中藥分析學(xué)

第七章中藥各類化學(xué)成分的分析目錄123第一節(jié)生物堿類成分的分析4第二節(jié)黃酮類類成分的分析5第三節(jié)蒽醌類成分的分析6第四節(jié)皂苷類成分的分析第五節(jié)揮發(fā)性類成分的分析第六節(jié)其他類型成分的分析7第七節(jié)動(dòng)物藥、礦物藥分析目錄§6

其它類型成分的分析1香豆素類成分分析2木質(zhì)素類成分分析3環(huán)烯醚萜類成分分析4有機(jī)酸類成分分析5鞣質(zhì)類成分分析6色素類成分分析7氨基酸、蛋白、多肽類成分分析8核苷類成分分析9多糖類成分分析香豆素類成分分析一、概述

具有苯駢α-吡喃酮環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物，由順式鄰羥基桂皮酸脫水縮合而成的內(nèi)酯。二、定性鑒別1.化學(xué)反應(yīng)法

用異羥肟酸鐵反應(yīng)、三氯化鐵反應(yīng)、重氮化反應(yīng)、Gibb′s或Emerson反應(yīng)等可對(duì)香豆素類成分進(jìn)行鑒別。2.熒光法

香豆素母核本無(wú)熒光，其C7位羥基衍生物卻呈強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，甚至在可見(jiàn)光下也可辨認(rèn)；但若在C7位的鄰位即C6或C8位引入羥基，則熒光減弱或消失。

3.薄層鑒別法

香豆素類成分大多數(shù)具有熒光，不具熒光或熒光強(qiáng)度較弱的香豆素可用噴顯色劑或噴堿溶液以增強(qiáng)熒光再進(jìn)行檢識(shí)。香豆素類成分分析三、含量測(cè)定1．可見(jiàn)-紫外分光光度法

適合測(cè)定總香豆素的含量和純化后單體香豆素的含量2.薄層掃描法

利用香豆素具有紫外吸收或產(chǎn)生熒光的特性，直接進(jìn)行吸收掃描或熒光掃描測(cè)定3．熒光光度法

4．高效液相色譜法5．氣相色譜法

某些分子量小、具有揮發(fā)性的香豆素類成分木質(zhì)素類成分分析一、概述

由兩分子苯丙素衍生物（即C6—C3單體）聚合而成的天然化合物。組成木脂素的單體有四種：桂皮酸，偶有桂皮醛，桂皮醇、丙烯苯、烯丙苯。二、定性鑒別1．化學(xué)反應(yīng)法：三氯化鐵反應(yīng)，Labat反應(yīng)，Ecgrine反應(yīng)，異羥肟酸鐵反應(yīng)。2．熒光法：如將厚樸藥材斷面置紫外光燈下，顯灰綠色或淡藍(lán)色熒光。3．吸附薄層色譜法木質(zhì)素類成分分析三、含量測(cè)定1．總木脂素的含量測(cè)定：利用木脂素分子結(jié)構(gòu)中取代基的特征反應(yīng)使其生成有色物質(zhì)，采用分光光度法測(cè)定總木脂素含量。如常用的顯色劑變色酸-濃硫酸試劑，適用于結(jié)構(gòu)中含有亞甲二氧基的木脂素類成分。2.單體木脂素類成分的含量測(cè)定（1）高效液相色譜法是目前測(cè)定單體木脂素含量的主要方法。（2）薄層掃描法一般采用吸附色譜，以硅膠為吸附劑，低極性有機(jī)溶劑為展開(kāi)劑。木質(zhì)素類成分分析例：定量分析－高效液相色譜法測(cè)定五味子中五味子醇甲的含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（65:35）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)250nm。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品溶液的制備取五味子醇甲對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，即得。供試品溶液的制備

取五味子粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.25g，精密稱定，置20ml容量瓶中，加甲醇約18ml，超聲處理（功率250w，頻率20kHz）20分鐘，取出，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品含五味子醇甲（C24H32O7）不得少于0.40%。環(huán)烯醚萜類成分分析一、概述

環(huán)烯醚萜是一類特殊的單萜，其母核都為環(huán)狀，具有烯鍵和醚鍵，常與糖結(jié)合成苷，根據(jù)環(huán)戊烷環(huán)開(kāi)裂與否，分為環(huán)烯醚萜（苷）及裂環(huán)環(huán)烯醚萜（苷）。環(huán)烯醚萜類化合物分布較廣，在玄參科、茜草科、唇形科及龍膽科中較為常見(jiàn)，多與糖結(jié)合形成苷存在。環(huán)烯醚萜類化合物具有抗菌、抗病保肝利膽、解痙鎮(zhèn)痛、降糖降脂等生物活性。環(huán)烯醚萜類成分分析二、定性鑒別1．化學(xué)反應(yīng)法

