實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)細(xì)胞融合聚乙二醇法第一頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私饧?xì)胞融合的原理，初步掌握用PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理聚乙二醇（PEG）結(jié)構(gòu)為：

CH2(OH)-(CH20CH2)n-CH2OH；相對(duì)分子質(zhì)量在2000-6000均可用作細(xì)胞融合劑。

第二頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二普遍認(rèn)為聚乙二醇分子能改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，由于兩細(xì)胞接口處雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用，從而使細(xì)胞發(fā)生融合。細(xì)胞融合率是指在顯微鏡的一個(gè)視野內(nèi)，已發(fā)生融合的細(xì)胞其細(xì)胞核總數(shù)與該視野內(nèi)所有細(xì)胞(包括已融合的細(xì)胞)的細(xì)胞核總數(shù)之比，通常以百分比表示。第三頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二三、實(shí)驗(yàn)材料與用品材料：雞血紅細(xì)胞試劑：（1）Alsver液：（2）0.85％生理鹽水：（3）GKN液：（4）Ringer溶液：

（5）Hanks液：（6）50％PEG混合液（7）0.2%次甲基藍(lán)儀器：離心機(jī)，水浴箱，電爐，量筒，離心管，注射器，試管，移液管，燒杯，吸管，載玻片，蓋玻片，顯微鏡第四頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二四、實(shí)驗(yàn)步驟

1.雞血紅細(xì)胞懸液的制備：用注射器吸入1mLAlsver液后從雞翼下靜脈取雞血2mL，注入刻度離心管內(nèi)，按照3：1(V/V)加入6mLAlsver液混勻，放入4℃冰箱內(nèi)可保存3~4天。2.取細(xì)胞懸液1mL，移人7mL離心管，加入4mL0.85％生理鹽水混勻；2000r/min離心5min。

第五頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二3.棄上清液（用吸管吸去），加0.85％生理鹽水至5mL，混勻后2000r/min離心5min。4.重復(fù)上述條件，再離心洗滌1次。

5.收集最后1次離心沉淀的血細(xì)胞，加入適量的GKN液溶液，按壓積紅細(xì)胞體積配成10％的紅細(xì)胞懸液。50％PEG混合液配置：稱取少許PEG放人刻度離心管內(nèi)，在沸水浴中加熱，使其溶化，待冷卻至50℃時(shí)，加入預(yù)熱至50℃的等體積的GKN液，混勻。注意使用前配制。第六頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二6.取懸液1mL到7ml離心管中，加入0.5～0.8mL預(yù)熱的50％PEG（慢慢沿著離心管壁逐滴加入，邊加邊輕搖離心管,使其混勻），38℃水浴中溫浴30min。

7.緩慢加入Hanks液5ml以終止PEG的作用，輕輕吹打混勻，38℃水浴中靜止5min。8.1000r/min離心5min，去上清，指彈使細(xì)胞團(tuán)分散

9.取細(xì)胞懸液1滴滴于載玻片上，蓋上蓋玻片直接鏡檢；或加入臺(tái)盼藍(lán)溶液1滴，染色3分鐘蓋上蓋玻片，顯微鏡下觀察細(xì)胞融合現(xiàn)象。10.進(jìn)行多個(gè)視野的測(cè)定，統(tǒng)計(jì)細(xì)胞平均融合率。

第七頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二五、結(jié)果與分析1、繪制觀察到的融合細(xì)胞圖，計(jì)算觀察到的細(xì)胞融合率；

2、簡(jiǎn)述聚乙二醇法誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理及影響融合的關(guān)鍵因素。第八頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二第九頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二六、注意