糖基分離方法介紹第一頁，共十二頁，編輯于2023年，星期三添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本第二頁，共十二頁，編輯于2023年，星期三聚糖的分離、檢測原理操作步驟、儀器方法沿革第三頁，共十二頁，編輯于2023年，星期三添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本方法沿革幾乎所有的分離糖基的方法都是化學方法，因為尚無適用于所有O鏈接糖蛋白的酶最常用的化學方法是β消化法，但是這會導致糖基被還原，生成糖醇，無法進行定量檢測其它方法還有乙二胺、氨、氫氧化鋰法，但是分離的量非常少1.RadoslawP.Kozak.ImprovednonreductiveO-glycanreleasebyhydrazinolysiswithethylenediaminetetraaceticacidaddition.AnalyticalBiochemistry,2014,453:29-57第四頁，共十二頁，編輯于2023年，星期三添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本分離原理：肼解作用2.RadoslawP.Kozak.SuppressionofpeelingduringthereleaseofO-glycansbyhydrazinolysis.AnalyticalBiochemistry,2012,423:119-1281.RadoslawP.Kozak.ImprovednonreductiveO-glycanreleasebyhydrazinolysiswithethylenediaminetetraaceticacidaddition.AnalyticalBiochemistry,2014,453:29-57第五頁，共十二頁，編輯于2023年，星期三添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本缺點：退化（peeling）指每一步中殘端減少一個單糖結構改進方法：肼化前去除水分子并加入低濃度的已二酸已二胺，可以有效降低peeling第六頁，共十二頁，編輯于2023年，星期三試劑準備樣品準備TIMESHEET實驗步驟第七頁，共十二頁，編輯于2023年，星期三添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本試劑準備主要試劑：Ludger公司LL-HYDRAZ-A2試劑盒其它試劑：純水、PD10色譜柱、離心機、惰性氣體（氮氣或氬氣）、烘干箱或者通風櫥、注射器、加熱裝置、蒸發(fā)裝置、移液器主要儀器：高效液相色譜儀、離子肼質譜第八頁，共十二頁，編輯于2023年，星期三添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本樣品純化：透析膜透析或離心，然后用清洗液清洗樣品轉移：加到反應瓶中（50ug到1mg）樣品烘干添加無水肼肼解孵化N、O糖基具體步驟未附，見說明書樣品制備第九頁，共十二頁，編輯于2023年，星期三添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本TIMESHEET1.轉移至反應瓶并徹底烘干24h2.添加無水肼15min3.孵化6-16h4.肼洗脫2-24h5.乙?；?h6.純化分離出的糖基2h第十頁，共十二頁，編輯于2023年，星期三添加文本點擊添加文本點擊添加文本點擊添加文本離子肼質譜檢測進樣HPLC分離