)數(shù)值）。

五ManuelMode

使用導(dǎo)航鍵到Manuel,并按下進(jìn)入ManuelMode,然后可以通過(guò)旋轉(zhuǎn)

和按下導(dǎo)航鍵選擇Freezing（預(yù)凍）、Freezing+Warm-upVP（預(yù)熱真空泵）、

Main-Drying（主干燥）、Final-Dring（后干燥）啟動(dòng)干燥過(guò)程。各過(guò)程設(shè)定詳

見(jiàn)上節(jié)。

六Program

用于新建、存儲(chǔ)、修改、復(fù)制、刪除凍干程序，可存儲(chǔ)30個(gè)自定義凍干

程序，每個(gè)自定義程序可以分為32步連續(xù)進(jìn)行。其中Load用于載入已有凍

干程序，Modify用于修改程序，Copy用于復(fù)制凍干程序，Delete用于刪除凍

干程序，New用于新建凍干程序，InsertSec用于插入新的步驟，DeleteSec

用于刪除新的步驟，Add.SetValues用于設(shè)定真空泵的預(yù)熱時(shí)間。預(yù)熱完畢

程序自動(dòng)執(zhí)行各步。

編輯凍干程序方法：將導(dǎo)航鍵移至SECTION-NO,并按下導(dǎo)航鍵，然后

旋轉(zhuǎn)導(dǎo)航鍵使需要改動(dòng)的步驟進(jìn)入編輯框，然后再次按下導(dǎo)航鍵，旋轉(zhuǎn)導(dǎo)航

鍵至需要改動(dòng)的各參數(shù)，通過(guò)下按選擇需要更改的參數(shù)，通過(guò)旋轉(zhuǎn)改變數(shù)值

大小。

七各參數(shù)設(shè)定完成后，按下RUN按鈕。通過(guò)MANUEL菜單選項(xiàng)啟動(dòng)凍干步驟。

注意：真空泵有1-2分鐘的延遲時(shí)間，等待后才會(huì)聽(tīng)到泵啟動(dòng)的聲音。

八結(jié)束后，按下Standby,手動(dòng)排氣

九自動(dòng)除霜時(shí)，導(dǎo)航鍵選擇Manuel,選擇defrosting。

凍干機(jī)注意事項(xiàng)

該機(jī)使用環(huán)境溫度決不可以大于25C,否則系統(tǒng)壓力過(guò)高會(huì)導(dǎo)致機(jī)器產(chǎn)生故障。

樣品在-80℃至少冷凍2小時(shí)，最好過(guò)夜，樣品厚度不超過(guò)1cm.如果是

放在托盤上的樣品，托盤也要預(yù)凍。

二打開(kāi)真空泵，預(yù)熱30分鐘，以確保真空泵處于高溫的狀態(tài)，以減少溶劑蒸氣

在泵油中聚集，造成泵油變質(zhì)，從而損壞真空泵潤(rùn)滑性,加速真空泵的損壞。

三空氣振流閥在主干燥中打開(kāi)，在干燥后期可關(guān)閉，打開(kāi)振流閥的目的是更好

地導(dǎo)出泵內(nèi)的有害氣體，關(guān)閉是為了更好的抽真空，穩(wěn)定真空度。

四打開(kāi)凍干機(jī)，迅速放置預(yù)凍過(guò)的托盤、樣品。

五關(guān)閉橡膠閥和排水閥。

六如果接外掛瓶，壓力一定要降到1.03mbar以下方可掛外掛瓶，等壓力下

降，瓶子吸緊真空數(shù)值顯示向下后方可松手，需要再次掛瓶時(shí)必須掛好該

瓶后壓力再次至1.03mbar方可進(jìn)行另一個(gè)瓶子的操作。

七凍干后，關(guān)閉真空泵，若有微通氣閥或進(jìn)氣閥就使用微通氣閥或進(jìn)氣閥,

若沒(méi)有，則使用橡膠閥緩慢進(jìn)氣，當(dāng)顯示800mbar以后方可略為開(kāi)大進(jìn)氣

閥。注意：放氣一定要緩慢，800mbar后可適當(dāng)加快，否則會(huì)沖壞真空傳

感器。

八如果要取外掛瓶，手托住外掛瓶然后關(guān)閉橡膠閥，再拿下瓶子，等壓力再

降至1.03mbar以后才可以取另外一個(gè)瓶子，否則壓力回升過(guò)快會(huì)導(dǎo)致其

它瓶子脫落。

九關(guān)閉冷阱電源，打開(kāi)排水閥，擦干凍干腔中的水。將真空密封罩移去，正

面向下放在旁邊，不用時(shí)絕對(duì)不可以蓋上。

十設(shè)置真空泵使用時(shí)間，每500小時(shí)換一次真空泵油。

十一初次使用真空泵100小時(shí)，換油一次,以后每500小時(shí)更換一次。

BF410發(fā)酵罐標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

-準(zhǔn)備工作

1.檢查水電是否正常，水壓應(yīng)在2—3公斤，水壓不足會(huì)使滅菌時(shí)間延長(zhǎng)甚至達(dá)

不到滅菌溫度。

2.將配好的培養(yǎng)基等用量桶從接種口倒進(jìn)發(fā)酵罐。

3.進(jìn)行PH電極校準(zhǔn)，校準(zhǔn)完畢將PH電極裝進(jìn)發(fā)酵罐。

4.檢查其他電極的連接是否正確，檢查各接口是否擰緊。

5.拉出進(jìn)氣口定位銷，向上提起進(jìn)氣管，將其固定在滅菌位；關(guān)閉尾氣冷凝器

管路上的閥門。

6.檢查并水壓正常，確認(rèn)閥門已經(jīng)開(kāi)啟。

二滅菌

1.在觸摸屏上設(shè)定以下參數(shù)：

AGITAITON：設(shè)為PID狀態(tài)，設(shè)定轉(zhuǎn)速為250RPM,

TEMP：設(shè)為PID狀態(tài)，工作溫度根據(jù)用戶需要設(shè)定

AIR：設(shè)為PID狀態(tài)，通氣量為1:1

2.觸摸屏上點(diǎn)擊STERIZE菜單,進(jìn)入滅菌參數(shù)設(shè)置界面,檢查各參數(shù)是否正確:

