微核實(shí)驗(yàn)常用的致突變試驗(yàn)，細(xì)胞遺傳損傷的指標(biāo)之一，可用于染色體斷裂劑和紡錘體損傷劑的檢測化學(xué)致突變物無著絲點(diǎn)斷片整個(gè)染色體帶著絲粒的環(huán)和斷片原理：1有絲分裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶著絲點(diǎn)的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被滯留在細(xì)胞質(zhì)中斷片或無著絲點(diǎn)染色體在細(xì)胞分裂后期不能定向移動(dòng)，從而遺留在細(xì)胞質(zhì)中小鼠骨髓多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)中微核可出現(xiàn)于多種細(xì)胞中，但在有核細(xì)胞中難以與正常核的分葉及核突出物區(qū)分，故常計(jì)數(shù)PCE細(xì)胞中的微核，因?yàn)槌杉t細(xì)胞發(fā)展為紅細(xì)胞時(shí)，主核排出，成為PCE，這些細(xì)胞保持其嗜堿性約24小時(shí)，然后成為NCE,并進(jìn)入外周血。在主核排出時(shí)，已形成的微核可留在胞漿中。因此，這些在細(xì)胞中沒有主核，便于觀察。觀察并計(jì)數(shù)多染紅細(xì)胞中的微核，可反映染色體斷裂和紡錘體損傷情況。本試驗(yàn)的測試終點(diǎn)為染色體損傷。PCE：polychromaticerythrocyte,多染紅細(xì)胞NCE：normochromaticerythrocyte,正染紅細(xì)胞試劑與器材（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成年小鼠（二）試劑：

受試物：氟化鈉陽性對照物：環(huán)磷酰胺、絲裂霉素C、三亞乙基密胺、甲磺酸乙酯、乙基亞硝基脲…小牛血清（使用前pH調(diào)至6.4）甲醇磷酸緩沖液Giemsa（吉姆薩）染液：用時(shí)，將Giemsa原液用pH6.4的磷酸緩沖液1:10稀釋（三）器材：（略）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：ICR小鼠，體重18-22克，每組10只，雌雄各半，隨機(jī)分組劑量分組：原則：最高劑量可選用動(dòng)物的最大耐受劑量或化合物L(fēng)D50的50%不能引起明顯的骨髓抑制，即PCE/(PCE+NCE)不低于對照值的20%

（因?yàn)楣撬璋l(fā)生抑制時(shí)，外周血會(huì)發(fā)生反流）

氟化鈉：LD50=224.9mg/kg陰性對照組水受試物劑量組高劑量組224.9*50%=112.5mg/kg中劑量組112.5*1/2=56.25mg/kg或*1/4=28mg/kg低劑量組56.25*1/2=28.125mg/kg或*1/4=7mg/kg陽性對照組環(huán)磷酰胺120mg/kg1/21/41/811.25mg/ml5.625mg/ml2.8125mg/ml0.1ml/10gNaF:90mg8ml11.25mg/ml4ml4+4ml5.625mg/ml4ml4+4ml2.8125mg/ml三.染毒途徑：灌胃四.染毒次數(shù)及骨髓采樣時(shí)間一次染毒、間隔24小時(shí)兩次染毒、多次染毒應(yīng)于最大敏感期取樣（預(yù)實(shí)驗(yàn)）本次實(shí)習(xí)采用一次染毒，24小時(shí)后取樣測定操作步驟24小時(shí)后制片染色鏡檢染毒取材取骨擦凈血污、剔去肌肉剪去骨骺端小牛血清混勻、推片吹干甲醇中固定2minGiemsa染色液染色10-15minpH=6.4pH=6.4沖洗、晾干鏡檢、細(xì)胞計(jì)數(shù)鏡檢先在低倍鏡下觀察染色及細(xì)胞分散情況，再以油鏡計(jì)數(shù)每例樣本計(jì)數(shù)1000個(gè)PCE，記錄有微核細(xì)胞數(shù)，一個(gè)細(xì)胞中有幾個(gè)微核時(shí)，記為一個(gè)有微核細(xì)胞。再計(jì)數(shù)200個(gè)紅細(xì)胞，記錄PCE在總紅細(xì)胞（PCE+NCE）中的比例，作為對細(xì)胞毒性的指標(biāo)多染紅細(xì)胞PCE正染紅細(xì)胞NCE微粒淺蘭色胞漿呈顆粒狀油畫淡紅色胞漿呈均質(zhì)狀水彩畫圓形或橢圓形邊緣光滑染色與有核細(xì)胞的核一致，紫紅色大小約為紅細(xì)胞的1/20-1/5MNMNNCE圖1：正常嗜多染紅細(xì)胞PCE（×400）圖2帶微核嗜多染紅細(xì)胞MNPCE（×400）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)受試物劑量（mg/kg）各受試小鼠1000個(gè)受檢細(xì)胞中含微核細(xì)胞數(shù)總計(jì)12345678910NaF112.556.2528.125水0.1ml/10g環(huán)磷酰胺120受試物劑量（mg/kg)受檢細(xì)胞總數(shù)（個(gè)）含微核細(xì)胞數(shù)（個(gè)）平均微核千分率（‰）標(biāo)準(zhǔn)誤NaF112.5100056.25100028.1251000水0.1ml/10g1000環(huán)磷酰胺1201000結(jié)果分析與評(píng)價(jià)受試物劑量（mg/kg）各受試小鼠200個(gè)紅細(xì)胞中含PCE數(shù)量總PCE總PCE/200012345678910NaF112.556.2528.125水0.1ml/10g環(huán)磷酰胺120結(jié)果分析與評(píng)價(jià)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法檢驗(yàn)微核細(xì)胞率的差別Kastenbaum-Bowman統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)表泊松分布二項(xiàng)分布t檢驗(yàn)單因素方差分析一元線性回歸分析結(jié)果分析與評(píng)價(jià)結(jié)果判定：實(shí)驗(yàn)組微核細(xì)胞率比對照組有顯著增加，并有劑量反應(yīng)關(guān)系，可認(rèn)為是陽性結(jié)果。陰性對照組小鼠的微核細(xì)胞率一般不超過3‰。若微核發(fā)生在雌雄間有明顯差異時(shí)，需按照性別分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。PCE/(PCE+NCE)不低于對照值的20%PCE/NCE為評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性的指標(biāo)，受試組PCE/NCE值與陰性對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義表示受試化學(xué)毒物的劑量