5負(fù)載U266細(xì)胞抗原的樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)T細(xì)胞的抗骨髓瘤活性

【摘要】本研究探討負(fù)載骨髓瘤U266細(xì)胞裂解物的樹(shù)突狀細(xì)胞瘤苗活化的T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞的體外殺傷作用。用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，然后分別用含重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)、重組人白細(xì)胞介素4的AIMV無(wú)血清培養(yǎng)液和含胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液體外誘導(dǎo)培養(yǎng)DC，用MTT法檢測(cè)負(fù)載U266細(xì)胞全抗原的DC活化的T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞的殺傷作用。結(jié)果表明：健康人外周血來(lái)源的單個(gè)核細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng)液和含血清培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)均可得到足夠數(shù)量的DC，這兩種培養(yǎng)液培養(yǎng)的DC在表型上無(wú)明顯差異。分別用負(fù)載U266細(xì)胞全抗原的DC＋I(xiàn)L2、成熟DC＋I(xiàn)L2和單獨(dú)應(yīng)用IL2刺激后的T細(xì)胞與U266細(xì)胞共培養(yǎng)，其對(duì)U266細(xì)胞的殺傷作用逐漸減弱，負(fù)載U266細(xì)胞全抗原的DC＋I(xiàn)L2刺激后的T細(xì)胞較成熟DC＋I(xiàn)L2刺激后的T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞的殺傷作用明顯，且T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞的殺傷率隨效靶比的增加而升高。結(jié)論：用GMCSF、IL4誘導(dǎo)培養(yǎng)健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞可以得到不成熟的DC，體外負(fù)載U266細(xì)胞全抗原的DC可以刺激自體T細(xì)胞增殖并能殺傷U266細(xì)胞。

【關(guān)鍵詞】多發(fā)性骨髓瘤；樹(shù)突狀細(xì)胞；免疫治療

AntimylomaActivityofTcellActivatedbyDentriticCellsLoadingAntigenofU266Cells

AbstractThisstudywasaimedtoinvestigatetheeffectofTcellsactivatedbyDCsloadedwithwholeantigensofU266cellsontheU266cellssurvivalinvitro.Peripheralbloodmononuclearcellswereisolatedfromhealthydonor,andadherentedoncultureplate.AdherentcellswereculturedinAIMVserumfreemediumorinRPMI1640mediumcontained20%fetalbovineserum(FBS),supplementedwithgranulocytemacrophagecolonystimulatingfactor(GMCSF)andinterleukin4(IL4).Methylthiazolyltetrazolium(MTT)assaywasusedtoevaluatekillingrateofU266cellsbyTcellsactivatedbyDCsloadedwithwholeantigenofU266cells.TheresultsshowedthatDCsderivedfromperipheralbloodmononuclearcellsculturedbyAIMVserumfreemediumorRPMI1640mediumcontainingFBShadsimilarimmunophenotype.TcellsactivatedbyDCsloadedwithwholeantigenofU266cellsormatureDCsmightkillU266cellsinadosedependentmanner.Itisconcluded,DCsderivedfromperipheralbloodmononuclearcellsofhealthydonorandloadedwithwholeantigenofU266cellscaninduceantimyelomaresponseofTcellsinvitro.

Keywordsmultiplemyeloma;dendriticcell;immunotherapy

JExpHematol2007;15(3):581-585

樹(shù)突狀細(xì)胞是體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞(APC)，存在于除腦組織外的所有組織器官中，是機(jī)體免疫反應(yīng)的始動(dòng)者，其表達(dá)豐富而獨(dú)特的免疫球蛋白分子而發(fā)揮免疫佐劑的作用。DC表面的免疫球蛋白不僅可以聚集免疫細(xì)胞，而且有利于免疫細(xì)胞間的信息傳遞；DC受抗原性物質(zhì)刺激后能夠分泌多種細(xì)胞因子，誘導(dǎo)特異性的免疫反應(yīng)。腫瘤免疫逃避的機(jī)制之一是抗原呈遞細(xì)胞的數(shù)量不足或功能下降，而腫瘤細(xì)胞的清除要依靠宿主抗原呈遞細(xì)胞的強(qiáng)有力的功能。DC作為最強(qiáng)的唯一能激活初始T細(xì)胞的抗原呈遞細(xì)胞，在治療腫瘤和預(yù)防腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