EXHAUSTTIME：1-2分鐘

HEATB：100℃

STERIZETIME：由用戶根據(jù)培養(yǎng)基組成設(shè)置，一般在30分鐘左右

VALAVESEQUENCE與SHUTDOWN在安裝調(diào)試時(shí)已經(jīng)設(shè)好，一般不需

要重新設(shè)置。

3.滅菌參數(shù)設(shè)置完畢后，點(diǎn)擊STERIZE按鈕，啟動(dòng)滅菌。

4.滅菌過(guò)程自動(dòng)完成，此時(shí)可進(jìn)行接種，酸，堿，以及其它準(zhǔn)備。

三接種及發(fā)酵：

1.滅菌完畢拉出進(jìn)氣口定位銷，放下進(jìn)氣管，打開(kāi)尾氣冷凝器管路上的閥門。

2.DO校準(zhǔn)：

零點(diǎn)校準(zhǔn)：通常采用拔下電極聯(lián)線的方法。

100%校準(zhǔn)：將轉(zhuǎn)速設(shè)定比正常轉(zhuǎn)速高200RPM,通氣量1:1等待10分鐘左右

將此時(shí)的DO設(shè)為100%,校準(zhǔn)完畢，將轉(zhuǎn)速設(shè)為正常值。

3.安裝取樣器：將通氣量降到0.5-1SLPM,,用酒精擦拭一下取樣口后裝上經(jīng)過(guò)

滅菌的取樣器。

4.PH校準(zhǔn)：如有必要，可以取樣后用另一精密PH計(jì)校準(zhǔn)PH電極。

5.接種：將通氣量降到0.5-1SLPM,,然后打開(kāi)接種口，在火焰保護(hù)下倒入菌種

接種完畢將接種口蓋緊。

6.保持步5的通氣量，進(jìn)行酸，堿，營(yíng)養(yǎng)，消泡劑等的連接，連接完畢，將通

氣量恢復(fù)正常。

7.如有需要可進(jìn)行有關(guān)參數(shù)的聯(lián)動(dòng)設(shè)置，如果購(gòu)買了數(shù)據(jù)記錄軟件，此時(shí)可啟

動(dòng)數(shù)據(jù)記錄。

8.進(jìn)入正常發(fā)酵狀態(tài)，根據(jù)需要進(jìn)行取樣檢測(cè)，補(bǔ)充酸，堿，營(yíng)養(yǎng)，消泡劑等。

四下罐及清洗：

1.發(fā)酵結(jié)束后，關(guān)閉除通氣外的各參數(shù)，并把通氣降到1SLPM,用無(wú)菌管道連

接收獲容器及底部閥門，打開(kāi)閥門即可收獲發(fā)酵液。

2.收獲完畢，關(guān)閉閥門及通氣，進(jìn)行清洗冰檢查有無(wú)墊圈需要更換，以備下次

發(fā)酵。

ZEISS熒光倒置顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

-ZEISS顯微鏡日常使用的注意事項(xiàng)

1.顯微鏡開(kāi)關(guān)時(shí)鹵素?zé)綦妷簯?yīng)調(diào)至最低。

2.轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)，應(yīng)旋轉(zhuǎn)物鏡架，不要直接轉(zhuǎn)物鏡。

3.熒光光源汞燈由于使用壽命短，為保證盡可能的延長(zhǎng)使用時(shí)間和安全，汞燈

電源開(kāi)/關(guān)間隔時(shí)間必須大于三十分鐘。

4.顯微鏡的各光學(xué)部件應(yīng)調(diào)節(jié)到位（如，DIC插件，熒光濾片，物鏡等），以

免影響顯微鏡的正常工作。如果不到位，那么觀察時(shí)通常會(huì)看到月牙形陰影.

5.使用油鏡時(shí)應(yīng)使用ZEISS所配專業(yè)用油，不要用其它介質(zhì)（如香柏油），以

免損傷鏡頭。每次使用完油鏡后，需將油鏡擦拭干凈（物鏡及玻片）。（正

置顯微鏡，油滴在樣品上。倒置顯微鏡，油直接滴在物鏡上。）

6.不要用手直接觸摸光學(xué)部件的表面（如物鏡，熒光模塊，目鏡等），以免留

下手指印在上面，影響觀察效果。

7.在拆卸全自動(dòng)顯微鏡的聚光鏡，熒光濾片盒（倒置顯微鏡）等部件時(shí)，應(yīng)

在斷電的情況下進(jìn)行操作。

8.因?yàn)楦骺頩EISS顯微鏡的有效工作距離/特性等各有不同，使用前應(yīng)充分了

解所用儀器的特性及觀測(cè)范圍，以免因不恰當(dāng)?shù)牟僮?，?duì)顯微鏡及其配件

造成損害。

提示：L觀測(cè)樣品時(shí)（特別是金相樣品），切不可將物鏡撞及樣品，以免將物鏡

鏡頭壓碎。

2.移動(dòng)顯微鏡時(shí)，應(yīng)做到小心輕放，以免因震動(dòng)而對(duì)光學(xué)部件及光路造

成損害，影響顯微鏡的使用。（建議移動(dòng)顯微鏡時(shí)，先將各光學(xué)部件拆

除，移位后，再重新安裝。）

二ZEISS顯微鏡的日常保養(yǎng)及日常維護(hù)

1.ZEISS顯微鏡日常的一般保養(yǎng)

1）顯微鏡每次使用完畢后，應(yīng)切斷電源，并罩上防塵罩。

2）不要將顯微鏡放置在潮濕的房間內(nèi)，保持良好的通風(fēng)。顯微鏡室的溫度應(yīng)

保持在+10—+35度之間，濕度在+35度時(shí)不超過(guò)75%。建議配置除濕機(jī)。

3）顯微鏡的各光學(xué)部件，如長(zhǎng)期不用，應(yīng)取下妥善保管，建議放置在干燥皿

內(nèi)。

4）不要用手直接觸摸光學(xué)部件的表面（如物鏡，熒光模塊，目鏡等），以免留

下手指印在上面。

2.ZEISS顯微鏡的清潔

1）去除光學(xué)部件表面的灰塵，應(yīng)使用軟毛刷，洗耳球，擦鏡紙或長(zhǎng)纖維的脫

脂棉簽。

2）去除可溶與水的污物，用適量不含有害物質(zhì)的清潔劑加水進(jìn)行擦拭。

3）去除油或油漬（手指?。?，用長(zhǎng)纖維的脫脂棉簽蘸特別配制的光學(xué)清潔溶劑

進(jìn)行擦拭。

提示：1.擦拭光學(xué)部件表面時(shí)，應(yīng)先用洗耳球去除光學(xué)部件表面的較大灰塵顆

粒，以免在擦拭時(shí)劃傷光學(xué)部件的表面。再用棉簽從光學(xué)部件表面的

中心開(kāi)始，由內(nèi)向外畫同心圓進(jìn)行擦拭，用力要均勻，不能太過(guò)用力。

不要用同一根棉簽反復(fù)擦拭光學(xué)部件的表面；擦拭方法如下圖所示：

2.光學(xué)清潔溶劑配置（70%分析純無(wú)水乙酸+30%分析純無(wú)水酒

如何將鏡頭紙卷繞在一根木棒上

如何將鏡頭紙卷繞在您的手指上

擦拭方向（從中心往外成螺旋形擦拭）

精）。

3.熒光模塊等經(jīng)過(guò)特殊處理的光學(xué)部件，不應(yīng)用任何溶劑進(jìn)行擦拭，

以免受損。

4.禁止使用苯類溶劑。

5.在擦拭霉斑時(shí)，應(yīng)先于ZEISS維修部聯(lián)系，以免因使用的溶劑對(duì)光

學(xué)部件造成損傷。

三一般觀察方式的調(diào)節(jié)

