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1.

ELISA的原理2.

ELISA的類型3.試劑準(zhǔn)備：免疫吸附劑結(jié)合物酶底物的準(zhǔn)備4.對(duì)照設(shè)定5.標(biāo)本的采取和保存6.結(jié)果判斷

ELISA是一種免疫測(cè)定（immunoassay，IA）?；A(chǔ):抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。1.

ELISA的原理酶免疫測(cè)定類型

這種固相酶免疫測(cè)定方法在1971年最初建立時(shí)稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay），簡(jiǎn)稱ELISA。酶免疫技術(shù)酶免疫組化酶免疫測(cè)定均相酶免疫測(cè)定非均相酶免疫測(cè)定固相酶免疫測(cè)定液相酶免疫測(cè)定1.1抗原抗體反應(yīng)

1.1.1可逆性

抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：Ag+Ab→Ag·Ab

抗體的親和力（affinity），可以用平衡常數(shù)K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab],Ag·Ab的解離程度與K值有關(guān)。高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性。1.1.2特異性

抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與抗體的結(jié)合位點(diǎn)之間?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型互補(bǔ)關(guān)系，具有高度的特異性。

測(cè)定某一特定的物質(zhì)，而不需先分離待檢物。

1.1.3最適比例

1.1.4敏感性化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平酶反應(yīng)測(cè)定法的敏感度約為5-10μg/ml免疫測(cè)定中凝膠擴(kuò)散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿標(biāo)記的免疫敏感度可提高數(shù)千倍，達(dá)ng/ml水平例如，HBsAg，其敏感度可達(dá)0.1ng/ml。1.4免疫測(cè)定在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原，因此免疫測(cè)定的應(yīng)用范圍極廣。2

ELISA的類型ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；（3）酶反應(yīng)的底物?？稍O(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。2.2.1雙抗體夾心法測(cè)抗原此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。2.2.2雙抗原夾心法測(cè)抗體

用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測(cè)定，因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBsAg的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標(biāo)記方法。2.2.3間接法測(cè)抗體

傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測(cè)相應(yīng)抗體的方法。2.2.4競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體

當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。

2.2.5競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原

小分子抗原或半抗原缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，最后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。

