（優(yōu)選）課題分解纖維素的微生物的分離本文檔共60頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分以上資料表明，如果有機(jī)錫長期污染將會(huì)導(dǎo)致__________下降，從而降低生態(tài)的

。若想探究海洋底泥中是否存在分解三丁基錫的細(xì)菌，以便用于今后的生態(tài)修復(fù)，篩選目標(biāo)菌株的培養(yǎng)基成分為：蛋白胨、

、NaCl、水和瓊脂。2、（2011廣東高考）人們使用含三丁基錫、三苯基錫等有機(jī)錫化合物的油漆涂于船只、海洋建筑物等，有效防止了海洋生物附著生長，但近年來的研究發(fā)現(xiàn)油漆中有機(jī)錫可釋放入海，對多種生物造成毒害。有關(guān)該污染物的部分研究如下，請回答：三丁基錫生物多樣性穩(wěn)定性本文檔共60頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分2011深圳二模16分）下列是對土壤微生物開展探究活動(dòng)的三個(gè)案例，請?jiān)谙鄳?yīng)的空白處作答。1）案例Ⅰ：探究落葉在土壤微生物的作用下是否發(fā)生腐爛(分解)。設(shè)計(jì)思路：組別對照組實(shí)驗(yàn)組

處理情況不做處理的帶落葉的土壤進(jìn)行過處理的帶落葉的土壤將等量的帶落葉的土壤,用帶有編號的相同的塑料袋分別包扎好，并埋在5cm深的土壤中對實(shí)驗(yàn)組土壤應(yīng)該進(jìn)行

處理，盡可能排除

的作用。組別對照組實(shí)驗(yàn)組

處理情況不做處理的帶落葉的土壤進(jìn)行過處理的帶落葉的土壤將等量的帶落葉的土壤,用帶有編號的相同的塑料袋分別包扎好，并埋在5cm深的土壤中土壤微生物的作用滅菌本文檔共60頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分3、案例Ⅰ：探究土壤微生物對淀粉的分解作用。實(shí)驗(yàn)步驟：①

將取自農(nóng)田的土壤制成土壤浸出液，放在燒杯中靜置一段時(shí)間。②

另取兩只燒杯，編號為A、B，放入等量的淀粉糊。在A燒杯中加入30mL土壤浸出液，B燒杯中加入

。③

在室溫條件下放置7天后，從A燒杯中取20mL溶液，分別加入A1和A2兩支試管各10mL；從B燒杯中取20mL溶液，分別加入B1和B2兩支試管各10mL；④

在A1和B1中加入碘液；在A2和B2中加入

，并進(jìn)行

處理。⑤

觀察各試管的

，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。（3）案例Ⅱ：探究土壤微生物中是否含有分解纖維素的細(xì)菌。實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)將土壤浸出液接種在以

為唯一碳源的培養(yǎng)基上，并用

（試劑）加以鑒別。

30mL（等量）蒸餾水（無菌水)（等量的）斐林試劑顏色變化水浴加熱纖維素剛果紅本文檔共60頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分課題3分解纖維素的微生物的分離（一）纖維素與纖維素酶纖維素：一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，廣泛地存在于植物的根、莖、葉等器官中。地球上含量最豐富的多糖。纖維素酶：由微生物分泌的一種復(fù)合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，由于它們的協(xié)同作用，最終將纖維素分解成葡萄糖。纖維素C1酶Cx酶纖維二糖葡萄糖苷酶葡萄糖本文檔共60頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分剛果紅染色法剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，而不與水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。（二）纖維素分解菌的篩選用加入剛果紅的纖維素培養(yǎng)基去培養(yǎng)微生物時(shí)，如果培養(yǎng)基中出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈時(shí)，可說明該菌落是纖維素分解菌，因?yàn)樗褜⒈粍偣t染成紅色的纖維素分解了。本文檔共60頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

請你根據(jù)實(shí)驗(yàn)流程圖和提供的三個(gè)資料以及“操作提示”，在思考有關(guān)問題的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)出一個(gè)詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案。土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布在鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上篩選產(chǎn)生透明圈的菌落本文檔共60頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分1.本實(shí)驗(yàn)的流程與課題2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？本實(shí)驗(yàn)流程與課題2的流程的區(qū)別如下。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落。本課題通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。2.為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。本文檔共60頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分3.將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。閱讀與思考閱讀教材28～29頁“資料一”～“資料三”，并思考相關(guān)問題。問題一：是液體培養(yǎng)基，因?yàn)闆]有添加瓊脂。問題二：具有篩選作用，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中的碳源是纖維素，該培養(yǎng)基只有能分泌纖維素酶的纖維素分解菌才能生長。本文檔共60頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分問題三：“資料三”中的兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)和不足，你打算選哪一種？方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，不存在菌落混雜問題，缺點(diǎn)是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點(diǎn)是：有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時(shí)間培養(yǎng)過程中會(huì)降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。本文檔共60頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分問題四：為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。本文檔共60頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分土壤中纖維素分解菌的分離

1.土樣采集

：土樣采集的方法與本專題課題2類似。土樣的采集要選擇富含纖維素的環(huán)境，這是因?yàn)樵诶w維素含量豐富的環(huán)境，通常會(huì)聚集較多的分解纖維素的微生物。如果找不到合適的環(huán)境，可以將濾紙埋在土壤中，過一個(gè)月左右也會(huì)有能分解纖維素的微生物生長。二、實(shí)驗(yàn)案例本文檔共60頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分

2.選擇培養(yǎng)