1.明場(chǎng)（任何染色的片子）

拍攝明場(chǎng)圖像主要就是考慮白平衡和平場(chǎng)問(wèn)題。因此顯微鏡的調(diào)節(jié)也

要圍繞這兩個(gè)方面來(lái)調(diào)節(jié)。顯微鏡可能需要設(shè)置主要有以下部分：（先調(diào)節(jié)

好柯勒照明，詳見(jiàn)后文）

1）將熒光濾鏡輪轉(zhuǎn)到空位，聚光鏡轉(zhuǎn)輪位置也放在空位（0、BF或H）一

定不要使用PH或C或Do

2）透射光濾光片除了GIF（綠色）外建議均使用（NCB（日光平衡片）），這

樣就不用提高電壓也可以提高色溫，使得背景光為白色。

3）放入需要觀察的片子，調(diào)節(jié)調(diào)焦裝置，使得圖像最清楚。

4）調(diào)節(jié)聚光鏡孔徑光欄的位置，使之于物鏡的數(shù)值孔徑一一對(duì)應(yīng)。（經(jīng)驗(yàn)值是

數(shù)值孔徑數(shù)值X0.7）,這樣觀察的圖像的對(duì)比度才是最佳的效果。記住每一

個(gè)換一個(gè)物鏡都要改變其位置。

5）使用相機(jī)拍攝一張圖片，看看是否偏色和光場(chǎng)不勻。如果偏色那么就使用

相機(jī)帶的白平衡設(shè)置軟件來(lái)進(jìn)行白平衡設(shè)置。如果光場(chǎng)不勻那么使用相機(jī)

軟件中的平場(chǎng)校正來(lái)校正。

2.暗場(chǎng)

1）原理

對(duì)于透明樣品，例如沒(méi)有染色的生物樣品，像細(xì)菌或者活的培養(yǎng)的細(xì)

胞等通常在透射光的情況下很難被看見(jiàn)或看不清楚。但是如果使用暗視野

觀察法（樣品通過(guò)比觀察的范圍要大的環(huán)型光照明）這些都將被觀察的很

清楚。

對(duì)于只有散射和衍射的暗場(chǎng)來(lái)說(shuō)，成像最重要的就是直射光不能進(jìn)入物鏡,

這也是暗場(chǎng)可以觀察更細(xì)微的機(jī)構(gòu)的原因之一。有時(shí)候在透射光下看起來(lái)