2.犁2.蜓6捕獲羅包被自法測(cè)歌抗體Ig謊M的檢賞測(cè)常頁(yè)用于晨傳染私病的流診斷蠅。用鄉(xiāng)豐抗人Ig剖M抗體昌包被塵固相義，以隸捕獲咐血清敬標(biāo)本標(biāo)中的Ig好M（其廈中包就括針質(zhì)對(duì)抗艦原的衰特異明性Ig頸M抗體悉和非甚特異雪性的Ig途M）。此法年常用暴于病壇毒性俗感染革的早械期診倘斷。2.鍋2.軟7造AB簡(jiǎn)S-領(lǐng)EL歐IS太A法①：固鍋相支騰持物塌；②：兩樣品綠；③：遇特異滿性Ig怨G；④：兼生物安素化飼抗小銀鼠Ig姐G（Bi翅ot傷in）；⑤：臣辣根伍過(guò)氧宣化物姐酶HR職P-酶標(biāo)得鏈親柔和素訪（Av岔id尿in）；⑥：DA陸B(tài)顯色賺液；⑦：抽顯色免；3.聯(lián)EL住IS治A的試懼劑(A、B、C三部廢分)EL窩IS欺A中有冰三個(gè)班必要純的試伸劑：腐免疫立吸附粘劑、楚結(jié)合跪物和或酶的灑底物譯。（1）已池包被全抗原潛或抗萌體的今固相勿載體推（免肚疫吸尚附劑有）；（2）酶燈標(biāo)記討的抗鄭原或土抗體棋（結(jié)攤合物尖）；（3）酶宴的底勢(shì)物；（4）陰容性對(duì)奸照品在和陽(yáng)阻性對(duì)炒照品旬，參選考標(biāo)漂準(zhǔn)品陸；（5）結(jié)爛合物賭及標(biāo)不本的慢稀釋緩液；（6）洗漂滌液抹；（7）酶本反應(yīng)躬終止憶液EL飾IS潤(rùn)A的試皆劑準(zhǔn)拒備A固相焦載體聚苯菠乙烯姐具有墾較強(qiáng)左的吸獵附蛋累白質(zhì)筋的性晉能，介抗體閑或蛋易白質(zhì)是抗原蹄吸附虛其上澆后仍目保留妨原來(lái)北的免瓶疫學(xué)壟活性滾。聚氯賞乙烯抗。聚油氯乙嫌烯對(duì)灑蛋白缸質(zhì)的摩吸附紗性能化比聚寸苯乙弦烯高枯，但葉空白俗值也黑略高鳳。良好象的EL惹IS余A板應(yīng)奶該是吸附果性能押好，空白冤值低，孔底查透明濫度高，各純板之孫間、壇同一拼板各妙孔之嚴(yán)間、鎮(zhèn)同一紋板各甩孔之淹間性能衛(wèi)相近。3.財(cái)1.點(diǎn)2包被稀的方鏡式將抗銜原或電抗體濕固定爭(zhēng)在過(guò)放程稱道為包貓被(c看oa鴨ti蔬ng鋒)。蛋白真質(zhì)與聚符苯乙盯烯固歐相載搜體是角通過(guò)竹物理去吸附熔結(jié)合約的，零靠的膽是蛋牛白質(zhì)屠分子先結(jié)構(gòu)幫上的矛疏水咽基團(tuán)局與固拍相載兵體表貌面的錯(cuò)疏水見基團(tuán)沖間的板作用竊。這季種物叛理吸述附是彩非特甚異性僚的，丙受蛋遮白質(zhì)駱的分春子量牛、等夸電點(diǎn)討、濃專度等耀的影趴響。滴大分桐子蛋榴白質(zhì)恥較小胖分子伏蛋白吃質(zhì)通口常含隸有更奴多的疏水批基團(tuán)，故血更易肚吸附負(fù)到固叫相載判體表古面。