：選擇培養(yǎng)需要的儀器有：250mL錐形瓶、無菌稱量瓶、藥匙、1mL和10mL的移液管、天平、搖床、溫度計(jì)等。在250mL錐形瓶中裝入30mL選擇培養(yǎng)基，用8層紗布做成瓶塞，將瓶口塞緊，再在瓶塞外包裹兩層包裝紙，用線繩扎緊，在121℃下高壓蒸汽滅菌20min。選擇培養(yǎng)的操作：稱取土樣20g，在無菌條件下加入裝有30mL培養(yǎng)基的搖瓶中。將搖瓶置于搖床上，在30℃下振蕩培養(yǎng)1～2d，至培養(yǎng)基變混濁，重復(fù)上述方法再培養(yǎng)一次，然后再進(jìn)行梯度稀釋和涂布平板。本文檔共60頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分

3.剛果紅染色法分離：纖維素分解菌這一步所需要的儀器有：無菌培養(yǎng)皿、涂布器、1mL移液管，裝有9mL無菌水的20mL大試管，溫箱等。培養(yǎng)基的制備參照課本旁欄中的比例配制。在500mL三角瓶中裝入200mL培養(yǎng)基，在121℃下高壓蒸汽滅菌20min。倒平板操作：將滅菌后的固體培養(yǎng)基熔化，按無菌操作的要求，在無菌的培養(yǎng)皿中倒入15～20mL培養(yǎng)基，凝固后待用。本文檔共60頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分

涂布平板：將稀釋度為104～106的菌懸液各取0.1mL，滴加在平板培養(yǎng)基上，用涂布器將菌液涂布均勻，在30℃倒置培養(yǎng)，至菌落長出。每個(gè)稀釋度下需涂布3個(gè)平板，并注意設(shè)置對照。剛果紅染色的具體操作步驟參照課本［資料三］。制備菌懸液：按照本專題課題1的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋，稀釋最大倍數(shù)至106。本文檔共60頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分剛果紅染色法方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)方法二：在倒平板時(shí)就加入剛果紅思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足方法一缺點(diǎn)是操作煩瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜；優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用方法二優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，不存在菌落混雜問題缺點(diǎn)一是由于培養(yǎng)基中還含有淀粉類物質(zhì)，可以使能產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)；缺點(diǎn)二有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時(shí)間培養(yǎng)過程中會(huì)降解剛果紅，形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分本文檔共60頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分三、結(jié)果分析與評價(jià)1.培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落

對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。2.分離的結(jié)果是否一致

由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，不同同學(xué)也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。本文檔共60頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分土壤取樣→選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定）→梯度稀釋→將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上→挑選單菌落→發(fā)酵培養(yǎng)課后練習(xí)2：本文檔共60頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分2011深圳二模16分）下列是對土壤微生物開展探究活動(dòng)的三個(gè)案例，請?jiān)谙鄳?yīng)的空白處作答。（1）案例Ⅰ：探究落葉在土壤微生物的作用下是否發(fā)生腐爛(分解)。設(shè)計(jì)思路：組別對照組實(shí)驗(yàn)組

處理情況不做處理的帶落葉的土壤進(jìn)行過處理的帶落葉的土壤將等量的帶落葉的土壤,用帶有編號的相同的塑料袋分別包扎好，并埋在5cm深的土壤中對實(shí)驗(yàn)組土壤應(yīng)該進(jìn)行

處理，盡可能排除

的作用。組別對照組實(shí)驗(yàn)組

處理情況不做處理的帶落葉的土壤進(jìn)行過處理的帶落葉的土壤將等量的帶落葉的土壤,用帶有編號的相同的塑料袋分別包扎好，并埋在5cm深的土壤中本文檔共60頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分以上資料表明，如果有機(jī)錫長期污染將會(huì)導(dǎo)致

下降，從而降低生態(tài)系統(tǒng)的

。若想探究海洋底泥中是否存在分解三丁基錫的細(xì)菌，以便用于今后的生態(tài)修復(fù)，篩選目標(biāo)菌株的培養(yǎng)基成分為：蛋白胨、

、NaCl、水和瓊脂。2、（2011廣東高考）人們使用含三丁基錫、三苯基錫等有機(jī)錫化合物的油漆涂于船只、海洋建筑物等，有效防止了海洋生物附著生長，但近年來的研究發(fā)現(xiàn)油漆中有機(jī)錫可釋放入海，對多種生物造成毒害。有關(guān)該污染物的部分研究如下，請回答：三丁基錫生物多樣性穩(wěn)定性本文檔共60頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分2、案例Ⅰ：探究土壤微生物對淀粉的分解作用。實(shí)驗(yàn)步驟：①

將取自農(nóng)田的土壤制成土壤浸出液，放在燒杯中靜置一段時(shí)間。②

另取兩只燒杯，編號為A、B，放入等量的淀粉糊。在A燒杯中加入30mL土壤浸出液，B燒杯中加入

。③

在室溫條件下放置7天后，從A燒杯中取20mL溶液，分別加入A1和A2兩支試管各10mL；從B燒杯中取20mL溶液，分別加入B1和B2兩支試管各10mL；④

在A1和B1中加入碘液；在A2和B2中加入

，并進(jìn)行

處理。⑤

觀察各試管的

，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。（3）案例Ⅱ：探究土壤微生物中是否含有分解纖維素的細(xì)菌。實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)將土壤浸出液接種在以

為唯一碳源的培養(yǎng)基上，并用

（試劑）加以鑒別。

30mL（等量）蒸餾水（無菌水)（等量的）斐林試劑顏色變化水浴加熱纖維素剛果紅本文檔共60頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分

29.（16分）（1）滅菌土壤微生物的作用（2）②30mL（等量）蒸餾水（無菌水）④（等量的）斐林試劑水浴加熱⑤顏色變化（3）纖維素剛果紅本文檔共60頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分本文檔共60頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期二\21點(diǎn)21分