比較暗的結(jié)構(gòu)在暗場(chǎng)下將變的很亮。

2）暗場(chǎng)配置

a）帶暗場(chǎng)環(huán)的萬(wàn)能聚光鏡。

b）消色差消球差萬(wàn)能聚光鏡0.9H/0.8-0,9DFo

c）ICS物鏡可使用的最高數(shù)值孔徑為0.75,如果要使用更高的數(shù)值孔經(jīng)的物鏡

則一定要配備數(shù)值孔經(jīng)為L(zhǎng)2-L4用油的暗場(chǎng)聚光鏡。

3）暗場(chǎng)設(shè)置

a）先調(diào)節(jié)柯勒照明。但是這里使用最高的數(shù)值孔經(jīng)物鏡代替10X物鏡。

b）取下一個(gè)目鏡，通過(guò)目鏡筒確定暗場(chǎng)環(huán)在視野中心，如果不是則調(diào)節(jié)至中心

位置。

c）調(diào)節(jié)暗場(chǎng)環(huán)中心位置，使用1.5的螺絲刀按照位置調(diào)節(jié)，通過(guò)目鏡筒可以觀

察到調(diào)節(jié)的狀態(tài)。

注意：a）由于帶有內(nèi)值孔徑光闌的物鏡的孔徑相對(duì)于透射光暗場(chǎng)的要求來(lái)說(shuō)太

大了，所以孔徑光闌必須關(guān)小到0.65孔徑以下。

b）顯微鏡暗場(chǎng)的觀察要求樣品必須非常干凈，像指紋，灰塵等都會(huì)對(duì)觀

察的細(xì)節(jié)造成嚴(yán)重的影響。因?yàn)樗麄儠?huì)使背景變得很亮，減少了觀察

樣品的對(duì)比度。

3.相差

1）原理

相襯顯微技術(shù)最適合檢測(cè)薄的非染色樣品，例如細(xì)菌細(xì)胞。人眼不能

看出不同細(xì)胞成分之間相的差異（折射率和厚度的差異）。

相襯顯微技術(shù)使用光學(xué)元件相板和“相環(huán)”和中間圖像信息的干涉作

用，將較小的相差轉(zhuǎn)化為眼睛可以看到的強(qiáng)度和顏色的差異。

高強(qiáng)度的直射光部分被環(huán)形通道（光學(xué)定義是“相板和相環(huán)”）衰減，

并產(chǎn)生恒定的相變。而在細(xì)胞的不同組分上衍射的非直射光線則不受這一

光學(xué)通道的影響，只受樣品中同相折射率和厚度差異的影響。

在中間圖像平面中，受不同影響的部分光線發(fā)生干涉，根據(jù)相位置的不

同，產(chǎn)生了增強(qiáng)或衰減。這一干涉的結(jié)果就使圖像的內(nèi)容在強(qiáng)度和顏色上

顯示出了人眼可以看到的區(qū)別。

拍攝相差圖片主要考慮的就是相差環(huán)和物鏡的配合。

2）配置

a）帶有適用于不同的平均數(shù)值孔徑的Phi、Ph2或Ph3相環(huán)的物鏡，這種物鏡

也可不受限制地適用于明場(chǎng)觀察。

b）帶有轉(zhuǎn)盤的萬(wàn)能聚光鏡，轉(zhuǎn)盤中裝有適合于不同平均數(shù)值孔徑的Phi、Ph2

和Ph3相板。聚光鏡上插入的相板必須與物鏡上的相應(yīng)標(biāo)簽相一致，例如，

Phk

3）設(shè)置透射光相

a）將相襯物鏡，例如，標(biāo)有Ph1的物鏡轉(zhuǎn)進(jìn)光路。

b）插入萬(wàn)能聚光鏡轉(zhuǎn)盤上與相襯物鏡標(biāo)簽相同的相板，例如，Phi相板。

c）如果要檢查較亮的相板（在聚光鏡上）和較暗的相環(huán)（在物鏡上）是否重

合，請(qǐng)從觀察筒上取下一個(gè)目鏡，換上輔助目鏡上的校正裝置對(duì)物鏡出口

圖像中的相板和相環(huán)進(jìn)行聚焦。

4）顯微鏡主要狀態(tài)設(shè)置如下：

a）熒光濾鏡輪轉(zhuǎn)到空位，聚光鏡孔徑光欄打到最大位置（或PH位置）。

b）聚光鏡轉(zhuǎn)輪要根據(jù)物鏡來(lái)選擇使用哪一個(gè)，5X使用PHL/PHO,10X和

20X使用PHI,40X使用PH2,100X使用PH3。這些都寫在物鏡上。

c）透射光濾光片除了GIF（綠色）外均可使用［NCB（日光平衡片）一定要使

用］,這樣就提高色溫，使得背景顏色更白一些。

d）拍攝相差圖像時(shí)就可以直接拍攝黑白圖像。因此可以使用相機(jī)的黑白模式

來(lái)拍攝。使用相機(jī)拍攝一張圖片:看看是否光場(chǎng)不勻，如果光場(chǎng)不勻那么

使用相機(jī)軟件中的平場(chǎng)校正來(lái)校正。

5）相差環(huán)的調(diào)節(jié)方法如下：

相差顯微鏡安裝完成后，先調(diào)節(jié)柯勒照明，然后將目鏡取下，換上調(diào)

中望遠(yuǎn)鏡（或使用目鏡筒中集成的伯蘭特透鏡），將物鏡和其對(duì)應(yīng)的相差環(huán)

放入光路，調(diào)節(jié)調(diào)中望遠(yuǎn)鏡的高低，直至可以清楚的看到一個(gè)黑色的圓環(huán)

和一個(gè)亮的圓環(huán)。調(diào)節(jié)的目的就是將這兩個(gè)環(huán)重合。調(diào)節(jié)是通過(guò)調(diào)節(jié)聚光

鏡上的相差環(huán)上的調(diào)節(jié)螺絲來(lái)完成的。

B

4.DIC觀察

1)基本原理

透射光DIC是一種使用偏振光來(lái)加強(qiáng)明暗對(duì)比的一種觀察方法。使得

透明的樣品可以觀察到非常清晰逼真的3D效果。

光經(jīng)過(guò)雙折射棱鏡后分裂成兩束。這兩束光分別投射到距離很近的兩

個(gè)樣品區(qū)域上，由于屈光度和樣品厚度的差異造成了光路距離的差異。兩

束光在另一塊雙折射棱鏡后聚集，在通過(guò)檢偏器后，以相同的振蕩距離衡

量。所以，兩束光在中間圖像中相互干擾，折射路徑的差異導(dǎo)致了灰度值

(密度)的區(qū)別。

DIC只適用于樣品的載體是玻璃的情況。如果是采用塑料的培養(yǎng)皿等

就不會(huì)觀察到應(yīng)有的效果。

2)配置條件

a)配置DIC的物鏡，如Plan-Neofluar。

b)與物鏡相匹配的DIC滑塊。

c)裝有DIC棱鏡(DICI,DICII,DICIII)轉(zhuǎn)輪的聚光鏡。

d)起偏器，如帶有二相濾鏡轉(zhuǎn)換器的D模式。

e)檢偏器，一定要選擇可以裝在反射光轉(zhuǎn)盤上的模塊。

f)最好配備可旋轉(zhuǎn)的機(jī)械載物臺(tái)。

3)DIC設(shè)置

a)選擇適當(dāng)?shù)腄IC物鏡，將匹配的DIC滑塊推入物鏡轉(zhuǎn)換器上的插槽。保證

DIC滑塊插到位。

b)反射光轉(zhuǎn)盤，轉(zhuǎn)入檢偏器模塊。

c)聚光鏡上轉(zhuǎn)入于物鏡相匹配的DIC模塊。

d)按照柯勒照明調(diào)節(jié)視場(chǎng)光欄和孔徑光欄。

e)旋轉(zhuǎn)DIC滑塊上的旋鈕來(lái)調(diào)節(jié)最適宜對(duì)比度。

如果想得到更好的效果，還可以在物鏡轉(zhuǎn)換輪上加入入補(bǔ)償片來(lái)觀察彩

色的DIC。對(duì)于63X物鏡，對(duì)于不同的樣品可額外選擇高分辨率DIC滑塊和

高對(duì)比度滑塊。

5.熒光觀察和拍攝

1)原理

對(duì)于發(fā)出傳統(tǒng)熒光色的熒光體來(lái)講，落射熒光技術(shù)可以保證獲得高對(duì)

比度的圖像。在落射熒光顯微鏡中，大功率照明器發(fā)出的光線通過(guò)熱反射

濾片到達(dá)激發(fā)濾片形成激發(fā)光。激發(fā)光經(jīng)過(guò)二色分光鏡反射形成比較單純

的短波長(zhǎng)激發(fā)光，通過(guò)物鏡聚焦到樣品上。樣品吸收短波長(zhǎng)激發(fā)光，發(fā)射

出長(zhǎng)波長(zhǎng)熒光(STOKE定律)，發(fā)射光由物鏡獲取，穿過(guò)二色分光鏡。最

后，發(fā)射光通過(guò)吸收濾片，保證只有來(lái)自樣品的長(zhǎng)波長(zhǎng)發(fā)射光通過(guò)。安裝

在熒光反射模塊的激發(fā)濾片和吸收濾片以及適當(dāng)?shù)亩止忡R必須完全匹

配。

2)配置

a)推薦物鏡：Plan—NeofluarorFluarobjectives(UVexcitation)

b)帶熒光模塊的反射濾鏡輪

c)100W的汞燈照明器

d)100W的鹵素?zé)糇鳛橥干涔獾墓庠?/p>

3)設(shè)置

a)打開(kāi)鹵素?zé)簟?/p>

b)旋入20X物鏡。

c)首先轉(zhuǎn)入聚光鏡H位，使用透射光聚焦好樣品。

d)在打開(kāi)汞燈之前確保FL光路關(guān)閉。

e)打開(kāi)汞燈電源，預(yù)熱15分鐘。

f）在發(fā)射鏡轉(zhuǎn)盤上選擇含有所需熒光濾片組（根據(jù)激發(fā)光）的熒光反射鏡模

塊，然后轉(zhuǎn)入光路。

g）將光路中的反射光快門打開(kāi)，關(guān)閉透射光。

h）從雙目鏡筒中拿走一個(gè)目鏡，通過(guò)鏡筒調(diào)節(jié)孔徑光欄至可見(jiàn)，然后通過(guò)調(diào)

