人體腫瘤細胞

非顯帶染色體的制備實驗目的熟悉：人腫瘤細胞染色體制備的基本原理和操作方法。腫瘤細胞染色體數(shù)目和結構的異常。實驗原理目前大多數(shù)癌癥都建立了相應的細胞株或細胞系，體外培養(yǎng)的腫瘤細胞多屬于連續(xù)分裂的周期性細胞。收集生長旺盛的腫瘤細胞，加入有絲分裂阻滯劑秋水仙素預處理4-6h，再經過低滲、固定、染色等過程，就可獲得腫瘤細胞非顯帶染色體。實驗材料和用品1．細胞株人腫瘤細胞（7721、Hela等）

2．器材和儀器光學顯微鏡、超凈工作臺，CO2培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、離心機、冰箱、鑷子、記號筆實驗材料和用品3、試劑1640培養(yǎng)基、雙抗（鏈霉素、青霉素）、小牛血清、0.25%胰酶、秋水仙素、0.075mol/LKCl、PBS緩沖液、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液、香柏油、擦鏡紙、鏡頭清洗劑腫瘤細胞培養(yǎng)1-2天(70%~80%豐度）秋水仙素處理3h(終濃度為1ug/ml）低滲（加KCl

6ml，37℃水浴40min）

先預固定2min，在固定2次（每次30min）

制片并染色（吉姆薩染液染色20-30min

）實驗流程鏡檢（觀察并計數(shù)）

實驗步驟1.1.細胞培養(yǎng)：將生長良好的人腫瘤細胞（7721、Hela等）鋪入35mm細胞培養(yǎng)瓶中，加入5ml1640培養(yǎng)基（含10%小牛血清、雙抗）后放置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約2~3天。

實驗步驟2.終止細胞分裂：細胞生長至70~80%豐度時，加入100ug/ml秋水仙素2-3滴（終濃度為1ug/ml

），輕輕將液體搖勻，繼續(xù)培養(yǎng)3h。3.收獲細胞：搖勻培養(yǎng)液，移入10ml離心管，1000r/min離心3分鐘，棄去上清，保留底部約1ml。實驗步驟4.低滲處理：加入約5ml

0.075mol/LKCl溶液（預先37℃水浴），輕輕打勻，37℃水浴15min。5.固定：①預固定：加固定液（甲醛：冰醋酸=3:1）2ml，輕輕打勻，預固定2min，1000r/min離心5min，棄去上清，保留底部約1ml。②固定：加入固定液至8ml，打勻，固定30min，1000r/min離心5min棄去上清，保留底部約1ml。再重復固定1次。實驗虜步驟5.滴片除：加馳至1m匆l固定墳液制蛇成細堡胞懸驕液，漲滴1~番2滴細拒胞懸穴液懸空15喚~2形0c脾m至冰加水中礙取出偷的載胞玻片申上，迅蠻速過鋪酒精筑燈火征焰烤霸干。6.染色賽：在另標本牛片上東加數(shù)床滴吉躲姆薩帳染液恒，染申色20南mi螞n，水勇洗。7.鏡檢唱：選劈燕擇3~桂5個染浸色體攜分散照好、斤沒有字重疊派、團少聚性粥較好勵的細雜胞，嫩在油敘鏡下椒仔細葡觀察始、計份數(shù)。注意拜事項團：1.秋水垃仙素體作用償濃度蓮與時褲間：靜秋水系仙素師的作茄用是錢抑制羽紡錘洗絲和毅使染勁色體帖變短打，一敢般秋群水仙苗素溶支液的俗濃度勒與處倉理時融間有幫一定靜的關嶺系，屆如果浴處理撈時間巾太短篇，則清標本鬼中的仔分裂煎細胞籠就少纏，相張反，要如果概處理帽時間經太長亮，則含標本醬中的治分裂盆細胞偉雖多灶，但更其染抄色體摧縮得現(xiàn)太短富，以餓致形壞態(tài)特淘征模嚇糊，遮不容說易觀摸察。注意恐事項珍：2.滴片獸的高畢度：濁高度誓過高,染色咳體分躬散范交圍過仗大,甚至岡造成請染色遣體丟競失;高度請過低,則染絕色體澆分散盼不良省。3.低滲肌低仆滲的頑目的妄是讓親水分插進入私細胞,使細鴉胞腫責脹、護染色牽體松鎖散,是染忽色體濟制備帶過程塌中的劑關鍵球環(huán)節(jié)高之一辰。實驗甩結果實驗樓報告垂：