不同強(qiáng)度和頻率的刺激對肌肉收縮的影響蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的方法；觀察不同強(qiáng)度、頻率和肌肉收縮反應(yīng)之間的關(guān)系，了解肌肉收縮形成的過程。方法：采用活體蟾蜍制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本；在刺激時間恒定的條件下，分別用不同強(qiáng)度和頻率的電刺激作用坐骨神經(jīng)，再通過RM6240系統(tǒng)記錄蟾蜍腓腸肌的收縮變化。結(jié)果：給予增量為0.005v的強(qiáng)度遞增電刺激后，當(dāng)刺激強(qiáng)度在0v到0.235V之間時，肌肉不收縮；當(dāng)刺激強(qiáng)度為0.235v時，肌肉收縮曲線出現(xiàn)第一個峰；隨著刺激強(qiáng)度增加，峰值升高；當(dāng)刺激強(qiáng)度到達(dá)0.330v后，開始出現(xiàn)重合，并且隨著頻率增加，肌肉收縮曲線的重合愈多、最高點(diǎn)逐漸升高。結(jié)論：電刺激強(qiáng)度達(dá)到閾強(qiáng)度時，肌肉才開始收縮，且隨著刺激強(qiáng)度的增大，肌肉收縮增強(qiáng)；達(dá)到最大刺激強(qiáng)度后，肌肉收縮不再增強(qiáng)。電刺激現(xiàn)為單次收縮；當(dāng)增大刺激頻率，使刺激的間隔大于一次肌肉收縮的收縮時著頻率的繼續(xù)增加，使刺激的間隔小于一次肌肉收縮的收縮時間，則肌肉張力1實(shí)驗(yàn)材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動物蟾蜍(由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供)。1.1.2實(shí)驗(yàn)材料和器械屬探針，玻璃分針，鑷子，剪刀，手術(shù)剪，鐵支架，一維位移微調(diào)器，刺激電極，張力換能器，微機(jī)化生物信號采集處理系統(tǒng)(RM624)0，1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本1.2.1.1搗毀腦脊髓取蟾蜍一只，左手握住，以食指抬頭部前端使其頭部盡量后仰，右手持探針自枕骨大孔處垂直刺入，將探針向上刺入顱腔，向各側(cè)攪動，徹底搗毀腦組織；再將探針反向刺入椎管，捻動探針搗毀脊髓，直到蟾蜍四肢松軟。1.2.1.2剪除軀干上部及內(nèi)臟 (避開坐骨神經(jīng))剪除全部軀干上部及內(nèi)臟組織。邊緣，逐步向下牽拉剝離皮膚。將全部皮膚剝除。洗凈雙手和用過的器械。1.2.1.4分離兩腿右兩半，再從恥骨聯(lián)合中央剪開。將標(biāo)本放置于任氏液的培養(yǎng)皿中。1.2.1.5分離坐骨神經(jīng)本卑微固定于干凈的蛙板上。用玻璃分針縱向探查坐骨神經(jīng)的走向，用剪刀剪開周圍肌肉等組織，暴露坐骨神經(jīng)。再剪下連有坐骨神經(jīng)的兩三節(jié)椎骨，剪去坐骨神經(jīng)的分支，充分分離坐骨神經(jīng)。1.2.1.6分離腓腸肌將已分離的坐骨神經(jīng)搭在腓腸肌上。用粗剪刀自膝關(guān)節(jié)周圍向上剪除并刮干凈所有大腿肌肉，在距膝關(guān)節(jié)1cm處剪斷股骨。棄去上端股骨及組織。用玻璃分針分離腓腸肌跟腱并穿線打結(jié)。提起結(jié)扎線，在結(jié)織。將標(biāo)本放置于任氏液中。1.2.1.8檢測標(biāo)本活性腸肌收縮，則表明該標(biāo)本有活性。1.2.2連接實(shí)驗(yàn)裝置和儀器參數(shù)設(shè)置激電極。啟動RM6240系統(tǒng)軟件，在系統(tǒng)軟件窗口設(shè)置儀器參數(shù)。