不易極吸附的非糞蛋白蟻質(zhì)抗影原可習(xí)用間排接包襪被的宋抗原峰經(jīng)固懷相抗帥體的訂親和竊層析協(xié)作用輔，包依被在移固相始上的鳥抗原床純度訓(xùn)大大皺提高寶，因磚此含臂雜質(zhì)活較多態(tài)的抗籮原也鮮可采酬用捕翠獲包讀被法垃。親和稠素生破物素即用東親和亦素先光包被奮載體剖，加戒入生歸物素值化的DN煮A，這諷種包越被方慨法均姨勻、批牢固窯，已燦擴(kuò)大駱應(yīng)用歡于各甘種抗仗原物別質(zhì)的險(xiǎn)定量丹測(cè)定銹。脂類源物質(zhì)無(wú)法牛與固花相載僻體結(jié)引合，轟可將訪其在班有機(jī)騙溶劑喪（例筐如乙抽醇）絮中溶塔解后能加入EL痰IS儉A板孔默中，秤開蓋字置冰晃箱過(guò)艇夜或縫冷風(fēng)填吹干遙，待以酒精真揮發(fā)遞后，喘讓脂統(tǒng)質(zhì)自踐然干晌固在案固相析表面序。優(yōu)點(diǎn)早：試范驗(yàn)的聾特異罪性、陪敏感盈性均餃由此產(chǎn)得以今改善辜，重周復(fù)性染亦佳核。抗救原用鞋量少館，僅憂為直男接包或被的1/虹10乃至興于/1偽00。包被爭(zhēng)用抗絕原：天然憲抗原兄、重湖組抗相原和饒合成責(zé)多肽狗抗原疏三大循類。合成羊多肽樂(lè)抗原是抗貢原決響定簇韻的氨漫基酸抄序列線人工賢合成溝的多所肽片證段。饒一般悶只含呆有一晝個(gè)抗妨原決鵲定簇頂，純繁度高今，特凱異性鎖也高受，但占由于紐奉分子策量太運(yùn)小，慣往往龜難于室直接涼吸附截于固廁相上始。借或助于位偶聯(lián)下物與辮固相淹載體乖的吸做附，猾間接糠地結(jié)左合到生固相探載體扮表面漂。3.嫩1.萬(wàn)4包被蹤蝶用抗首體Ig耍G對(duì)聚判苯乙議烯有兩強(qiáng)吸豆附力增，其電聯(lián)結(jié)宵發(fā)生凈在Fc段上連，抗覺體結(jié)的合點(diǎn)緞暴露紛于外何。取材閣于抗飛血清概或含腦單克笛隆抗禮體的瀉培養(yǎng)海液.須除患去雜渠抗體笨后才魚能用港于EL傻IS忠A，以解保證居試驗(yàn)梯的特湯異性桂。腹水緊中單狡抗的乞濃度慕較高爬，特砍異性蝦亦較萌強(qiáng)，仙因此劑不需奴要作歸吸收換層析按處理機(jī)，直倆接包澤被。屈在某糠些情碰況下助，用蘭多種挖單抗鏟混合算包被謊，可每取得蔬更好嘴的效嚷果。3.烏1.犧5包被拖的條枕件pH礎(chǔ)9.度6碳酸念鹽緩告沖液pH膠7.設(shè)2的磷脅酸鹽泳緩沖悼液pH領(lǐng)7-債8的Tr但is賠-H糞CL緩沖暈液。加入帝包被炕液后炊，在4-害8℃冰箱判中放驢置過(guò)默夜，37終℃中保濾溫2小時(shí)約。包袖被濃貸度隨厲載體葵和包霸被物姐的性些質(zhì)可淺有很浪大的鋪?zhàn)兓?，每蠟批材刷料需漢通過(guò)雪實(shí)驗(yàn)踐與酶欺結(jié)合嗚物的營(yíng)濃度倘協(xié)調(diào)殖選定芝。一恩般蛋斃白質(zhì)都的包茅被濃啄度為10償ng清/m語(yǔ)l-鑒20躺ug下/m趣l。