苯酚-硫酸法苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。［試劑］6%苯酚：先配置80%苯酚：80g苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20g水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。再配置6%苯酚：取75ul的80%苯酚于燒杯中，加入960ul水（每次測定均需現(xiàn)配），測定的時候就用6%的苯酚來測！濃硫酸［操作］制作標準曲線：準確稱取標準葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鐘以后于490nm測光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為多糖微克數(shù)，縱坐標為光密度值，得標準曲線。樣品含量測定：吸取2.0ml樣品然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻室溫放置30分鐘以后于490nm測光密度。每次測定取雙樣對照。以標準曲線計算多糖含量。可能有以下問題需要注意：

1。苯酚是否重蒸、其溶液濃度、是否現(xiàn)配現(xiàn)用2。 加入硫酸后是否加熱、顯色時間的確定3。 閣下所選波長：這個最為重要，因為已糖及其甲基化衍生物在490nm下有最大吸收峰，而戊糖、糠醛酸及其甲基化衍生物在480nm下有最大吸收峰。如果閣下的多糖樣品不是單一品而是數(shù)種混合（純化也難一達到100%純），則波長一定要掃描過再做4。 加濃硫酸前要搖勻，加之后也要搖勻。苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。理 多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物。再以比色法測定。試劑1.濃硫酸：分析純，95.5%2.80%苯酚：80克苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。6%苯酚：臨用前以80%苯酚配制。（每次測定均需現(xiàn)配）.標準葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia），或分析純葡萄糖。.15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。.5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中長期儲存。

.6mol/L氫氧化鈉：120克分析純氫氧化鈉溶于500ml水。.6mol/L鹽酸操作制作標準曲線：準確稱取標準葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸餾水補至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20分鐘以后于490nm測光密度，以2.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標為多糖微克數(shù)，縱坐標為光密度值，得標準曲線。樣品含量測定：取樣品1克（濕樣）加1ml15%TCA溶液研磨，再加少許5%TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升離心管中，再加少許5%TCA溶液研磨，倒上清液，重復(fù)3次。最后一次將殘渣一起到入離心管。 注意：總的溶液不要超出10毫升。（既不要超出離心管的容量）。離心，轉(zhuǎn)速3000轉(zhuǎn)/分鐘，共三次。第一次15分鐘，取上清液。后兩次各5分鐘取上清液到25毫升錐形比色管中。最后濾液保持18毫升左右。（測肝胰腺樣品時，每次取上消液時應(yīng)過濾?因為其脂肪含量大容易夾帶殘渣）水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L鹽酸之后搖勻，在96°C水浴鍋