環(huán)烯醚萜苷元具有半縮醛結(jié)構(gòu)，化學(xué)性質(zhì)較活潑，對(duì)酸堿試劑敏感，與酸、堿共熱都能發(fā)生分解、聚合、縮合、氧化等反應(yīng)，形成不同顏色的產(chǎn)物，可用于定性鑒別。（1）與氨基酸的反應(yīng)：游離的環(huán)烯醚萜苷元與氨基酸類物質(zhì)加熱，即顯紅色至藍(lán)色，最后生成藍(lán)色沉淀。（2）與銅鹽的反應(yīng)：環(huán)烯醚萜苷的冰醋酸溶液中加少量銅鹽，加熱后能產(chǎn)生藍(lán)色。環(huán)烯醚萜類成分分析3）與Shear試劑（鹽酸1體積與苯胺15體積混合液）的反應(yīng)：能與吡喃衍生物產(chǎn)生特有的顏色，如車葉草苷與Shear試劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色→棕色→深綠色的變化。（4）Weiggering法：新鮮藥材的1%鹽酸溶液浸提液與Trim-Hill試劑（冰醋酸10ml、0.2%硫酸銅水溶液1ml、濃硫酸0.5ml混合溶液）加熱后產(chǎn)生顏色。2．色譜法

主要采用以硅膠為吸附劑的薄層鑒別法。展開(kāi)劑：常采用正己烷、石油醚。顯色劑：如10%硫酸乙醇溶液、0.5%香草醛—硫酸乙醇溶液等。環(huán)烯醚萜類成分分析三、含量測(cè)定1．分光光度法可以采用紫外直接測(cè)定或顯色后比色測(cè)定的方法測(cè)定中藥中的環(huán)烯醚萜類成分，如地黃和筋骨草中總環(huán)烯醚萜苷的含量測(cè)定均可采用酸水解后，經(jīng)二硝基苯肼乙醇試液-氫氧化鈉醇溶液顯色后測(cè)定。2．高效液相色譜法

可選用紫外檢測(cè)器或蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（僅在200nm附近有末端吸收的）進(jìn)行檢測(cè)。3.薄層色譜法薄層掃描法

測(cè)定環(huán)烯醚萜苷類成分時(shí)，可用硅膠G薄層，用顯色劑顯色后測(cè)定或用硅膠GF254薄層，檢查熒光淬滅斑點(diǎn)。有機(jī)酸類成分分析一、概述

按其結(jié)構(gòu)不同可分為三種：

脂肪族有機(jī)酸：如酒石酸、草酸等；

芳香族有機(jī)酸：桂皮酸、水楊酸等；

萜類有機(jī)酸：熊果酸、齊墩果酸等；

除少數(shù)有機(jī)酸以游離狀態(tài)存在外，一般都與鉀、鈉、鈣等結(jié)合成鹽，有的與生物堿結(jié)合成鹽。有機(jī)酸類成分分析二、定性鑒別------采用薄層色譜法吸附劑：常用硅膠、聚酰胺等

。展開(kāi)劑：選擇極性較大的，在展開(kāi)劑中加入一定比例的甲酸或醋酸以抑制因有機(jī)酸類成分在展開(kāi)過(guò)程中解離所產(chǎn)生的斑點(diǎn)拖尾現(xiàn)象。顯色劑：溴甲酚綠、溴甲酚紫、溴酚藍(lán)等pH指示劑，也可用磷鉬酸、硫酸等試劑，阿魏酸、綠原酸等具有熒光的有機(jī)酸亦可直接在紫外燈下觀察。有機(jī)酸類成分分析

三、含量測(cè)定1.總有機(jī)酸的含量（1）酸堿滴定法

由于中藥中有機(jī)酸類成分酸性一般較弱，在水溶液中滴定突躍往往不明顯，故常采用非水溶液滴定法，并利用電位法指示終點(diǎn)以消除因中藥提取液的顏色所造成對(duì)滴定終點(diǎn)判斷的干擾，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。（2）分光光度法

利用有機(jī)酸的顯色反應(yīng)，采用分光光度法測(cè)定總有機(jī)酸含量。有機(jī)酸類成分分析例7-39半夏中總有機(jī)酸的含量測(cè)定