RM6240系統(tǒng)：點(diǎn)擊“實(shí)驗(yàn)”菜單，選擇“刺激強(qiáng)度(或頻率)對肌肉收縮的影響”項。儀器參數(shù)：通道模式為張力，時間常數(shù)為直流，濾波頻率頻率”項，顯示刺激參數(shù)。123.1刺激強(qiáng)度對肌肉收縮的影響設(shè)置測量并記錄每一刺激強(qiáng)度所對應(yīng)的肌肉收縮張力，確定閾強(qiáng)度和最1.2.3.1刺激頻率對肌肉收縮的影響設(shè)置參數(shù)：電刺激模式為頻率遞增，增量為實(shí)驗(yàn)名稱：不同強(qiáng)度和頻率的刺激對肌肉收縮的影響實(shí)驗(yàn)人員：張伊娜、謝來娣、陳揚(yáng)揚(yáng)、龔麗芬、龔青青圖1：不同刺激強(qiáng)度下骨骼肌的收縮情況05月31||日0一屮T5注：圖2-4:不同刺激頻率下骨骼肌的收縮情況3實(shí)驗(yàn)討論[2]3.1不同刺激強(qiáng)度對肌肉收縮的影響一條坐骨神經(jīng)干是由許多興奮性不同的神經(jīng)纖維所組成的。當(dāng)神經(jīng)纖維粗細(xì)不一樣的時候，興奮性不同，其閾值也有較大差異，傳導(dǎo)速度就不同。單個恒定時間的電壓刺激坐骨神經(jīng)干，電壓低于閾值的強(qiáng)度刺激，坐骨神經(jīng)干支配腓腸肌的神經(jīng)纖維不發(fā)生興奮，其所干中閾值最低的神經(jīng)開始興奮，其所支配的運(yùn)動單位的肌纖維興奮并發(fā)生收縮，刺激強(qiáng)度逐漸增大，坐骨神經(jīng)干中興奮的神經(jīng)纖維增加，興奮和收縮此時肌肉做最大收縮，再繼續(xù)增強(qiáng)刺激強(qiáng)度，肌肉收縮反應(yīng)不再繼續(xù)增大。大，3.2不同刺激頻率對肌肉收縮的影響電刺激頻率較小時，刺激的間隔大于一的間隔小于一次肌肉收縮的收縮時間，則肌肉產(chǎn)生完全強(qiáng)直收縮。肌肉單收縮時，胞漿內(nèi)ca+濃度升高的持續(xù)時間太短，被激活的收縮蛋白尚未產(chǎn)生最大張力時，胞漿cf濃度即已開始下降，單收縮產(chǎn)生的張力不能達(dá)到胞漿內(nèi)Ca+濃度相應(yīng)的最大張力。強(qiáng)直收縮時，肌細(xì)胞連續(xù)興奮，引起終池中2的CaT連續(xù)釋放，胞漿內(nèi)的Cf濃度持續(xù)升高，使肌肉未完全舒張或未舒張個3.3影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素本實(shí)驗(yàn)中觀察到的閾刺激是神經(jīng)刺激而非肌肉刺生終板電位，引起肌肉興奮，通過興奮-耦聯(lián)機(jī)制使腓腸肌肌肉收縮。如此(1)分離坐骨神經(jīng)時，應(yīng)避免強(qiáng)力牽拉和手提神經(jīng)或夾傷神經(jīng)肌肉，否則易使神經(jīng)受損而出現(xiàn)傳導(dǎo)障礙或肌肉收縮障礙。查電器接地是否良好。(4)神經(jīng)骨胳肌接頭處容易由于連續(xù)刺激使接頭處神經(jīng)遞質(zhì)耗竭而發(fā)生疲勞，是在觀察刺激頻率的影響時，讓肌肉有充分時間恢復(fù)到原始狀態(tài)，回復(fù)靜息電位水平，也讓神經(jīng)遞質(zhì)再形成。(5)盡量保持實(shí)驗(yàn)裝置周圍理化環(huán)境的穩(wěn)定，包括自然因素和人為因素對張力換能器拉線的干擾，保持換能器與標(biāo)本連線的張力不變。4實(shí)驗(yàn)結(jié)論4.1電刺激強(qiáng)度達(dá)到閾強(qiáng)度時，肌肉才開始收縮，且隨著刺激強(qiáng)度的增大，肌肉收縮增強(qiáng)；達(dá)到最大刺激強(qiáng)度后，肌肉收縮不再增強(qiáng)。4.2電刺激頻率較小時，刺激的間隔大于一次肌肉收縮舒張的持續(xù)時間，則肌肉收縮表現(xiàn)為單次收縮；當(dāng)增大刺激頻率，使刺激的間隔大于一次肌肉收縮