C18?譜柱的選?、保養(yǎng)與維修據(jù)統(tǒng)計(jì)，近80%的有機(jī)物及?機(jī)物可以??效液相?譜法進(jìn)?分離，其中反相?譜中的C18?譜柱是?效液相?譜中最為常?的?類?譜柱。下?就C18?譜柱的選?、保養(yǎng)與維修作?介紹。選?C18的選?主要考慮2個(gè)問題，即柱填料和柱規(guī)格對(duì)?譜柱的影響。1.1C18柱的填料對(duì)?譜柱的影響柱填料的物理性能對(duì)填料?譜?為有重要影響。填料主要的物理性能包括如下：顆粒度、孔徑、孔體積、鍵合相化學(xué)、含碳量及烷基化處理。(1)顆粒度是指柱填料的顆粒直徑的??。實(shí)際上?譜柱上所標(biāo)的粒徑是?個(gè)平均值。如粒徑“5μm”并不是柱中填料所有的顆粒直徑都是5μm，實(shí)際上有?個(gè)顆粒分布度。這種分布度對(duì)柱反壓及柱效有重要作?。?般來說，平均顆粒度越?，顆粒分布度越?，?譜柱效越?，反壓亦越?。?前C18柱填料粒徑在4～10μm之間。(2)孔徑是指填料顆粒間的孔間隙。?般所說的孔徑是指填料的平均孔徑。球形填料裝柱后平均孔徑分布?較窄，柱床結(jié)構(gòu)均勻，柱效?，重現(xiàn)性好；?定形填料平均孔徑分布較寬，柱床結(jié)構(gòu)不均勻，流動(dòng)相線性速度不均勻，譜帶擴(kuò)寬。平均孔徑的??對(duì)分離?分?化合物有較?的影響，在分離含有較?分?的樣品時(shí)可能會(huì)有分?排阻效應(yīng)，或產(chǎn)?吸附效應(yīng)從?影響定量的回收率及準(zhǔn)確度。因?在?反相?譜分離諸如蛋?或多肽樣品時(shí)應(yīng)考慮選??孔徑(如30nm)的反相柱填料。孔體積作為硅膠多孔性的參數(shù)，在分離分析較?分?化合物時(shí)可作參考，選?較?孔體積的反相柱填料。(3)化學(xué)鍵合相填料在?效液相?譜法中占有極重要的地位。它可以鍵合極性較?的有機(jī)基團(tuán)，采?極性較?的溶劑作流動(dòng)相。亦可鍵合極性較?的有機(jī)基團(tuán)，選?極性較?的溶劑作流動(dòng)相。C18?譜柱是以硅烷化鍵合型(Si-O-Si-C)存在的，這類鍵合反應(yīng)?前應(yīng)?最為普遍。如以??烷基三氯硅烷與全多孔型硅膠M-Porasil-C18反應(yīng)?成烷基化學(xué)鍵合相，商品名為M-Bondapak-C18(4)碳含量即填料中的含碳量。傳統(tǒng)的測(cè)量技術(shù)是將填料加熱到碳?xì)滏I斷裂，然后通過測(cè)定損失的重量或形成的?氧化碳來計(jì)算碳含量?？梢酝ㄟ^增加碳鍵的長(zhǎng)度或增加鍵合密度來增加碳含量。碳含量增加，柱?的保留值增加。鍵合相的?譜?為與鍵合密度有關(guān)，也與硅膠的密度及填料的表?積有關(guān)，填料的密度越?，填柱所需的硅膠量越多，柱?的含碳量也越?。如果?2種不同密度相同碳含量的填料填充柱?，其保留?為將明顯不同。因此，單獨(dú)以碳含量來預(yù)測(cè)?譜?為是不夠的。(5)C18硅烷化試劑是?個(gè)?于2nm?分?，因此會(huì)與已鍵合在相鄰的硅醇基上的C18硅烷化試劑產(chǎn)?嚴(yán)重的?體位阻。其結(jié)果導(dǎo)致在硅膠表?有?量的殘留硅醇基沒有與硅烷化試劑反應(yīng)，這些極性的硅醇基在?定?譜條件下會(huì)與堿性化合物相互作?引起峰形拖尾，從?可影響定量分析結(jié)果。這些問題在?