任務(wù)培養(yǎng)基的制備技術(shù)第一頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六一、認(rèn)識(shí)化能自養(yǎng)菌氧化硫桿菌的培養(yǎng)基粉末狀硫10gKH2PO44gMgSO40.5gCaCl20.5g(NH4)2SO40.4gFeSO40.01g

水1000mL（自來(lái)水即可）提問(wèn)：其中各組分作用是什么？空氣中的CO2能源碳源是什么？氮源鹽也可補(bǔ)加一部分碳酸鈉。第二頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六培養(yǎng)一種大腸桿菌的培養(yǎng)基配方如下：葡萄糖0.5gK2HPO41gMgSO40.2gNaCl5gNH4H2PO40.4g水1000mL大腸桿菌的營(yíng)養(yǎng)類型？化能異養(yǎng)型。培養(yǎng)基的基本要求？至少有一種有機(jī)物，實(shí)驗(yàn)室中通常是葡萄糖第三頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六培養(yǎng)基類型合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)天然培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基富集培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基按成分不同劃分按用途劃分按物理形態(tài)劃分二、培養(yǎng)基的分類第四頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六(一)按成分劃分：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基第五頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六(一)按照培養(yǎng)基成分來(lái)源分：a.天然培養(yǎng)基：利用化學(xué)成分還不清楚或不穩(wěn)定的天然有機(jī)物制成的培養(yǎng)基。

第六頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六

優(yōu)點(diǎn)：原料來(lái)源充足、營(yíng)養(yǎng)豐富、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便缺點(diǎn)：成分和含量不確定，重復(fù)性差用途：適用于實(shí)驗(yàn)室粗放性實(shí)驗(yàn)和大規(guī)模生產(chǎn)之用。舉例：麥芽汁培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基第七頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六b.合成培養(yǎng)基：用化學(xué)成分和量都確切知道的純化學(xué)試劑制成的培養(yǎng)基。

優(yōu)點(diǎn)：成分精確、穩(wěn)定、重復(fù)性好缺點(diǎn)：價(jià)格較貴，微生物生長(zhǎng)緩慢用途：適用于做分類鑒定，生物測(cè)定、選種育種等要求較高的研究工作。舉例：高氏一號(hào)培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基等第八頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六(一)按照培養(yǎng)基成分來(lái)源分：c.半合成培養(yǎng)基：用天然有機(jī)物和化學(xué)藥品制成的培養(yǎng)基。

特點(diǎn)：能充分滿足微生物的營(yíng)養(yǎng)要求，適合于大多數(shù)微生物的培養(yǎng)。舉例：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基第九頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六可溶性淀粉20.0克KNO31.0克K2HPO40.5克MgSO4·7H2O0.5克NaCl0.5克FeSO4·7H2O溶液2滴（10%）蒸餾水1000毫升牛肉膏3.0克蛋白胨10.0克食鹽5.0克蒸餾水（自來(lái)水）1000毫升合成培養(yǎng)基

天然培養(yǎng)基

第十頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六◆天然的固體培養(yǎng)基——如馬鈴薯塊、麩皮、米糠、胡蘿卜條、木屑等；◆凝固劑(1.5～2％瓊脂)，可用于微生物的分離、鑒定、計(jì)數(shù)、保藏等凝固劑(0.3～0.6％瓊脂)。常用于觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)特征，噬菌體效價(jià)鑒定等。微生物能充分接觸養(yǎng)料，有利于生長(zhǎng)繁殖及代謝產(chǎn)物積累，常用于微生物大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)。固體培養(yǎng)基(solidmedium)半固體培養(yǎng)基(semi-solidmedium)液體培養(yǎng)基(liquidmedium)（二）按照培養(yǎng)基的物理性狀分第十一頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六①不被微生物液化、分解和利用；②在微生物生長(zhǎng)的溫度范圍內(nèi)保持固體狀態(tài)；③凝固點(diǎn)溫度對(duì)微生物生長(zhǎng)無(wú)害；④不因滅菌而被破壞；⑤透明度好、黏著力強(qiáng)；⑥配制方便，價(jià)格低廉。理想的凝固劑應(yīng)具備以下條件：瓊脂：膠體多糖，熔點(diǎn)96℃，凝固點(diǎn)40-50℃第十二頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六第十三頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六基礎(chǔ)培養(yǎng)基加富培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基生產(chǎn)用培養(yǎng)基(三)按照培養(yǎng)用途分：第十四頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六b.加富培養(yǎng)基：根據(jù)待分離微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求配制的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。使目標(biāo)微生物能在其中旺盛生長(zhǎng)，逐步占優(yōu)勢(shì)，從而達(dá)到與雜菌分離的目的。培養(yǎng)時(shí)要同時(shí)考慮營(yíng)養(yǎng)成分和培養(yǎng)環(huán)境兩個(gè)因素，才能達(dá)到預(yù)期的目的a.基本培養(yǎng)基：能滿足一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需要培養(yǎng)基。(三)按照培養(yǎng)用途：第十五頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六根據(jù)微生物的特殊要求，從自然界分離出特定已知微生物種類；分離培養(yǎng)在特殊環(huán)境中才能生長(zhǎng)的微生物，以纖維素或石蠟油為唯一碳源的富集培養(yǎng)基，可以從混雜的微生物群體中分離出能分解纖維素或石蠟油的微生物。富集培養(yǎng)第十六頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六C.選擇培養(yǎng)基