3.夜1.刊6封閉封閉(b摟lo犧ck該in躲g)是繼船包被狀之后釋用高印濃度賀的無(wú)保關(guān)蛋泛白質(zhì)獅溶液鴨再包邁被的鞋過(guò)程渣。封罩閉就燭是讓燃大量記不相適關(guān)的甚蛋白痕質(zhì)充液填這法些空含隙，截從而故排斥EL盼IS岡A后的澤步驟譯中干涂擾物兇質(zhì)的永再吸涌附。常用豪封閉耽劑：0.磁05痕%-映0.洪5%的BS巖A;裳1朋0%的小搬牛血覽清或1%明膠;脫脂籃奶粉,比較唯價(jià)廉須，可換以高懶濃度因使用堪（5%）。所有蝦的EL擋IS萌A固相拘均需廚封閉燥？3.翼4洗滌粗液在板呆式EL嶺IS拆A中，后常用蘋的稀帆釋液減為含0.撫05餅%吐溫20磷酸蜓鹽緩縱沖液鹿。EL死IS法A的試壺劑準(zhǔn)把備B3.闊2結(jié)合懷物即酶察標(biāo)記具的抗白體（獸或抗?jié)┟馐荅L效IS疑A中關(guān)踢鍵的碧試劑1酶的仔催化僻活性2抗體孕（或擾抗原租）的喇免疫覺活性3含有象或少壤含有脾游離旦的抗胡體（伏或抗登原）4結(jié)合性物尚難要有股良好導(dǎo)的穩(wěn)葵定性頑。3.你2.溫1結(jié)合甚物用衣的抗屑原和灶抗體制備隙結(jié)合禾物時(shí)果所用皺純度肉較高竄的Ig科G，以添免在常與酶坡聯(lián)結(jié)春時(shí)其它他雜揮蛋白歉的干孤擾。喚最好方用層曉析純他化的坦抗體遞，這寬樣全乳部酶責(zé)結(jié)合步物均介具有匠特異街的免直疫活湯性，綱可以至在高梨稀釋干度進(jìn)孟行反超應(yīng)，懸實(shí)驗(yàn)境結(jié)果蓮本底質(zhì)淺淡返。在EL宇I(lǐng)S鳴A中用唇酶標(biāo)底抗原翅的?；讲焕ザ?，蛙總的嚼要求思是抗鮮原必促須是賭高純判度的沸。3.伯2.純2酶純度技高，干催化懂反應(yīng)腰的轉(zhuǎn)掘化率抱高，坦專一株性強(qiáng)低，性田質(zhì)穩(wěn)判定，論來(lái)源磚豐富苦，價(jià)桃格不喪貴，偵受檢奴標(biāo)本盟中不截存在怠相同肌的酶述。酶結(jié)片合物容保留胸活性禍部分防和催乎化能辦力，殃底物屈易于序制備招和保子存，晃價(jià)格校低廉婚，有肺色產(chǎn)丈物易香于測(cè)廉定等珠。在EL梳IS請(qǐng)A中，HR錫P，AP，葡其萄糖志氧化際酶，β-逮D-半乳滑糖苷武酶和協(xié)脲酶釀等。HR稿P是一努種糖腐蛋白激，含賊糖量淹約為18賺%，分肌子量豪為44盟00懷0，是春一種紋復(fù)合瞎酶，胃由主泰酶（棟酶蛋悄白）把和輔澇基（焰亞鐵彎血紅研素）胳結(jié)合峰而成琴，是與一種綠卟啉欠蛋白蹄質(zhì)。3.推2.雁3結(jié)合僵物的崖制備酶標(biāo)近記抗害體的本制備堵方法跌主要姿有兩善種，董即戊灣二醛貸交聯(lián)晌法和難過(guò)碘梳酸鹽揀氧化污法。（1）戊二宜醛交脖聯(lián)法廳：戊甘二醛暴是一襲種雙確功能乒團(tuán)試扭劑，途可使另酶與學(xué)蛋白惹質(zhì)的皺氨基悲通過(guò)麗它而蹄聯(lián)結(jié)姿。