目前針對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的治療主要采用化療和造血干細(xì)胞移植等綜合治療，取得了一定的效果，但微小殘留病灶的存在使骨髓瘤易復(fù)發(fā)，患者生存期縮短。以DC為基礎(chǔ)的免疫治療是近幾年來(lái)清除骨髓瘤微小殘留病研究的熱點(diǎn)。國(guó)外報(bào)道用無(wú)血清培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)骨髓或外周血單個(gè)核細(xì)胞來(lái)源的DC，然后用凋亡的骨髓瘤細(xì)胞或骨髓瘤細(xì)胞分泌的單克隆免疫球蛋白(Ig)，即M蛋白負(fù)載DC，使其捕獲、加工并表達(dá)腫瘤抗原而得到DC瘤苗，再通過(guò)靜脈或皮下注射的方式回輸體內(nèi)，可以觀察到骨髓瘤特異的抗瘤效應(yīng)［1，2］。國(guó)內(nèi)這方面的研究較少。本實(shí)驗(yàn)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)健康人外周血來(lái)源的DC，使其負(fù)載骨髓瘤細(xì)胞系U266細(xì)胞全抗原，探討負(fù)載抗原的DC對(duì)淋巴細(xì)胞的活化作用，及活化的淋巴細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞的殺傷活性。

主要試劑

U266細(xì)胞系來(lái)自本試驗(yàn)室，AIMV無(wú)血清培養(yǎng)液、RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液、胎牛血清均購(gòu)自Gibco公司；淋巴細(xì)胞分離液、MTT購(gòu)自Sigma公司；重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子、重組人白細(xì)胞介素4、腫瘤壞死因子α、白細(xì)胞介素2均購(gòu)自Sigma公司；熒光標(biāo)記的鼠抗人單克隆抗體CD1αFITC，CD14FITC，CD80FITC，CD86PE，CD83FITC，HLADRPE均購(gòu)于美國(guó)BectonDickinson公司。

DC的培養(yǎng)、收集及鑒定

參照Wen等［3］誘導(dǎo)培養(yǎng)外周血來(lái)源DCs的方法并加以改進(jìn)。取10例健康人抗凝外周血40ml，密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞；用RPMI1640洗滌并重懸PBMNC，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106/ml，加于6孔培養(yǎng)板中，每孔2ml，放置于37℃、5%CO2，相對(duì)濕度95%培養(yǎng)箱中孵育2小時(shí)后，收集非貼壁細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞。取少量細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞含量，其余細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng),分別加入AIMV無(wú)血清培養(yǎng)液和含20%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液，兩種培養(yǎng)液中均加入rhGMCSF100ng/ml、rhIL450ng/ml，放置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育，每3天半量換液并補(bǔ)充細(xì)胞因子，6天后收集懸浮和吹吸下來(lái)的輕微黏附細(xì)胞即為不成熟DC。取部分細(xì)胞做細(xì)胞表型檢測(cè)，在部分細(xì)胞培養(yǎng)孔中加入TNFα10ng/ml誘導(dǎo)DC成熟，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后收集細(xì)胞做表型檢測(cè)。

U266細(xì)胞全抗原的制備

將-80℃保存的U266細(xì)胞解凍后傳代培養(yǎng)，取增殖旺盛的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞在液氮中反復(fù)凍融6次，此時(shí)經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后顯微鏡觀察細(xì)胞裂解率可達(dá)99%，然后600×g離心10分鐘，上清液經(jīng)孔徑μm的濾過(guò)膜除菌后即為U266細(xì)胞裂解物，此裂解物含有U266細(xì)胞的全抗原。

U266細(xì)胞裂解液致敏對(duì)DC的致敏

DC培養(yǎng)至第6天，部分培養(yǎng)孔中加入100μlU266細(xì)胞裂解液和TNFα10ng/ml，放置于37℃、5%、相對(duì)濕度95%、CO2培養(yǎng)箱中孵育，使DC負(fù)載U266細(xì)胞全抗原。48小時(shí)后用PBS輕輕沖洗，收集懸浮細(xì)胞，即為U266細(xì)胞裂解液致敏的DC。