取半夏粉末（過(guò)四號(hào)篩）約5g，精密稱定，置錐形瓶中，加乙醇50ml，加熱回流1小時(shí)，同上操作，再重復(fù)提取2次，放冷，濾過(guò)，合并濾液，蒸干，殘?jiān)芗尤霘溲趸c滴定液（0.1mol/L）10ml，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）30分鐘，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加新沸過(guò)的冷水至刻度，搖勻，精密量取25ml，照電位滴定法測(cè)定，用鹽酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定的結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于5.904mg的琥珀酸。本品按干燥品計(jì)算，含總酸以琥珀酸(C4H604)計(jì)，不得少于0.25%。有機(jī)酸類成分分析2.單體有機(jī)酸類成分的含量測(cè)定（1）高效液相色譜法

根據(jù)化合物的性質(zhì)，選擇相應(yīng)的檢測(cè)器等檢測(cè)。如桂皮酸、綠原酸、阿魏酸等的測(cè)定采用紫外檢測(cè)器檢測(cè)，齊墩果酸、熊果酸的測(cè)定可以選擇蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。（2）氣相色譜法具有揮發(fā)性的有機(jī)酸類化合物如肉桂中桂皮酸的含量測(cè)定。（3）薄層掃描法

脂肪酸等一些不具有紫外吸收的有機(jī)酸類成分的薄層色譜法定量可用適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色后掃描測(cè)定，如丁二酸、蘋(píng)果酸、丙二酸可用溴酚藍(lán)、溴甲酚綠等pH指示劑為顯色劑。阿魏酸、綠原酸等芳香酸多具有熒光，可用薄層掃描熒光法直接測(cè)定含量。鞣質(zhì)類成分分析

一、概述

鞣質(zhì)又稱單寧或鞣酸，是植物界中一類結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的多元酚類化合物，主要包括沒(méi)食子酸（或其聚合物）的葡萄糖（及其他多元醇）酯、黃烷醇及其衍生物的聚合物以及兩者的混合物等。鞣質(zhì)極性較強(qiáng)，溶于水、甲醇、乙醇、丙酮，可溶于乙酸乙酯、丙酮和乙醇的混合液，難溶或不溶于乙醚、苯、三氯甲烷、石油醚及二硫化碳等。鞣質(zhì)類成分分析二、定性鑒別1.化學(xué)反應(yīng)法

利用鞣質(zhì)能與生物堿、重金屬鹽、蛋白質(zhì)反應(yīng)生成沉淀或與FeCl3的作用等對(duì)鞣質(zhì)進(jìn)行定性鑒別，其中，明膠沉淀反應(yīng)和FeCl3顯色反應(yīng)是最常用的鞣質(zhì)鑒別反應(yīng)。2.薄層色譜法

展開(kāi)系統(tǒng):苯-甲酸乙酯-甲酸或不同比例三氯甲烷-丙酮-水-甲酸的混合溶劑。顯色劑：展開(kāi)后，可分別依次噴三氯化鐵、茴香醛-硫酸或三氯化鐵-鐵氰化鉀（1∶1）、亞硝酸鈉醋酸溶液顯色。以沒(méi)食子酸對(duì)照品或?qū)φ账幉母鶕?jù)斑點(diǎn)顏色可判斷鞣質(zhì)類化合物的類型。鞣質(zhì)類成分分析

三、含量測(cè)定1.總鞣質(zhì)的含量測(cè)定利用堿性溶液里鞣質(zhì)中的酚類化合物將鎢鉬酸還原（使W6+變?yōu)閃5+）生成藍(lán)色化合物（在760nm處有最大吸收），其顏色深淺與酚含量正相關(guān)，采用分光光度法進(jìn)行測(cè)定。2.單體鞣質(zhì)的含量測(cè)定

高效液相色譜法是目前準(zhǔn)確有效的鞣質(zhì)含量測(cè)定方法。鞣質(zhì)類成分分析例、地榆中鞣質(zhì)的含量測(cè)定1、總鞣質(zhì)的含量測(cè)定

取本品粉末（過(guò)四號(hào)篩）約0.4g，精密稱定，照鞣質(zhì)含量測(cè)定法(通則2202)測(cè)定，在“不被吸附的多酚”測(cè)定中，同時(shí)作空白試驗(yàn)校正，計(jì)算，即得。本品按干燥品計(jì)算，不得少于8.0%。2、單體鞣質(zhì)的含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.05%磷酸溶液(5：95)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm。理論板數(shù)按沒(méi)食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。鞣質(zhì)類成分分析對(duì)照品溶液的制備

取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含30μg的溶液，即得。供試品溶液的制備

取本品粉末（過(guò)四號(hào)篩）約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加10%鹽酸溶液l0ml，加熱回流3小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液置l00ml量瓶中，用水適量分?jǐn)?shù)次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液號(hào)供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品按干燥品計(jì)算，含沒(méi)食子酸(C7H6O5)不得少于1.0%。色素類成分分析