節(jié)鈕調(diào)節(jié)其至中心位置。

i）重新放回目鏡，關(guān)閉視場(chǎng)光欄至眼睛可見(jiàn)，如果需要調(diào)節(jié)其至視場(chǎng)中心，

然后打開(kāi)視場(chǎng)光欄至其視野中剛好看不見(jiàn)位置。

j）最后，重新調(diào)焦至樣品清晰，調(diào)節(jié)汞燈，使其工作在最佳位置。尤其是當(dāng)

使用短波長(zhǎng)激發(fā)光時(shí)，使光場(chǎng)盡量均勻。長(zhǎng)波長(zhǎng)時(shí)不用考濾其位置。

注意：在使用落射熒光時(shí)，確認(rèn)汞燈已經(jīng)按照調(diào)節(jié)好，已經(jīng)將入補(bǔ)償器DIC

Slider移出光路。

四顯微鏡調(diào)節(jié)一般步驟（柯勒照明）

1.放一張你即將觀察的樣本，使用明場(chǎng)照明狀態(tài)（聚光鏡轉(zhuǎn)輪選擇H或BF,熒

光濾鏡輪選擇空位，DIC附件全部拉出光路，照相光路轉(zhuǎn)換到觀察狀態(tài)）。

10X物鏡，通過(guò)粗調(diào)和微調(diào)將其調(diào)節(jié)到樣本能觀察到的最清楚的狀態(tài)。然后

不要再動(dòng)調(diào)焦螺旋。

2.將視場(chǎng)光欄和孔徑光欄調(diào)到最小的狀態(tài)，如果顯微鏡的調(diào)節(jié)狀態(tài)正確的話,

此時(shí)在視野中應(yīng)該可以看到一個(gè)邊緣清楚的多邊形。

如果看到的不是一個(gè)邊緣清楚的多邊形，則說(shuō)明光路中的聚光鏡上下位置

不準(zhǔn)確，此時(shí)通過(guò)調(diào)節(jié)聚光鏡左手側(cè)的上下調(diào)節(jié)旋鈕使得視場(chǎng)中形成一個(gè)

邊緣清晰的多邊形，此時(shí)的聚光鏡位置就是最佳位置，以后的調(diào)節(jié)或觀察

的時(shí)候都不要再移動(dòng)其位置了。

3.視野中的多邊形的正確位置應(yīng)該是在視野的正中心，如果不在說(shuō)明光路有

偏移，需要調(diào)節(jié)柯勒照明光路調(diào)節(jié)旋鈕（聚光器對(duì)中螺釘）通過(guò)調(diào)節(jié)聚光

鏡上的柯勒照明光路調(diào)節(jié)旋鈕（兩個(gè)銀色的旋鈕）使多邊形在視野的中心。

4.將視場(chǎng)光闌慢慢放大，當(dāng)多邊形正好外切于視場(chǎng)的時(shí)候就是視場(chǎng)光欄的最

佳工作位置。在此過(guò)程中其他位置的調(diào)節(jié)不可以再動(dòng)。

5.保持聚光鏡，視場(chǎng)光欄和聚光器對(duì)中螺釘?shù)奈恢茫院蟛灰僬{(diào)節(jié)其位置。

6.取下一目鏡，將孔徑光闌調(diào)至視域的2/3,再裝回目鏡。至此，庫(kù)勒照明系

統(tǒng)調(diào)節(jié)完畢，基本上就可以正式觀察和拍照，使您能得到一個(gè)滿意的觀測(cè)

效果。

孔徑光闌：其主要作用是調(diào)節(jié)進(jìn)入視場(chǎng)的光的多少，這個(gè)對(duì)于觀察和拍攝圖

片來(lái)說(shuō)都是很重要的。它同時(shí)控制分辨率、對(duì)比度、景深等要

素。它們不能各自獨(dú)立的進(jìn)行調(diào)節(jié)。

分辨率對(duì)比度景深光亮度

孔徑光網(wǎng)全開(kāi)高低淺亮

孔徑光周關(guān)小低高深暗

孔徑光闌的調(diào)節(jié)是要和物鏡上的數(shù)值孔徑一一對(duì)應(yīng)的，經(jīng)驗(yàn)值是數(shù)值

孔徑數(shù)值X0.（如10X物鏡的數(shù)值孔徑是0.30,那么對(duì)應(yīng)的孔徑光欄的調(diào)

節(jié)位置就應(yīng)該0.3X0.8=0.24）。

附錄:

-：只能與厚度D=0或0.17毫米的蓋玻片一起使用。

Oil：油鏡。

Ph2：帶綠色環(huán)的相差物鏡，相差環(huán)為Ph2。

物鏡放大倍率的色環(huán)代碼：

物鏡上的黑棕紅橙黃綠亮藍(lán)暗藍(lán)白

色環(huán)

放大倍率1.25X2.5X4X;6.3X10X16X;20X;40X;63X100X;

5X25X;32X50X150X

物鏡放大倍率乘以目鏡放大倍率（通常為10X）即為總光學(xué)放大倍率。例

如，10xl0=100X。

使用顯微鏡進(jìn)行工作時(shí)，總放大倍率不能低于或超過(guò)有效放大倍率范圍。

有效放大倍率范圍由歐內(nèi)斯特邛可貝定律決定，為所用物鏡數(shù)值孔徑的500到

1000倍。超出這一范圍，并不能進(jìn)一步分辨細(xì)微結(jié)構(gòu)。例如，數(shù)值孔徑為0.3

的物鏡，其有效放大倍率范圍在150X到300X之間。

所用物鏡的數(shù)值孔徑越大，就越有必要使用厚度0.17mm的蓋玻片。因此，

特制的物鏡也適用厚度不同的蓋玻片（基于校正卡口）。最后，在觀察樣品時(shí)，

當(dāng)聚焦效果和圖像反差最好時(shí)，就可以確定校正環(huán)的位置了（始終需要重新聚

焦）。

使用浸潤(rùn)型物鏡時(shí)，應(yīng)該用某種液體驅(qū)除蓋玻片與物鏡間的空氣，這種液

體在絕大多數(shù)條件下是鏡油。518N浸油/518F熒光油（nD=1.515）（可裝20毫

升的塑料油盒）特別適合于這一用途。

為了避免轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器時(shí)浸油污染樣品，順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)浸油物鏡的彈性底

座，就可以高位鎖定浸油物鏡，（別忘了解除鎖定?。?/p>

BECKMAN臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

除了進(jìn)行室溫離心，為使轉(zhuǎn)頭迅速達(dá)到溫度的平衡，應(yīng)對(duì)轉(zhuǎn)頭進(jìn)行預(yù)冷或預(yù)

