蛹蟲草菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了蛹蟲草菌種生產(chǎn)的環(huán)境條件、種源選擇、一級種生產(chǎn)、二級種生產(chǎn)、質(zhì)量檢驗、廢棄物處理與檔案記錄的要求。本文件適用于XX蛹蟲草菌種生產(chǎn)。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T12728食用菌術(shù)語GB/T34805農(nóng)業(yè)廢棄物綜合利用通用要求NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程NY/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求NY/T1846食用菌菌種檢驗規(guī)程NY/T2375食用菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范《食用菌菌種管理辦法》（農(nóng)業(yè)部令第62號）（2015年修正本）術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。蛹蟲草cordycepsmilitaris麥角菌科、蟲草屬真菌，又名北冬蟲夏草、北蟲草、北蛹蟲草，簡稱蛹草，拉丁名：Cordycepsmilitaris。由子座（即草部分）與菌核（即蟲的尸體部分）兩部分組成的復(fù)合體。蛹蟲草菌種cordycepsmilitarisstrain蛹蟲草菌種是以XX省、XX省等中國北方野生蛹蟲草為樣本，采用組織或孢子分離法，經(jīng)分離、純化、馴化，選育獲得的具有一致性、穩(wěn)定性、結(jié)實性的真菌菌種，經(jīng)人工培養(yǎng)進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖以及用于栽培生產(chǎn)的純菌絲培養(yǎng)物，包括固體一級種和液體二級種。出草outofthegrass菌絲形成原基，由原基發(fā)育成子實體的過程。環(huán)境條件環(huán)境條件應(yīng)符合NY/T528、NY/T1742的規(guī)定；生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。種源選擇應(yīng)從具有生產(chǎn)經(jīng)營資質(zhì)的供種單位購買，菌種質(zhì)量應(yīng)符合NY/T1742的要求；自制菌種應(yīng)符合《食用菌菌種管理辦法》的規(guī)定。一級種生產(chǎn)工藝流程培養(yǎng)基配制→分裝→滅菌→擺斜面冷卻→接種→培養(yǎng)→檢查→成品。培養(yǎng)基配制按配方稱取各種材料，先將馬鈴薯洗凈去皮，挖去芽眼，切成薄片，稱取200g，放在鍋中加水1000mL，加熱至沸騰，并維持25min—30min，用雙層紗布過濾，取濾液加水補足1000毫升，先將X脂加入煮溶化，加入葡萄糖等，稍煮幾分鐘即可。常用一級種培養(yǎng)基配方參見附錄A。分裝與滅菌采用規(guī)格為18mm×180mm或20mm×200mm的玻璃試管，試管用硅膠塞封口。將配制好的培養(yǎng)基立即分裝，裝量為試管長度的1/4～1/5。試管口應(yīng)保持干凈，隨后塞入硅膠塞，并用牛皮紙包扎。將分裝包扎好的試管直立放入高壓滅菌鍋內(nèi)（壓力0.12Mpa～0.15Mpa、溫度121℃～126℃），滅菌25min～30min。斜面擺放滅菌結(jié)束后自然冷卻至溫度85℃～95℃時，打開排氣閥排出熱空氣；當(dāng)壓力表指針降至0Mpa、培養(yǎng)基溫度降到55℃～65℃時取出試管擺斜面，斜面長度不超過試管長度的2/3。接種接種設(shè)施設(shè)備消毒流程應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。接種時應(yīng)無菌操作，接種后及時貼好標(biāo)簽，標(biāo)簽應(yīng)注明菌種名稱及接種時間。培養(yǎng)接種后置于培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室培養(yǎng)，控制溫度16℃～18℃，避光培養(yǎng)5d～6d，定期檢查，清除污染試管，待菌絲長滿試管斜面，穩(wěn)定3d～5d即可用于生產(chǎn)。貯存一級母種經(jīng)儲存60d后再使用，應(yīng)進(jìn)行轉(zhuǎn)代擴(kuò)繁和出草試驗。二級種生產(chǎn)工藝流程培養(yǎng)基配制→裝瓶→滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)→成品。培養(yǎng)基配制按6.2XX法配制。常用二級種培養(yǎng)基配方參見附錄B。分裝與滅菌、冷卻采用規(guī)格為250mL的玻璃三角瓶，用專用封口膜封扎瓶口。將配制好的培養(yǎng)基立即分裝，裝量不超過三角瓶容量的2/5。將分裝好的三角瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)（壓力0.12Mpa～0.15Mpa、溫度121℃～126℃），滅菌25min～30min。滅菌結(jié)束后自然冷卻，壓力表指針降至0Mpa時，打開排氣閥，在培養(yǎng)基溫度降到55℃～65℃時取出三角瓶，冷卻至常溫。接種接種設(shè)施設(shè)備消毒流程應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。用接種鉤從母種斜面中切取1cm2菌面（可稍帶培養(yǎng)基）放入玻璃三角瓶中，迅速用專用封口膜封扎瓶口，每支一級種可接種10瓶～15瓶液體栽培種。接種時應(yīng)無菌操作，接種后及時貼好標(biāo)簽，標(biāo)簽應(yīng)注明菌種名稱及接種時間。培養(yǎng)接種后先避光靜置培養(yǎng)，溫度16℃～18℃，時間1d～2d，再放入搖床上振蕩培養(yǎng)，控制轉(zhuǎn)速150r/min，溫度16℃～18℃，避光培養(yǎng)4d～5d，定期檢查，清除污染的菌種，保持培養(yǎng)房空氣環(huán)境清新無異味產(chǎn)。貯存液體二級種應(yīng)在培養(yǎng)好之后盡快投入生產(chǎn)，未用完的二級種在2℃～4℃環(huán)境中保質(zhì)期7d～10d。質(zhì)量檢驗質(zhì)量要求一級種質(zhì)量要求見附錄C；二級種質(zhì)量要求見附錄D。抽樣與檢測一級種、二級種的抽樣、檢驗和判定應(yīng)符合NY/T1846的規(guī)定。留樣應(yīng)符合NY/T1742的規(guī)定。標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝、運輸應(yīng)符合NY/T528、NY/T1742的規(guī)定。廢棄物處理菌種生產(chǎn)所產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)分類進(jìn)行無害化處理，并符合GB/T34805的規(guī)定。檔案管理蛹蟲草菌種生產(chǎn)記錄表見附錄E，原始記錄檔案應(yīng)保存3年（含3年）以上。

