血清總蛋白液體(TP)雙縮脲法測定方法實(shí)驗(yàn)原理雙縮脲比色終點(diǎn)法。在堿性條件下，蛋白與銅離子生成紫藍(lán)色復(fù)合物。顯色強(qiáng)度和蛋白濃度成正比。OH—蛋白質(zhì)+Cu2+-------------﹥紫紅色復(fù)合物2.標(biāo)本采集2.1病人準(zhǔn)備：無特殊要求。最好用禁食的標(biāo)本以減少乳糜血的干擾。2.2類型：血清或血漿。3.標(biāo)本存放20～25℃保存可穩(wěn)定6天；4～8℃保存可穩(wěn)定4周；-20℃保存至少可穩(wěn)定1年。4.標(biāo)本運(yùn)輸室溫條件下運(yùn)輸5.標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染的不能做測定。6.實(shí)驗(yàn)材料:6.1上海申能總蛋白測定試劑盒貨號(hào)劑1＋試劑26.1.1試劑組成試劑1（R1）：6×64ml氫氧化鈉80mmol/L酒石酸鉀鈉12.8mmol/L試劑2（R2）：6×16ml氫氧化鈉100mmol/L酒石酸鉀鈉16mmol/L碘化鉀15mmol/L硫酸銅6mmol/L6.1.2試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑避光保存于2～25℃，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑有效期為24個(gè)月。試劑不可冰凍。開蓋后應(yīng)避免污染。6.1.4變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有濁度時(shí)，表明有細(xì)菌污染，不能繼續(xù)使用。6.1.5注意事項(xiàng)：試劑中含有氫氧化鈉，不可入口！如與皮膚及粘膜接觸，請立即用大量水沖洗。使用試劑時(shí)應(yīng)采取必要的防護(hù)。6.2校準(zhǔn)品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校準(zhǔn)品對(duì)自動(dòng)分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，具體參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。6.3質(zhì)控品：具體參見生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。7.儀器：奧林巴斯AU1000生化分析儀8.操作步驟8.1項(xiàng)目基本參數(shù)：參見生化檢驗(yàn)奧林巴斯AU1000生化分析儀項(xiàng)目測定參數(shù).SOP文件8.2儀器操作步驟：參見生化檢驗(yàn)奧林巴斯AU1000生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件9.檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析10.質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11.計(jì)算方法：以TruCalU復(fù)合校準(zhǔn)品總蛋白校準(zhǔn)值或標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)值校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠的檢測結(jié)果，以g/L報(bào)告。12.參考值范圍[g/L]成人：66～88兒童/青少年：男女1～30天42～6241～631～6個(gè)月44～6647～676個(gè)月～1歲56～7955～701～18歲57～8057～80（注：各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有自己的參考范圍。）參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13.臨床意義：總蛋白檢測對(duì)于多種疾病的診斷都有價(jià)值。肝臟蛋白合成缺陷、腎功能損傷引起蛋白丟失、腸道吸收不良或營養(yǎng)不良時(shí)總蛋白濃度下降。而在慢性炎癥疾病、肝硬化和脫水時(shí)總蛋白濃度升高。14.操作性能14.1線性范圍：0.5～150g/L14.2精密度：重復(fù)性的評(píng)估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，AU1000批內(nèi)重復(fù)性小于3%，總不精密度小于3%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度n=20(g/L)s(g/L)CV(%)天間精密度n=20(g/L)s(g/L)CV(%)樣品152.70.50.91樣品152.40.61.06樣品270.50.71.01樣品270.71.11.53樣品31040.80.80樣品31041.41.3214.3方法學(xué)比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑盒(x)，同時(shí)對(duì)68個(gè)樣品進(jìn)行TP檢測，將檢測結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：y=1.00x-0.7g/L；r=0.997。14.4靈敏度：本試劑的檢測限為0.5g/L。14.5病人結(jié)果可報(bào)告范圍0～150g/L，如樣品測定值超過上限時(shí)，應(yīng)將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1:1稀釋，重新測定，結(jié)果乘以2。15.超出范圍結(jié)果處理：本法線性上限為150g/L。如樣品測定值超過上限時(shí)，應(yīng)將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1:1稀釋，重新測定，結(jié)果乘以2。16.病危報(bào)警值的處理無。17.方法局限性17.1本法線性上限為150g/L。如樣品測定值超過上限時(shí)，應(yīng)將樣品用0.9％氯化鈉溶液作1:1稀釋，重新測定，結(jié)果乘以2。17.2干擾物質(zhì)：靜脈滴注大量右旋糖酐的病人血清或血漿，使用雙縮脲方法的檢測結(jié)果會(huì)明顯增高，請選用其它方法（如凱氏定氮法）；當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度1704mol/L，膽紅素濃度684mol/L，血紅蛋白濃度5.00g/L