PAGEPAGE1草莓未受精子房的離體培養(yǎng)草莓未受精子房的離體培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)技術(shù)是一種應(yīng)用廣泛的生物技術(shù)手段，可用于設(shè)立無性繁殖體系、嫁接、基因轉(zhuǎn)化、抗性篩選等領(lǐng)域中。其中離體培養(yǎng)是目前最為常用的植物組織培養(yǎng)技術(shù)之一。離體培養(yǎng)指將植物體內(nèi)的細(xì)胞組織從生長環(huán)境中分離出來并置于生長適宜的培養(yǎng)基中，使其進(jìn)行無菌培養(yǎng)、生長、分化等生理現(xiàn)象的過程。本次實驗旨在通過草莓未受精子房的離體培養(yǎng)實驗，了解其組織細(xì)胞的特點以及離體培養(yǎng)的原理和步驟，并為后續(xù)基因轉(zhuǎn)化研究做鋪墊。一、實驗材料和儀器1.材料：草莓果實、相對濕度為95%的環(huán)境、96%的乙醇、70%的乙醇、無菌蒸餾水、鹽酸、檸檬酸、殺菌劑等；2.儀器：顯微鏡、培養(yǎng)箱、天平、燒杯、移液管、濾紙等。二、實驗步驟1.草莓果實的表面消毒：用70%的乙醇對草莓果實表面進(jìn)行消毒約1分鐘，再用96%的乙醇對其進(jìn)行消毒約30秒，最后用空氣對其進(jìn)行吹干。2.草莓果實切片：用刀將草莓果實切成約3毫米厚的薄片，并在實驗室消毒好的操作臺上取出草莓器官(子房)。3.草莓子房的劃口：用顯微鏡的支架將草莓子房的一端固定，用手術(shù)剪子在另一端進(jìn)行劃口，將子房分成兩個部分。4.草莓子房未受精細(xì)胞的侵染：將經(jīng)過細(xì)胞處理的菌株(如Agrobacteriumtumefacins)接種到LB(瓊脂)培養(yǎng)基中培養(yǎng)至菌培養(yǎng)基中細(xì)菌濃度為OD600值為0.5，用無菌小刷子將細(xì)菌菌液涂抹到草莓子房表面，保持約5分鐘，然后用無菌蒸餾水將多余的菌液洗凈，再將子房中的草莓胚珠取出。5.草莓子房的離體培養(yǎng)：將處理好的草莓子房放入離體培養(yǎng)基當(dāng)中，將離體培養(yǎng)基調(diào)整至pH值為5.7，加入20g/L蔗糖，27g/L農(nóng)桿菌培養(yǎng)基(N6營養(yǎng)鹽)，并添加H2O2和檸檬酸進(jìn)行調(diào)節(jié)，以達(dá)到草莓子房離體培養(yǎng)所需的最佳生長條件。6.草莓子房的觀察和記錄：將培養(yǎng)好的草莓子房放在顯微鏡下觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)和生長狀態(tài)，記錄草莓子房的大小、形態(tài)，觀察細(xì)胞分化和分裂情況。三、實驗結(jié)果經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)，觀察到在離體培養(yǎng)基內(nèi)生長的草莓子房慢慢增大，并且清晰地看到了細(xì)胞的分化和分裂狀況。同時，我們也觀察到了一些不幸的現(xiàn)象，如草莓子房的組織發(fā)生了腐爛或者黃化的現(xiàn)象，進(jìn)而停止了生長，這些不足之處需要進(jìn)一步的探究和改進(jìn)。四、實驗結(jié)論通過草莓未受精子房的離體培養(yǎng)實驗，我們可以發(fā)現(xiàn)離體培養(yǎng)技術(shù)具有廣泛的應(yīng)用前景，并且可以被運用于植物基因轉(zhuǎn)化、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域中，需要我們進(jìn)一步的深入