有削效（緒結(jié)合辭率達(dá)60漁%-擋70千%）和伐重復(fù)收性好辨。交聯(lián)赤反應(yīng)囑是隨逮機(jī)的承，結(jié)疊合物懷的大極小也趕不均嘴一，憶酶與刷酶，臣抗體竿與抗巴體之容間也參有可紹能交品聯(lián)，拔影響榴效果怨。（2）過(guò)限碘酸持氧化壩法：鉗適用腳含糖蜓量較蛇高的道酶。粘過(guò)碘觸酸鈉旁將HR鋼P(yáng)分子信表面宅的多雅糖氧膠化為換醛基旗很活蘋潑，夢(mèng)可與背蛋白痕質(zhì)上纏的氨挑基形耀成ch圖if罷f氏堿柴而結(jié)拘合。西簡(jiǎn)便博有效.結(jié)合惰物中埋混有俘的游籠離酶陣一般濃不影猛響EL棵IS孤A中最逮后的鉤酶活壯性測(cè)膊定。淡但游寄離的燭抗體在則會(huì)搬與酶固標(biāo)抗宗體競(jìng)蛋爭(zhēng)相孫應(yīng)的慨固相比抗原拾，因默此制斥備的滅酶結(jié)博合物劫應(yīng)予斧純化黎，去技除游蘆離的來(lái)酶和寺抗體授后用蹲于檢域測(cè)，迎效果待更好魂。制得少結(jié)合軌物，旬最適基的工弓作濃燭度就染是指駱結(jié)合蓬物稀惰釋至蜘這一辭濃度歉時(shí)，上能維遵護(hù)一淺個(gè)低佛的本打底，障并獲勢(shì)得測(cè)捎定的憶最佳古靈敏瞇度，缺達(dá)到忍最合帆適的禾測(cè)定元條件酷和測(cè)餓定費(fèi)陷用的鬼節(jié)省描。3.麻2.祖4結(jié)合福物的啄保存酶和喇抗體瓶均為箱生物堪活性償物質(zhì)振，易竿失活媽。高析濃度愿較為保穩(wěn)定使，凍棕干后鼠可在拒普通顛冰箱笨中保態(tài)存一娘年左否右。屋結(jié)合統(tǒng)物溶仿液中悲加入育等體黃積的捐甘油阿，加括入蛋喚白保座護(hù)劑熄。另息外再撈加入騎抗生掩素（巾例如銜慶大池霉素邪）和養(yǎng)防腐恒劑（HR總P結(jié)合敬物加市硫柳捷泵，AP結(jié)合東物可哲加疊靜氮鈉湯）。3.斧2.杏5結(jié)合排物的塔稀釋袍液用于仆稀釋暫高濃含度的棉結(jié)合法物以午配成命工作尚液。盟為避摟免結(jié)刑合物資在反蟲應(yīng)中已直接義吸附爆在固期相載襖體上憶：0.成1%牛血辜清白鍬蛋白秒，0.雄05志%吐溫20。試濤劑盒皇均已筐用合五適的宋緩沖絲式液配歌成工貍作液性，使請(qǐng)用時(shí)制不需饒?jiān)傩袆蛳♂屘兀?-抓8℃保存雁期可杯達(dá)6個(gè)月覺。試劑應(yīng)準(zhǔn)備C酶的遵底物3.檢3酶的逢底物3.怎3.秤1HR站P的底附物OP共D氧化同后的臟產(chǎn)物臺(tái)呈橙起紅色選，用漂酸終耕止酶棚反應(yīng)窯后，屈在49校2n翠m處有蟻?zhàn)罡呶逦兆o(hù)峰，癢靈敏顛度高訴，比飽色方熄便，熱是HR碌P結(jié)合估物最泰常用繞的底攻物。DH2+H2O2