熱。低溫離心時(shí)可采取在所需溫度和2000rpm條件下進(jìn)行30分鐘運(yùn)轉(zhuǎn)的方法使

離心機(jī)預(yù)冷。

一電源開(kāi)關(guān)按至ON（I）,按OPENDOOR鍵打開(kāi)腔門。

二安裝轉(zhuǎn)頭前，確信錐形軸套座落于驅(qū)動(dòng)軸上，若脫落，不能操作轉(zhuǎn)頭。

三參照相應(yīng)的轉(zhuǎn)頭說(shuō)明書安裝轉(zhuǎn)頭，任何情況下，轉(zhuǎn)頭均需平衡運(yùn)行。

四關(guān)閉離心機(jī)門并向下輕按，直聽(tīng)到兩個(gè)門鎖的鎖緊聲。

五輸入運(yùn)行參數(shù)：（順序按鍵）

1.選擇轉(zhuǎn)頭號(hào)——ROTOR,▲或▼,ENTERo

2.設(shè)定運(yùn)轉(zhuǎn)速度——RPM,▲或▼或RCF,▲或

3.設(shè)置運(yùn)行時(shí)間——TIME,▲或

4.設(shè)定運(yùn)行溫度——TEMP,▲或

5.選擇加速模式（0至9）——ACCEL,▲或

6.選擇減速模式（0至9）——DECEL,▲或

六核對(duì)所有參數(shù)無(wú)誤，并鎖緊機(jī)門，按ENTER鍵和START鍵。

七設(shè)定時(shí)間計(jì)算至0,或按STOP鍵或按FASTSTOP鍵結(jié)束運(yùn)行。

八轉(zhuǎn)頭停止后，OPENDOOR亮，按OPENDOOR鍵，門鎖釋放打開(kāi)門。

九按相應(yīng)轉(zhuǎn)頭資料卸下轉(zhuǎn)頭。

注意：1.轉(zhuǎn)頭旋轉(zhuǎn)期間，切勿試圖開(kāi)啟門鎖系統(tǒng)。

2.轉(zhuǎn)頭運(yùn)行同時(shí)決不能提升或移動(dòng)離心機(jī)。

PROTEANIEF等電聚焦電泳儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

一從冰箱中取-20C冷凍保存的水化上樣緩沖液（不含DTT,不含Bio-Lyte）一

小管（1ml/管），置室溫溶解。

二在小管中加入0.01gDTT,Bio-Lyte4-6.5-7各2.5詛，充分混勻。

三從小管中取出400山水化上樣緩沖液，加入100似樣品，充分混勻。

四從冰箱取-20C冷凍保存的IPG預(yù)制膠條（17cmpH4-7）,于室溫放置10分鐘。

五沿著聚焦盤或水化盤中槽的邊緣至左而右線性加入樣品。在槽兩端各1cm左

右不要加樣，中間的樣品液一定要連貫。注意：不要產(chǎn)生氣泡，否則影響到

膠條中蛋白質(zhì)的分布。

六當(dāng)所有的蛋白質(zhì)樣品都已經(jīng)加入到聚焦盤或水化盤中后，用鏡子輕輕的去除

預(yù)制IPG膠條上的保護(hù)層。

七分清膠條的正負(fù)極，輕輕地將IPG膠條膠面朝下置于聚焦盤或水化盤中樣品溶

液上，使得膠條的正極（標(biāo)有+）對(duì)應(yīng)于聚焦盤的正極。確保膠條與電極緊密

接觸。不要使樣品溶液弄到膠條背面的塑料支撐膜上，因?yàn)檫@些溶液不會(huì)被

膠條吸收。同樣還要注意不使膠條下面的溶液產(chǎn)生氣泡。如果已經(jīng)產(chǎn)生氣泡,

用鑲子輕輕地提起膠條的一端，上下移動(dòng)膠條，直到氣泡被趕到膠條以外。

八在每根膠條上覆蓋2-3ml礦物油，防止膠條水化過(guò)程中液體的蒸發(fā)。需緩慢的

加入礦物油，沿著膠條，使礦物油一滴一滴慢慢加在塑料支撐膜上。

九對(duì)好正、負(fù)極，蓋上蓋子。設(shè)置等電聚焦程序。

十聚焦結(jié)束的膠條。立即進(jìn)行平衡、第二向SDS電泳，否則將膠條置于

樣品水化盤中，-20℃冰箱保存。

ProteanII電泳槽標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

123

456

如圖1在一水平桌面放好三明治灌膠夾（箭頭相對(duì)），在一長(zhǎng)一短兩塊玻璃

板中間放上黑色邊條，做成玻璃三明治夾心。

二把此玻璃三明治夾心在桌面上立起，擰緊三明治夾上的螺絲（黑色）。

三把灰色膠墊放到灌膠架上，把做好的玻璃三明治夾心放置其上，插入硬紙

板，略微擰松夾子上的螺絲，調(diào)節(jié)邊條的位置，完成后擰緊螺絲，圖2。

四雙手同時(shí)用力擰緊灌膠架兩側(cè)的栓梢，圖3。

五在玻璃板之間灌入配制好的凝膠溶液，圖4。如需要梳子，灌入凝膠溶液后

水平放好梳子，待其凝固。

六取出整個(gè)灌膠夾，箭頭沖里（短玻璃板沖里），慢慢推入冷卻槽模塊，雙

手食指上抬冷卻槽模塊上的黑色固定夾，拇指下壓灌膠夾幫助灌膠夾入位,

圖5。

七在冷卻槽模塊兩側(cè)都如第6步裝好玻璃板灌膠夾，如只跑一塊凝膠，需在

另一側(cè)裝入檔板（檔板的安裝：將檔板如第1步放入三明治夾，上緣對(duì)齊,

擰緊螺絲）。

八在電泳槽內(nèi)加入配好的緩沖液，外槽液面沒(méi)過(guò)電極絲，約10cm高，內(nèi)槽沒(méi)