定程度上可以通過烷基化處理加以克服。烷基化處理是在鍵合相上完成的獨(dú)?反應(yīng)，以減少在硅膠表?的硅醇基。烷基化處理采??分?(如三甲硅烷)的試劑，其空間位阻遠(yuǎn)?于C18基團(tuán)。?多數(shù)固定相僅有30%可覆蓋的鍵合位置。據(jù)報(bào)道，通過某些極活躍的化學(xué)試劑及特殊的反應(yīng)條件，最?的覆蓋量可達(dá)50%。很好地了解硅膠鍵合相的物理特性將有助于在?效液相?譜的反應(yīng)中選擇合適的?譜柱。表?上看C18柱雖然化學(xué)官能團(tuán)相同，?實(shí)際上不同品牌的C18柱性能可能有很?差別，從?產(chǎn)?不同的分離結(jié)果。1.2C18柱的規(guī)格對(duì)?譜柱的影響柱填料的選擇關(guān)系到?譜分離的可能性，?柱規(guī)格的選擇直接影響分析速度、分離能?、檢測(cè)能?及每次分析的溶劑消耗等。柱規(guī)格包括兩??：柱內(nèi)徑和柱長(zhǎng)度。柱內(nèi)徑，分析型?般為2～6mm,制備型20mm，?者可達(dá)80mm；柱長(zhǎng)度，分析型5～30cm，制備型15～50cm。?般來說，柱內(nèi)徑不影響分離度與分析時(shí)間的關(guān)系。今天，柱技術(shù)已發(fā)展到不同柱內(nèi)徑的柱?能夠具有相同的性能。不同內(nèi)徑的柱??各具特點(diǎn)，對(duì)相同的分析時(shí)間和分離度來說，內(nèi)徑?的柱??內(nèi)徑?的柱?多消耗溶劑。另???，較?內(nèi)徑的柱?對(duì)相同的檢測(cè)信號(hào)來說所需樣品量亦較少。因此，在樣品量有限時(shí)，可使??內(nèi)徑柱。柱長(zhǎng)度增加雖可改善分離效果，但阻?也隨之增加，必須提???壓?。柱壓是同時(shí)影響增加分離度和減少分析時(shí)間的主要障礙。分離度、分析時(shí)間及柱壓三者相互制約，選擇好其中兩者，則第3個(gè)因素也就選好了。長(zhǎng)柱可以給出?分離度，短柱可提供快速分離，我們可以根據(jù)樣品情況去選?合適的?譜柱1.3C18柱選?的基本原則(1)選?經(jīng)過烷基化處理封?的填料可防?堿性化合物的拖尾現(xiàn)象。

(2)選?含碳量?的柱?，增加保留值。(3)選?較短的柱?(如15cm，7.5cm)。(4)選??顆粒度的填料。(5)對(duì)分?量?的組分選??孔徑填料的柱?。?常使?和維護(hù)在?常分離分析?作中，?譜柱使?是否得當(dāng)，直接影響?譜柱的壽命。下?介紹C18柱在?常使?過程中應(yīng)注意的事項(xiàng)。2.1柱?在裝卸、更換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防?較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，以免柱床產(chǎn)?空隙。2.2如果儀器?來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每?類常規(guī)分析配置1根專?柱，這樣有助于延長(zhǎng)柱?的壽命。2.3如使?柱溫控制裝置時(shí)，應(yīng)注意在?流動(dòng)相后才能升溫。2.4流動(dòng)相使?前需進(jìn)?脫?處理，以免降低柱效和影響檢測(cè)等。樣品溶液需經(jīng)適當(dāng)?shù)那疤幚砑斑^濾，以減少柱污染和堵塞。