D+2H2O

上式中，DH2為供氧體，H2O2為受氫體。DH2一般為無(wú)色化合物，經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)物。DH2如：鄰苯二胺(OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和ABTS。ETM籍B經(jīng)HR鞋P作用騾后共但產(chǎn)物塞顯藍(lán)乳色。TM狀B性質(zhì)啊較穩(wěn)少定，年可配煤成溶懷液試著劑，隱只需漠與H2O2溶液足混和刷即成玻應(yīng)用懷液?？用阜纯藨?yīng)終型止后悶，TM友B產(chǎn)物號(hào)由藍(lán)戚色呈生黃色暗，可怕在比吐色計(jì)疊中定贈(zèng)量，史最適獸吸收磚波長(zhǎng)蒙為45剝0n模m。AB鞠TS雖不鈔如OP菌D和TM廳B敏感舒，但制空白棍值極暖低，握也為資一些午試劑吩盒所螞采用庭。HR猛P對(duì)氫殿受體粗的專座一性燈很高寺，僅咸作用臥于H2暴O2、小賠分醇深的過(guò)蛙氧化敢物和袖尿素峽過(guò)氧策化物(u逗re爪a丸pe礎(chǔ)ro喜xi風(fēng)de魯)。AP的底止物為節(jié)磷酸情酯酶紫，一乓般采巨用對(duì)硝基腐苯磷許酸酯作為形底物羅。產(chǎn)雷物為悉黃色救的對(duì)蹲硝基泄酚，毅在40震5n屢m波長(zhǎng)予處有盆吸收句峰。普用Na貪OH終止衰酶反對(duì)應(yīng)后槍，黃潮色可腐穩(wěn)定財(cái)一時(shí)哀間。AP也有祝發(fā)熒哪光底另物（厚磷酸4-甲基量傘酮棕），把可用認(rèn)于EL附IS找A作熒戒光測(cè)昌定，蹲敏感裕度較辜高于荒用顯源色底效物的躍比色蜓法。3.拼5酶反雙應(yīng)終莊止液常用裹的HR涌P反應(yīng)位終止放液為液硫酸顛，其犧濃度恢按加摧量及參比色沒(méi)液的弓最終察體積母而異畏，在暮板式EL雞IS蜻A中一爽般采警用2m滑ol叮/L。4對(duì)照烤設(shè)定陽(yáng)性拐對(duì)照秒品(p陽(yáng)os若it歸iv血e群co霸nt芝ro意l)和陰睡性對(duì)少照品(n羽eg引at叛iv橋e失co鳥nt符ro達(dá)l)是檢殖驗(yàn)試糾驗(yàn)有候效性峽的控抱制品診，同濁時(shí)也廢作為訴判斷沸結(jié)果定的對(duì)半照。陽(yáng)性書對(duì)照澤品的慢基本塞組成饑應(yīng)盡綿量與喝檢測(cè)汗標(biāo)本旋的組闖成相幸一致花，多蟲以含仔蛋白憐保護(hù)軋劑的政緩沖治液為也基質(zhì)鋼。加入盼的量臥應(yīng)與徐試劑蒙的敏絡(luò)感度港相稱翁；在測(cè)齒定中四得到皮的吸脅光值鉗與受民檢標(biāo)壓本吸跡光值右比較奧，可言以估餃計(jì)標(biāo)床本物高質(zhì)的誼量。參考挺標(biāo)準(zhǔn)到品定量變測(cè)定厘（如亂甲胎滔蛋白燦質(zhì)，轎癌胚持抗原水測(cè)定悶等）新應(yīng)含存有制商作標(biāo)帖準(zhǔn)曲新線用昂的參岔考標(biāo)刪準(zhǔn)品爆，應(yīng)傳包括傭覆蓋頃可檢言測(cè)范約圍的4-糟5個(gè)濃仁度，漸一般充均配治入含錘蛋白倦保護(hù)皇劑及構(gòu)防腐鑄劑的博緩沖蝕液中.陰性烏對(duì)照攻品須尾先行遷檢測(cè)銀確定攔不含渾待測(cè)巷物質(zhì)肉。例友如HB吩sA旅g檢測(cè)哨的陰掩性對(duì)相照品要中不顯可含HB遇sA忘g，最資好抗HB醬s也是帝陰性歸。5標(biāo)本封的采欣取和集保存體液躁、分發(fā)泌物特和排楚泄物尼等均律可作延標(biāo)本頌以測(cè)半定其惡中某醋種抗麥體或刃抗原被成份明。以血很清標(biāo)似本為剃例：協(xié)血漿趟中除羊尚含灘有纖維屠蛋白熊原和抗凝早劑外，觀其他堡成份清同血離清。須血漿蔥和血攪清可羞同等晃應(yīng)用叔。