過(guò)短玻璃板。為取得更好的電泳效果，可在電泳前把緩沖液在4度冷卻，在

冷卻槽兩端接上冷卻循環(huán)水保持低溫。

九加入樣品。

十蓋上電泳槽蓋子，接上電泳儀，注意電極方向，正極對(duì)正極（紅對(duì)紅）。

十一在電泳儀上設(shè)定電泳條件，常規(guī)條件。

十二電泳完成后，關(guān)閉電源，打開(kāi)電泳槽蓋子，取出冷卻模塊，平放在桌面上。

十三拇指下壓冷卻槽模塊上的黑色固定夾，食指上抬灌膠夾，取出灌膠夾，圖5。

十四擰松灌膠夾上的螺絲，取出玻璃板夾心，輕輕撬開(kāi)玻璃板，取出凝膠。

PROTEANPlus?Dodeca?Cell標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

簡(jiǎn)介:PROTEANPlusDodecaCell高通量電泳槽能容納12塊大型板凝膠,與PROTEAN

IEF等高通量電泳聯(lián)用。所需電泳緩沖液體積為22.5升，冷卻水推薦流速為

10-15gal/min

注意：PROTEANPlusDodecaCell使用，在移動(dòng)電泳槽蓋子前，必須先切斷電源。

推薦電泳實(shí)驗(yàn)條件：200V衡壓，6小時(shí)。外接冷凝水能使電泳緩沖液的溫度

冷卻至18-20度。

—PROTEANPlusDodecaCell儀器主要部分(圖1)

1.負(fù)極

2.歧管道

3.歧管裝置

4.正極

5.緩沖液排氣管

6.陽(yáng)極板

7.玻板夾

8.緩沖液管道

9.陶瓷冷卻芯

10.緩沖循環(huán)通道

11.冷卻循環(huán)通道

12.陰極板

二儀器使用

按圖2所示將緩沖液循環(huán)系統(tǒng)連接好：

循環(huán)泵是緩沖液循環(huán)系統(tǒng)關(guān)鍵部件，包括電源

線及備用保險(xiǎn)絲。緩沖液從電泳槽蓋子頂部管道通

過(guò)循環(huán)泵再?gòu)碾娪静鄣撞拷涌谶M(jìn)入電泳槽完成循

環(huán)，必須正確連接保證正確的循環(huán)方向。將循環(huán)泵

,ProperSet-upoftheBufferRecirculationPathway(BRP).

流速調(diào)到最到。

三儀器操作

1.標(biāo)準(zhǔn)電泳緩沖液(IX)制備：按照下表來(lái)選擇并制備適合實(shí)驗(yàn)的電泳緩沖液

并裝滿緩沖液槽。

1)Tris/Glycine/SDS：25mMTris-Base(M.W.121.1),192mMGlycine(M.W.

75.07),0.1%SDS,pH8.3

2)Tris/Tricine/SDS：100mMTris-Base(M.W.121.1),100mMTricine(M.W.

179.2),0.1%SDS,pH8.3

3)Tris/BoricAcid/EDTA(TBE)：89mMTris-Base(M.W.121.1),89mMboric

acid(M.W.61.83),2mMEDTA(M.W.372.26),pH8.3

4)Tris/AceticAcid/EDTA(TAE)：40mMTris,20mMaceticacid,1mMEDTA,

pH8.0

2.凝膠制備

1)在多板凝膠灌制器中交錯(cuò)加入丙烯模塊和塑料薄墊片，并估計(jì)留出手灌膠多

套電泳玻璃板的空間。

2)插入成套的電泳玻璃板，每套電泳玻璃板間用塑料薄墊片隔開(kāi)。

3)裝上塑料閥門(stopcockvalve),并平衡地旋緊四個(gè)螺絲。

4)從頂部灌膠，或者通過(guò)485型梯度生成儀從底部注入梯度膠。

5)調(diào)節(jié)塑料閥門，使膠面達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需高度。

6)待膠凝結(jié)后，打開(kāi)多板凝焦膠灌膠器，將含凝膠的玻璃電泳板如圖3所示方

向插入電泳槽中。

注意：當(dāng)使用PROTEANII20x20CM的預(yù)制膠時(shí)，需按圖4所示將11個(gè)歧管道

膠管插入歧管裝置中以保證緩沖液的循環(huán)。

PROTEANPlusHingedSpacerPlatesPROTEANIIReadyGelprecast

gdsandPROTEANIIhandcast

3.蓋上蓋子，，接通緩沖液循環(huán)系統(tǒng)電源，接通冷卻循環(huán)系統(tǒng)電源。

4.將連接線插入相應(yīng)電泳儀（PowerPacHC或PowerPacUniversal）,接上電源，

進(jìn)行電泳，電泳條件：200V約6個(gè)小時(shí)。

5.電泳結(jié)束

1）關(guān)掉電泳儀，關(guān)掉緩沖液循環(huán)系統(tǒng)，關(guān)掉冷卻循環(huán)系統(tǒng)電源，從電泳槽中將

凝膠玻板取出。

2）將玻板連接處向左，短玻板朝上平放在桌上，用剝膠板將短玻板輕輕向上分

開(kāi)并完全打開(kāi)，沿兩邊玻璃墊片將凝膠分開(kāi)。

3）雙手將凝膠完全從玻璃板上剝離。

4）進(jìn)行電泳之后的工作如染色分析或轉(zhuǎn)膜。

四儀器保養(yǎng)注意事項(xiàng)

緩沖液電泳槽、墊片、電極板及蓋子均需要在實(shí)驗(yàn)之后進(jìn)行清洗。如果

長(zhǎng)期不使用需將剩余緩沖液倒掉并徹底沖洗所有部件。

PowerPacUniversal電泳儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

PowerPacUniversal電泳儀提供電泳中所需的恒流或恒壓電流，并可提供限

流或限壓，PFd斷電保護(hù)，可在斷電重啟后，自動(dòng)繼續(xù)中斷的程序（程序?yàn)槎〞r(shí)

或多步程序）;其RRCd電阻過(guò)快變化保護(hù)，可控制電阻在短時(shí)間內(nèi)的過(guò)快變化。

輸出參數(shù)為電壓：10-500V；電流：0.01-2.5A；功率：1-500W（最大）。

1.打開(kāi)電源，電源開(kāi)關(guān)在儀器右側(cè)。

2.連接電泳槽等設(shè)備：

注意電源線上有紅/黑標(biāo)記

儀器面板主視圖

按鍵說(shuō)明：

Run/Pause運(yùn)行/暫停

Stop/Home停止/主菜單

Setup設(shè)置

EDIT編輯/確認(rèn)

ArrowKeys上下移動(dòng)

CE刪除鍵

3.如是定時(shí)的程序，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)停止運(yùn)行；如是不定時(shí)的程序，按Stop鈕終止。