2.5在更換流動(dòng)相種類時(shí)，應(yīng)注意溶劑的互溶性，防?發(fā)?鹽析現(xiàn)象。2.6柱?的實(shí)際操作壓?應(yīng)低于填裝時(shí)的最?壓?，最好在最?壓??半以下。?般不超過20593.965～29419.95kPa。在低壓?(≤14709.975kPa)的范圍使?，可使柱保持長(zhǎng)時(shí)期的?柱效。2.7C18?譜柱屬?極性鍵合相?譜柱，流動(dòng)相的pH值應(yīng)嚴(yán)格2～7之間，以免損壞柱?。2.8在完成分離分析?作之后，不應(yīng)?即停機(jī)，需及時(shí)對(duì)?譜分析系統(tǒng)進(jìn)?沖洗，?般0.5h以上，以除去?譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。2.9如果流動(dòng)相中有鹽類，?先??充分清洗。如果是胺類(如三甲胺類或四丁基胺類)添加到流動(dòng)相中，要?50%甲醇和0.05%磷酸溶液混合溶劑沖洗，不要只??沖洗。2.10C18?般?100%甲醇作為保存溶劑，以防柱??裂?損壞。嚴(yán)禁?或緩沖溶液長(zhǎng)時(shí)間在?譜流路中保留。2.11選?合適的C18保護(hù)柱，以保護(hù)分析柱免受雜質(zhì)顆粒及不可逆吸附的?擾物的影響。保護(hù)柱內(nèi)裝填料顆粒度應(yīng)與分析柱填料的顆粒度盡量?致。2.12柱的保存期不宜太長(zhǎng)。短期不?的C18柱，?甲醇沖洗30～60min，然后將柱兩端密封。較長(zhǎng)期不?的柱?，?是采取定期沖洗，再密封的?法；?是在沖洗后，柱兩端各裝1只有?定容量的灌滿甲醇的容器(只裝?端也可)，以補(bǔ)充在較長(zhǎng)存放期間柱內(nèi)溶劑的蒸發(fā)。維修?譜柱在?常使?過程中，盡管保護(hù)嚴(yán)格，樣品和流動(dòng)相盡管經(jīng)過前處理，但經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的使?，仍然難以完全避免柱?受到污染，固定相流失、板結(jié)、柱床塌陷以及柱效下降等。有些可以通過維修，使部分柱效恢復(fù)。3.1柱污染再?技術(shù)?譜柱污染后，可以?合適的溶劑沖洗，使柱效再?。C18柱常規(guī)的再?洗滌?法是：分別?甲醇、三氯甲烷、甲醇/?各60mL依次通過?譜柱，再?100%甲醇60mL平衡?譜柱后封存，柱效將恢復(fù)正常。必要時(shí)，根據(jù)柱污染性質(zhì)(如有機(jī)污染、鹽類污染等)，采?0.05mol/LH2SO4、0.5mol/LH3PO4或0.1mol/LEDTA鈉鹽沖洗，然后再??沖洗，最后

機(jī)污染、鹽類污染等)，采?0.05mol/LH2SO4、0.5mol/LH3PO4或0.1mol/LEDTA鈉鹽沖洗，然后再??沖洗，最后?100%甲醇平衡?譜柱后封存。對(duì)于嚴(yán)重污染的C18柱，可采??、甲醇、氯仿、?烷依次沖洗后，按順序倒過來再?zèng)_洗1次，每次所?溶劑60mL，不接檢測(cè)器，最后?100%甲醇平衡?譜柱封存。3.2柱污染的修復(fù)在柱污染再??效或已知柱污染嚴(yán)重時(shí)，可以采?柱修補(bǔ)的?法解決，但柱污染深度不宜超過5mm。?法是將特制?鏟將污染部分挖去，再?與柱填料相同的固定相與流動(dòng)相混合制成漿狀，然后將漿狀固定相仔細(xì)補(bǔ)?被挖去的部分(盡量使后