血清壺標(biāo)本跪應(yīng)避教免溶幫血：量紅細(xì)架胞溶亞解時(shí)清會(huì)釋矛放出休具有叉過(guò)氧島化物刑酶活慌性的惠物質(zhì)恥，以HR識(shí)P為標(biāo)驢記的EL利IS怖A測(cè)定焦中，瘋可能宋會(huì)增怪加非朱特異就性顯孕色。加樣:在EL膜IS型A中一距般有3次加妖樣步逐聚，臭即加猛標(biāo)本凡，加亮酶結(jié)面合物范，加阿底物遲。加龍樣時(shí)辭應(yīng)將鋤所加儲(chǔ)物加雨在LE褲IS鑒A板孔伴的底襪部，慚避免檔加在距孔壁繩上部晚，并可注意盞不可粗濺出含，不辱可產(chǎn)榨生氣愧泡?；纠Σ僮饔⒁庥马?xiàng)保溫抗原世抗體薦完成襲反應(yīng)瘦的保蒸溫過(guò)跳程稱浙為溫拐育(i憤nc稅ub夠at番io艦n)。EL球IS招A屬固掩相免杠疫測(cè)準(zhǔn)定，劈燕抗原奶、抗勵(lì)體的崖結(jié)合皮只在舟固相渡表面節(jié)上發(fā)喚生。廈為什討么EL跳IS調(diào)A反應(yīng)說(shuō)總是玻需要俯一定淘時(shí)間腰的溫坑育？溫育乎常采汗用的艙溫度粉有43皂℃、37濟(jì)℃、室襪溫和4℃（冰鋸箱溫諒度）弄等。37盤℃是實(shí)鉗驗(yàn)室儀中常和用的辨保溫微溫度年，也鋒是大蛾多數(shù)盆抗原洗抗體條結(jié)合社的合杰適溫棗度。保溫慎方式葡：EL胞IS蝦A儀器袍附有雪特制襖的電泰熱塊本，水螺浴。若用玻保溫德箱：EL范IS盈A板放扒在濕停盒內(nèi)霧，在陷盒底占?jí)|濕裁的紗憐布，退最后誘將EL宮IS烏A板放交在濕捉紗布扶上。諒反應(yīng)矛板均騎不宜傻疊放鈴，以掛保證綢各板至的溫詢度都岸能迅券速平頸衡。室溫戰(zhàn)溫育疏的反嬌應(yīng)，狀操作警時(shí)的份室溫說(shuō)應(yīng)嚴(yán)決格限煙制在私規(guī)定擇的范傅圍內(nèi)撞，標(biāo)陶準(zhǔn)室移溫溫養(yǎng)度是院指20罷-2形5℃，但閥具體陰操作益時(shí)可彼根據(jù)動(dòng)說(shuō)明顯書的探要求其控制刃溫育鉗。應(yīng)遇注意候溫育爸的溫垂度和宣時(shí)間薦應(yīng)按重規(guī)定穴力求撈準(zhǔn)確走。為頌保證臘這一撓點(diǎn)，級(jí)一個(gè)家人操惰作時(shí)躍，一疼次不全宜多廳于兩透塊板述同時(shí)鮮測(cè)定瓜。洗滌洗滌綠在EL臘IS么A過(guò)程有中雖勉不是翁一個(gè)陰反應(yīng)芳步驟葵，但幻玉卻也吸決定液著實(shí)輝驗(yàn)的裂成敗劑。EL排SI庸A洗滌址：達(dá)遙到分拍離游鄰離的價(jià)和結(jié)對(duì)合的糕酶標(biāo)貝記物峰的目遣的。清除逮殘留挖在板鏟孔中頃游離委的物染質(zhì)，差以及耐非特交異性已地吸請(qǐng)附的池干擾擁物質(zhì)殃。聚苯炮乙烯絮等塑終料對(duì)捷蛋白抹質(zhì)的驅(qū)吸附嫂是普捏遍性徑的，捆而在內(nèi)洗滌或時(shí)又躍應(yīng)把覽這種撫非特嶄異性幻玉吸附梨的干贊擾物銳質(zhì)洗古滌下板來(lái)?？梢郧f(shuō)在EL瓦IS魂A操作套中，突洗滌挨是最夫主要應(yīng)的關(guān)勁鍵技址術(shù)。洗滌洋的方膨式除諸某些EL庸IS垃A儀器裝配有搬特殊豈的自貪動(dòng)洗并滌儀神外，請(qǐng)手工頁(yè)操作泰有流水濟(jì)沖洗聾式和浸泡橫式兩菌種：（1）流幫水沖攪洗式透流水堆沖洗吹法最殖初用援于小死珠載搏體的事洗滌涼，洗芒滌液當(dāng)為蒸搶餾水羅，自貢來(lái)水莖。洗宅滌效尿果更站為徹寶底，只且也達(dá)簡(jiǎn)便蘆、快蠻速。止已有慈實(shí)驗(yàn)咱表明極，流卷水沖竊洗式蓄同樣擊適用自于微筐量滴塞定板走的洗監(jiān)滌。孝讓水醬流沖頃擊板霞孔表枯面，圓洗滌扇效果漁更佳屠。（2）浸殼泡式區(qū)微量吵滴定割板多助采用膜。洗蜜滌液許為非離匠子型燈洗滌首劑的中稈性緩陰沖液幕。聚器苯乙絡(luò)烯載介體與擋蛋白疏質(zhì)的證結(jié)合閘是疏水偷性的，支非離纏子型中洗滌幣劑既鈔含疏遞水基傷團(tuán)，餓也含題親水煙基團(tuán)脫，使挑蛋白嬸質(zhì)回旗復(fù)到映水溶紙液狀伐態(tài)，不從而疼脫離喜固相搞載體礎(chǔ)。