色素是一類能夠在可見(jiàn)光區(qū)（400～760nm）吸收光，從而呈現(xiàn)出一定顏色的物質(zhì)。植物色素按結(jié)構(gòu)分類，主要包括花青素類、類胡蘿卜素類和醌酮類三大類。花青素類：天竺葵素、矢車菊素、飛燕草素、芍藥色素、3’-甲花翠素和錦葵色素。類胡蘿卜素類：β--胡蘿卜素、α-胡蘿卜素、番茄紅素、葉黃素等。醌酮類：紫草中的羥基萘醌總色素。番茄紅素氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)類成分分析

一、概述氨基酸是羧酸分子中烴基上的氫被氨基取代的衍生物。如使君子中的使君子氨酸，三七中的三七素。多肽是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物，由兩個(gè)氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽，同理推理還有三肽、四肽、五肽等。如酸棗仁中環(huán)肽類化合物；茜草的茜草環(huán)肽；人工蟲(chóng)草菌絲體中的環(huán)肽。蛋白質(zhì)是由α-氨基酸按一定順序結(jié)合形成的一條多肽鍵，再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合而成的高分子化合物。如阿膠的化學(xué)成分主要為骨膠原。氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)類成分分析

二、定性鑒別1.化學(xué)反應(yīng)法：氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)的顯色反應(yīng)有茚三酮反應(yīng)、雙縮脲反應(yīng)、酚試劑反應(yīng)、米倫反應(yīng)等。2.薄層色譜法

該法是氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)類成分常用的定性分析方法。較常用的吸附劑是硅膠G或硅膠H，展開(kāi)劑用三氯甲烷-甲醇（或丙酮）（9:1），顯色劑用2%的茚三酮溶液。除薄層色譜外，聚丙烯酰胺凝膠電泳也是鑒別蛋白質(zhì)的良好手段。氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)類成分分析

三、含量測(cè)定藥材中總蛋白質(zhì)的含量可采用凱式定氮法、比色法（如考馬斯亮藍(lán)法、雙縮脲法）等，游離氨基酸的含量測(cè)定可采用高效液相色譜法，或者采用氨基酸自動(dòng)分析儀進(jìn)行定量分析。核苷類成分分析

一、概述核苷是一類由堿基或五碳糖（核糖或脫氧核糖）連接而成的化合物。包括核糖核苷和脫氧核糖核苷兩類。靈芝、枸杞子中含有腺嘌呤，可刺激白細(xì)胞增生，五味子、覆盆子含有腺苷，韭菜中含化合物Ⅲ(胸腺嘧啶核苷和化合物Ⅳ(腺嘌呤核苷)。

核苷類成分分析二、定性鑒別化學(xué)反應(yīng)法

核苷類成分常用的顯色反應(yīng)有：①核糖核苷與鹽酸共熱，水解生成的戊糖轉(zhuǎn)變成糖醛，在三氯化鐵催化下，與苔黑酚

（即5-甲基-1,3-苯二酚）反應(yīng)生成綠色物質(zhì)，產(chǎn)物在670nm處有最大吸收。②脫氧核苷在酸性溶液中水解得到脫氧核糖并轉(zhuǎn)化為ω-羥基-γ-酮戊酸，與二苯胺共熱，生成藍(lán)色化合物，在595nm處有最大吸收。2.薄層色譜法吸附劑常用硅膠G，展開(kāi)劑用石油醚-乙酸乙酯-甲酸

（7:3:0.1），晾干后置紫外燈光365nm下檢識(shí)。核苷類成分分析

三、含量測(cè)定1、總核苷的測(cè)定分光光度法

對(duì)于有紫外吸收的環(huán)烯醚萜類成分，可直接測(cè)定其吸光度。對(duì)于無(wú)紫外吸收的，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑，進(jìn)行比色測(cè)定。熒光光度法

對(duì)于-CD包合后能產(chǎn)生熒光的有些環(huán)烯醚萜苷類成分，可用熒光光度法測(cè)定含量。高效液相色譜法核苷的堿基雜環(huán)上的共軛雙鍵在紫外光區(qū)有強(qiáng)吸收，因此HPLC-紫外檢測(cè)器是核苷定量分析常用的方法。多糖類成分分析一、概述

多糖是由10個(gè)以上的單糖分子通過(guò)苷鍵聚合而成的大分子化合物，一般由幾百個(gè)甚至幾萬(wàn)個(gè)單糖分子組成，組成多糖的單糖主要有D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸和D-葡萄糖醛酸等。多糖類成分分析二、定性鑒