（資料性）

常用一級菌種培養(yǎng)基配方常用一級菌種培養(yǎng)基配方序號原輔材料名稱PDA培養(yǎng)基CPDA加富培養(yǎng)基備注1馬鈴薯浸出汁200g200g2葡萄糖20g20g3X脂20g20g4磷酸二氫鉀02g5硫酸鎂00.5g6水1000mL1000mL

（資料性）

常用二級菌種培養(yǎng)基配方常用二級菌種培養(yǎng)基配方序號原輔材料名稱配方一配方二配方三備注1馬鈴薯16.2%18%20%2蠶蛹粉1.62%2%1%葡萄糖0.4%0.2%0.3%3磷酸二氫鉀0.16%0.1%0.1%4硫酸鎂0.08%0.1%0.1%5維生素B10.24%0.3%0.3%6水81.3%79.3%78.2%合計100％100％100％

（資料性）

一級菌種質(zhì)量要求一級菌種質(zhì)量要求項目要求菌絲菌絲長滿基質(zhì)斜面，菌苔粉末狀或短絨毛狀，橘黃色或橘紅色，厚薄均勻一致，無明顯白色絨毛狀氣生菌絲；無雜菌；菌苔底部呈黃色原基母種試管在2～4℃的條件下長時間保存可出現(xiàn)原基轉(zhuǎn)代次數(shù)一代母種轉(zhuǎn)代不超過3次鏡檢菌絲絲狀，均勻一致，無雜菌

（資料性）

二級菌種質(zhì)量要求二級菌種質(zhì)量要求項目要求菌絲菌絲絮狀或小球狀，均勻一致，掛瓶壁的菌絲短絨毛狀，淡黃色雜質(zhì)無任何雜質(zhì)培養(yǎng)液菌液澄清透明，菌球在菌液中分散均勻、無上浮、無沉淀氣味有蛹蟲草獨有的菌香味、無異味鏡