顯色顯色口是酶簡(jiǎn)催化乖無(wú)色離的底舊物生壘成有犁色產(chǎn)苗物的杏溫育看反應(yīng)名。反論應(yīng)的冠溫度態(tài)和時(shí)肌間仍舒是影睬響顯秩色的拼因素劫。在轎一定音時(shí)間搏內(nèi)，獸陰性聞孔可它保持鼠無(wú)色廚，而登陽(yáng)性蜓孔則智隨時(shí)邁間的鼻延長(zhǎng)障而呈劍色加洽強(qiáng)。降適當(dāng)里提高種溫度提有助諷于加慕速顯愚色進(jìn)鴿行。TM拾B受光滅照的摟影響揚(yáng)不大夏，可低在室兇溫中憤置于灘操作串臺(tái)上慰，邊格反應(yīng)慘觀察炊結(jié)果汁。但少為保孕證實(shí)偽驗(yàn)結(jié)愛果的南穩(wěn)定集性，匠宜在柴規(guī)定須的適曉當(dāng)時(shí)恥間閱趁讀結(jié)圍果。TM種B經(jīng)HR錫P作用請(qǐng)后，材約40分鐘鄰顯色錯(cuò)達(dá)頂析峰，說(shuō)隨即惹逐漸齒減弱坑，至2小時(shí)竄后即祥可完勢(shì)全消膚退至晌無(wú)色卸。比色拭干計(jì)板底鐘附著啟的液按體，懸然后尼將板犬正確滑放入計(jì)酶標(biāo)醬比色財(cái)儀中給。以蒸倍餾水雀校零芝點(diǎn)，旦測(cè)讀洋底物乳孔（烘未經(jīng)祥任何啟反應(yīng)橡僅加霉底物診液的焦孔）強(qiáng)和空底白孔磁（以樹生理化鹽水抄或稀呀釋液浮代替旅標(biāo)本觀作全姨過(guò)程禿的孔熔），浪以記述錄本診次試博驗(yàn)的舒試劑麥狀況逐。其激后可攔用空晶白孔祖以蒸朝餾水輩校零纖點(diǎn)，陡以上左各孔順的吸濾光度雕需減斷去空著白孔紅的吸的光度短，然賄后進(jìn)農(nóng)行計(jì)冒算。結(jié)果島以光非密度矮（op您li憶ca洽l南de鍵ns多it潔y，OD），饒現(xiàn)按卡規(guī)定膽用吸冒光度切（ab侵so似rb道en地ce，A），王兩者友含義跑相同棗。通尋常的皂表示禁方法始是，拉將吸筐收波腹長(zhǎng)寫盛于A字母稍的右印下角夕，如OP腦D的吸陳收波怪長(zhǎng)為49趁2n飛m，表巷示方末法為"A49鵲2nm愈"或"O難D49墻2nm河"。酶標(biāo)附比色景儀酶標(biāo)在比色錫儀簡(jiǎn)婚稱酶齒標(biāo)儀冶，通昆常指味測(cè)讀EL晚IS厘A光度偽計(jì)。捷針對(duì)色固相違載體憂形式廣的不姐同，帝各有駐特制橫的適悼用于侄板、嫂珠和奧小試冰管的刪設(shè)計(jì)丈。酶作標(biāo)儀榆的主啞要性打能指劇標(biāo)有背：測(cè)塵讀速裝度、葛讀數(shù)償?shù)臏?zhǔn)桑確性滔、重赴復(fù)性沖、精鋸確度找和可誼測(cè)范損圍、拼線性些等等仔。優(yōu)屬良的削酶標(biāo)幟儀的陷讀數(shù)責(zé)一般痛可精都確到0.租00斗1，準(zhǔn)棚確性卷為±1泊%，重將復(fù)性倘達(dá)0.促5%。操作流時(shí)室騙溫宜阿在15孩-3杜0℃，使包用前臂先預(yù)賄熱儀朽器15攻-3裕0分鐘倉(cāng)，測(cè)祥讀結(jié)麥果更勒穩(wěn)定茫。測(cè)遺讀A值時(shí)傻，要封選用困產(chǎn)物已的敏麥感吸駕收峰尾，如OP秘D用49主2n但m波長(zhǎng)芹。有旱的酶健標(biāo)儀處可用淡雙波坡長(zhǎng)式售測(cè)讀勁。各種央酶標(biāo)徹儀性娘能有件所不年同，赤使用畜中應(yīng)訓(xùn)詳細(xì)爆閱讀脅說(shuō)明汗書。6結(jié)果今判斷6.議1定性利測(cè)定定性膨測(cè)定性的結(jié)憶果判圖斷作陶出“有”或“無(wú)”的回陣答，凝分別級(jí)用“陽(yáng)性”、“陰性”表示捕。在黑這種述半定序量測(cè)點(diǎn)定中忘，將達(dá)標(biāo)本雪作一研系列廢稀釋吐后進(jìn)備行試掀驗(yàn)，珠呈陽(yáng)剪性反藍(lán)應(yīng)的頭最高恨稀釋呈度即謊