實驗一培養(yǎng)基配制第一頁，共十頁，編輯于2023年，星期二實驗一培養(yǎng)基的配制及其滅菌實驗二外植體滅菌及其初代培養(yǎng)物的建立第二頁，共十頁，編輯于2023年，星期二實驗一培養(yǎng)基配制及其滅菌一、實驗?zāi)康牧私馀囵B(yǎng)基制備方法及滅菌技術(shù)。二、實驗原理培養(yǎng)基是植物離體培養(yǎng)組織和細胞賴以生存的營養(yǎng)基質(zhì)，是為離體培養(yǎng)材料提供近似生物體內(nèi)生存的營養(yǎng)環(huán)境。一般常用MS培養(yǎng)基，無機鹽濃度較高，能滿足組織快速生長的需求。為減少稱量的工作量和誤差，一般先配制培養(yǎng)基的各種母液，然后按需要量加入。三、實驗材料1、實驗藥品2、實驗用具四、實驗步驟1、MS培養(yǎng)基母液的配制（1）大量元素母液（母液1）N、P、K、Ca、S、Mg（2）微量元素母液（母液2）Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni（3）鉄鹽母液（母液3）

Fe（4）有機物質(zhì)母液（母液4）NAA、6-BA、GA3第三頁，共十頁，編輯于2023年，星期二MS培養(yǎng)基配制表母液化合物含量（終濃度）mg/L母液稱量（mg）體積（ml）吸取量（ml/L）1號NH4NO3KNO3KH2PO4MgSO4.7H2OCaCl2.2H2O1650190017037044082509500850185022005001002號ZnSO4.7H2OMnSO4.4H2OH3BO3NaMoO4.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2OKI8.622.36.20.250.0250.0250.838602230620252.52.5831000103號Na2－EDTAFeSO4.7H2O37.2527.85372.5278.5100104號鹽酸硫胺素VB1鹽酸吡哆醇VB6甘氨酸煙酸（VB3）肌醇0.40.520.51004520510001005第四頁，共十頁，編輯于2023年，星期二2、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的配制母液含量（終濃度）mg/L母液稱量（mg）體積（ml）吸取量（ml/L）NAA2210001006-BA20210010GA310550075配制方法：NAA：稱2㎎NAA，加少量95%酒精溶解，再加水定容至1000ml。6-BA：稱2㎎的6-BA，加少量1mol/L的NaOH溶解，再加水定容至100ml。GA3：稱5㎎，加水定容至500ml。第五頁，共十頁，編輯于2023年，星期二3、MS固體培養(yǎng)基的配制、分裝和滅菌（1）取一只1L燒杯，放入約500mL蒸餾水，依次加入母液1（100mL）、母液2（10mL）、母液3（10mL）和母液4（5mL），并不斷攪拌。（本實驗2L，先配1L，再配1L）（2）加入植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)（NAA:100ml,6-BA:10ml,GA3:75ml）和30g蔗糖，待蔗糖溶解后加蒸餾水定容至1L。（3）加入瓊脂（0.6g/L），加熱溶解。（5）調(diào)整pH6.5。（6）將培養(yǎng)基分裝到錐形瓶中，每瓶約300mL.（7）滅菌。放入高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃、0.105Pa滅菌15min。（8）倒平板。所倒培養(yǎng)基約占培養(yǎng)皿的1/3。第六頁，共十頁，編輯于2023年，星期二五、思考題1、培養(yǎng)基的各種成分在植物體內(nèi)的生理作用有哪些？2、使用高壓滅菌鍋在培養(yǎng)基滅菌時應(yīng)注意哪些問題？第七頁，共十頁，編輯于2023年，星期二實驗二外植體滅菌及其初代培養(yǎng)物的建立一、實驗?zāi)康耐ㄟ^外植體滅菌及接種等無菌操作訓練，掌握植物組織培養(yǎng)材料滅菌的基本方法和無菌操作技術(shù)，建立初代無菌培養(yǎng)體系。二、實驗原理選取的外植體都不同程度地帶有各種微生物，根據(jù)實驗材料的特點要進行相應(yīng)的滅菌處理。然后接種到培養(yǎng)基上放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)，是之生長，就可以建立起初代培養(yǎng)物的無菌體系。三、實驗材料和用具材料：5種草的綠色葉片。第八頁，共十頁，編輯于2023年，星期二四、實驗步驟1、用75%的酒精擦拭干凈，將剪刀和鑷子浸入75%的酒精中。2、將外植體（綠色草葉）置燒杯中，用水沖洗干凈。放入75%的酒精中滅菌30S（不斷攪拌），倒掉酒精，用無菌水沖洗3次后，再放入2%的次氯酸鈉溶液中滅菌15min。3、將次氯酸鈉溶液倒掉，用無菌水沖洗材料3-5次。用鑷子取出無菌濾紙，取出葉片放入無菌濾紙上，用鑷子和剪刀對葉片進行分割，切成0.5㎝x0.5㎝左右。4、打開培養(yǎng)皿蓋子，開口靠近酒精燈2㎝左右，將切碎的葉片接種到培養(yǎng)基中（每個培養(yǎng)基接種10片），蓋上蓋子。標記植物材料名稱、接種日期和接種人。5、接種后的植物材料放入具有控制溫