在培養(yǎng)基中加入抑制劑以殺死或抑制不需要的菌種，而目標(biāo)微生物因?qū)υ撘种苿┯锌剐远ＩL(zhǎng)繁殖的一類培養(yǎng)基。

(三)按照培養(yǎng)基的用途分：第十七頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六抑制劑：

青霉素（抑制G+

細(xì)菌）分離G-

細(xì)菌抗生素氯霉素，鏈霉素（抑制細(xì)菌分離酵母、霉菌

染料膽鹽：抑制G+

分離G-

孟加拉紅：抑制分離

用于選擇性的物理因素有：溫度，氧氣，pH值，滲透壓等第十八頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六

目的：增殖少數(shù)手段：“投其所好”混合樣品富集培養(yǎng)基

成為中劣勢(shì)菌選擇培養(yǎng)基

優(yōu)勢(shì)菌目的：抑制多數(shù)菌手段：“取其所抗”

第十九頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六d.鑒別培養(yǎng)基：利用微生物的代謝產(chǎn)物與指示劑的顯色反應(yīng)，快速鑒別不同微生物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(三)按照培養(yǎng)基的用途：第二十頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六鑒別培養(yǎng)基(differentialmedium)伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB）：伊紅和美藍(lán)二種染料，可用于鑒別食品、水源、乳制品等待檢樣品中是否含有大腸桿菌。如果有大腸桿菌，則其代謝產(chǎn)物能與伊紅與美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。第二十一頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六◆目的：為了獲得數(shù)量充足和質(zhì)量較好的健壯菌體，同時(shí)兼顧菌種對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基的適應(yīng)能力。◆特點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富且完全，氮源和維生素含量高、易被利用◆目的：獲得最大強(qiáng)度的代謝產(chǎn)物。◆特點(diǎn)：原料粗放、來(lái)源充足、價(jià)格低廉、碳源比例大，有時(shí)還在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加前體、促進(jìn)劑或抑制劑。（1）種子培養(yǎng)基

（2）發(fā)酵培養(yǎng)基

(四)按照培養(yǎng)基的使用目的分：第二十二頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六三、培養(yǎng)基應(yīng)具備的條件具有合適的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，滿足微生物對(duì)六大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求；應(yīng)始終保持在微生物發(fā)育的pH值范圍內(nèi)；任何培養(yǎng)基一旦配成，須立即滅菌后才能使用。第二十三頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六（一）目的明確（二）營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)（三）營(yíng)養(yǎng)適宜（四）條件適宜（五）經(jīng)濟(jì)節(jié)約四、配制培養(yǎng)基的原則第二十四頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六（一）目的明確培養(yǎng)何物？積累代謝產(chǎn)物？實(shí)驗(yàn)室或大規(guī)模發(fā)酵？培養(yǎng)菌體？第二十五頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六生理特點(diǎn)不同細(xì)菌放線菌霉菌營(yíng)養(yǎng)要求不同（）培養(yǎng)基（）培養(yǎng)基（）培養(yǎng)基（二）營(yíng)養(yǎng)適宜自養(yǎng)微生物——簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物異養(yǎng)微生物——至少提供一種有機(jī)物培養(yǎng)自生固氮微生物？培養(yǎng)乳酸菌？無(wú)氮培養(yǎng)基添加生長(zhǎng)因子第二十六頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六（三）營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)●營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度及配比合適

濃度過(guò)小——濃度過(guò)高——水＞碳源＞氮源＞P、S＞K、Mg＞生長(zhǎng)因子第二十七頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六（三）營(yíng)養(yǎng)協(xié)調(diào)一般培養(yǎng)基中C/N比為（100:0.5~2）但谷氨酸生產(chǎn)中較特殊：

C/N＝4/1時(shí)，菌體大量繁殖，谷氨酸積累少；C/N＝3/1時(shí)，菌體生長(zhǎng)受抑制，而谷氨酸大量增加。第二十八頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六1.滲透壓 等滲溶液 高滲溶液 細(xì)胞發(fā)生（） 低滲溶液細(xì)胞（）（四）條件適宜第二十九頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六細(xì)菌：7.0~8.0 放線菌：7.5~8.5 酵母菌：3.8~6.0 霉菌：4.0~5.82.pH

pH內(nèi)源調(diào)節(jié)緩沖液：K2HPO4/KH2PO4（pH6.4~7.2）調(diào)節(jié)方式固體碳酸鹽：CaCO3

外源調(diào)節(jié)：流加酸或堿第三十頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六☆加入CaCO3“備用堿”：

CO32–HCO3–H2CO3CO2+H2O+H+–H–+H+–H–☆磷酸緩沖液：pH值從6.４~7.２之間K2HPO4+HClKH2PO4+KClKH2PO4+KOHK2HPO4+H2O2.pH第三十一頁(yè)，共三十四頁(yè)，編輯于2023年，星期六

3.O2濃度的調(diào)節(jié)

由微生物與氧氣的關(guān)系形成了三類微生物：專性好氧性微生物專性厭氧性微生物兼性厭