4.關(guān)閉電泳儀電源之前，先按Stopo

全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（Skanltsoftware2.2）

-新建用戶

1.點(diǎn)擊桌面上的快捷方式，出現(xiàn)對(duì)話框，默認(rèn)的用戶名是admin,沒(méi)有密碼。

當(dāng)然，也可以不建新的用戶名，直接以admin進(jìn)入后面的程序。

2.在用戶管理窗口，點(diǎn)擊NewUser,出現(xiàn)AddUser對(duì)話框，選擇Administrators

組，輸入必要的用戶信息，按確定，退出程序。

二數(shù)據(jù)管理

1.Skanlt軟件的數(shù)據(jù)管理采用數(shù)據(jù)庫(kù)方式，編寫的實(shí)驗(yàn)方法稱為session,每個(gè)

session運(yùn)行的結(jié)果稱為runs。如果要?jiǎng)h除特定session,需要先全部刪除這個(gè)

session下所有的runs。

2.點(diǎn)擊快捷方式進(jìn)入主程序。輸入用戶名admin,密碼為空。

3.點(diǎn)擊Session下的New或Open可以新建或打開(kāi)已有程序。

4.點(diǎn)擊Open后，可以選擇打開(kāi)已有的程序或該程序已運(yùn)行的結(jié)果（點(diǎn)Runs）。

三新建程序

1.在Session下選擇New,出現(xiàn)Createnewsession對(duì)話框。選擇Emptyprotocol,

輸入Sessionname（系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)生成相同的protocolname）,下一步next。

2.在板型選擇界面（platelayout）中選擇所用的酶標(biāo)板。如果選擇“Usedefault”,

默認(rèn)為96孔板。下一步next。

3.最后點(diǎn)擊Finish,完成新建程序。出現(xiàn)程序主界面。

4.主界面分為三欄。左上欄分為protocol實(shí)驗(yàn)方法），Platelayout（板型），Result

（結(jié)果分析）和Runlog（運(yùn)行記錄，這個(gè)沒(méi)什么用）。左下欄是左上欄中各

項(xiàng)目的具體步驟。而右邊欄是左下欄中各步驟的具體參數(shù)或結(jié)果。

5.點(diǎn)擊Protocol后，可以在Steps中添加實(shí)驗(yàn)方法。具體方法是按鼠標(biāo)右鍵?；?/p>

菜單欄Stepso

6.常用的兒個(gè)命令有，PlateIn（板進(jìn)），Plateout（板出），Incubate（孵育）,

Shake（振蕩）、Photometric（比色）和PhotometricScanning（全波長(zhǎng)掃描），

以及Kineticloop（動(dòng)力學(xué)循環(huán)）。

1）PlateIn和Plateout。如果需要直接打開(kāi)或關(guān)閉酶標(biāo)板托架，可以直接點(diǎn)擊快

捷工具欄上的圖標(biāo)執(zhí)行。

2）Incubate（孵育）?？梢栽O(shè)置孵育時(shí)間和溫度。注意，孵育時(shí)間的選擇，有兩

種設(shè)置。另，儀器的當(dāng)前溫度見(jiàn)主程序界面的底部。

3）Shake（振蕩）?？梢栽O(shè)置Ontime振板時(shí)間，OFFtime停頓時(shí)間和總的時(shí)間。

例如，先振板20s,然后停頓10s,再振20s停10s,2個(gè)循環(huán)共Imin。Speed

指振蕩的速度，Amplitude指振蕩的幅度，這兩個(gè)參數(shù)之間相互限制，如果

某一個(gè)調(diào)的特別大，則另一個(gè)參數(shù)會(huì)自動(dòng)變小，以防止液體濺出。

4）Photometric（比色）。可以設(shè)測(cè)量的波長(zhǎng)（單波長(zhǎng)），也可以設(shè)多波長(zhǎng)同時(shí)檢

測(cè)oPhotometricScanning（全波長(zhǎng)掃描）。

5）Kineticloop（動(dòng)力學(xué)測(cè)量）。在KineticLoop中，可以設(shè)置動(dòng)力學(xué)測(cè)量的次數(shù)，

以及測(cè)量的時(shí)間間隔。在Photometric中可以設(shè)置測(cè)量的波長(zhǎng)。

7.點(diǎn)擊PlateOut可以設(shè)置具體的測(cè)量孔?？梢赃x擇右下角的FillWizard,進(jìn)入

填充向?qū)А?/p>

1）有以下幾種孔的類型。Blank（空白），Calibrator（標(biāo)準(zhǔn)品），Control（質(zhì)控

品），Empty（空孔），Unknown（待測(cè)樣品）。

2）右邊部分是稀釋標(biāo)準(zhǔn)品部分。Concentrat沁n,就是稀釋前濃度；Unit輸入單

位，如mg或mmol；再勾上Generateseries,點(diǎn)擊Concentrations按鈕，進(jìn)入

Concentration對(duì)話框。

3）如圖，初始濃度1.0,每次稀釋10倍（每次除10）,共5個(gè)樣品，每個(gè)2個(gè)

重復(fù)。當(dāng)然，除了除法，也可以用+、-、*。還可以輸入任意值，選Multiple

valueso

Concentr&tions

4)5,得到下圖。如果鼠標(biāo)落在定義好的孔上,會(huì)顯示孔的類型，及標(biāo)準(zhǔn)

rm濃度°

eeeeeeee

eeeeeeee

eeeee

ooeeeee

02

rats

lmbAsayeeeee

ieegaaieeeeee

eeeeeeeeeeee

eeeeeeeeeeee

5）Unknown的設(shè)定類似。設(shè)定數(shù)量（20個(gè)樣品）和2個(gè)重復(fù)樣品后得到下圖。

FillVizardE3

e?

e

Current3

Dilution

1：|i3以江；［

I-Generateseries

ClearAllLo&dIDsAddAddtndCloseCjlose

6）Blank最簡(jiǎn)單，設(shè)一下數(shù)量即可。得到下圖。

1234567891012

Cal_0001Cal_0001Un_0001Un_0001Un_0009Un_0009Un_0017Un_0017

AssayAssayAssayAssayAssayAssayAssayAssay

A

1mg1mg1:11:11:11:11:11:1

Cal_0002Cal_0002Un_0002Un_0002Un_0010Un_0010Un_0018Un_0018

AssayAssayAssayAssayAssayAssayAssayAssay

B

01mg0.1mg1:11:11:11:11:11:1

Cal_0003Cal_0003Un_0003Un_0003Un_0011Un_0011Un_0019Un_0019

AssayAssayAssayAssayAssayAssayA5sayAssay

C

0.01mg0.01mg1:11:11:11:11:11:1

Cal_0004Cal_0004Un_0004Un_0004Un_0012Un_0012Un_0020Un_0020

AssayAssayAssayAssayAssayAssayAssayAssay

D

0.001mg0.001mg1:11:11:11:11:11:1

Cal_0005Cal_0005Un_0005Un_0005Un_0013Un_0013

AssayAssayAssayAssayAssayAssay

E

0.0001mg0.0001mg1:11:11:11:1

Un.OOOBUn_0006Un_0014Un_0014Blank_AssBlank_Ass

AssayAssayAssayAssayAssayAssay

F

1:11:11:11:1

Un_0007Un_0007Un_0015Un_0015