效應(yīng)細(xì)胞的增殖

復(fù)蘇凍存的效應(yīng)細(xì)胞，用臺(tái)盼藍(lán)染色判斷細(xì)胞活性，活細(xì)胞拒染，用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整效應(yīng)細(xì)胞濃度為2×106/ml，置于96孔板中，50μl／well，按照不同的刺激物分為3組，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。參考文獻(xiàn)［4］，第1組加入IL2；第2組加入IL2和U266細(xì)胞裂解液致敏的DC，第3組加入IL2和成熟DC，放置于37℃、5%、相對(duì)濕度95%、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天后，收集細(xì)胞并計(jì)數(shù)，以此細(xì)胞作為活化的效應(yīng)細(xì)胞。

T細(xì)胞殺傷活性測(cè)定

以U266細(xì)胞為靶細(xì)胞，傳代培養(yǎng)，取生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。按照5∶1、10∶1、20∶1的效靶比，在效應(yīng)細(xì)胞孔內(nèi)分別加入相應(yīng)量的靶細(xì)胞。另設(shè)置靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞對(duì)照孔，每孔設(shè)3個(gè)復(fù)孔，所有孔的液體總量相同，不足的以RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育4-6小時(shí)，加入MTT溶液10μl/well，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。加入MTT助溶劑DMSO100μl/well，充分溶解，靜置5分鐘。酶標(biāo)儀以波長(zhǎng)490nm測(cè)OD值，以3孔均數(shù)值表示。按公式計(jì)算T淋巴細(xì)胞殺傷率。

殺傷率=［靶對(duì)照組OD－／靶對(duì)照組OD］×100%。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以(±SD）表示，應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

樹(shù)突狀細(xì)胞的表型分析

健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞在含有rhGMCSF、rhIL4的AIMV無(wú)血清培養(yǎng)液和含有20%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，第3天均可以觀察到部分細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)，并形成集落，呈圓形或類圓形，可見(jiàn)毛刺狀突起，但大部分細(xì)胞仍貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞周邊有不規(guī)則突起；6天后加入TNFα，有更多的細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。流式細(xì)胞儀分析兩組培養(yǎng)液培養(yǎng)的DC表型，未加入TNFα之前,DC表達(dá)CD1α、CD80、CD86、HLADR，不表達(dá)CD14、CD83，符合不成熟DC的特點(diǎn)，并且兩組培養(yǎng)液培養(yǎng)的imDC在細(xì)胞免疫表型表達(dá)上無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

加入TNFα48小時(shí)后，流式細(xì)胞儀分析兩組培養(yǎng)液培養(yǎng)的DC表型，結(jié)果DC表達(dá)CD1α、CD80、CD86、CD83，不表達(dá)CD14、HLADR，符合成熟DC的特點(diǎn)，并且兩組培養(yǎng)液培養(yǎng)的成熟DC在細(xì)胞免疫表型表達(dá)上無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

T細(xì)胞的殺傷活性

以非貼壁細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞比例約為24%。T細(xì)胞殺傷活性測(cè)定中，效應(yīng)細(xì)胞分別為IL2活化的T細(xì)胞和IL2＋U266細(xì)胞全抗原致敏DC活化的T細(xì)胞，IL2＋未經(jīng)U266細(xì)胞全抗原致敏DC活化的T細(xì)胞，按照5∶1、10∶1、20∶1的比例與U266細(xì)胞混合培養(yǎng)，MTT法測(cè)定OD值,根據(jù)公式計(jì)算1、2、3各組不同效靶比時(shí)T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞的平均殺傷率，結(jié)果見(jiàn)表3。從表3中可以看出，與IL2活化的T細(xì)胞相比，IL2＋U266DC活化的T細(xì)胞和IL2＋成熟DC活化的T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞的殺傷作用更明顯(P=），并且殺傷率隨著效靶比的增大而增大，E∶T=20∶1時(shí)T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞的殺傷作用最大；與IL2＋成熟DC活化的T細(xì)胞相比，IL2＋U266DC活化的T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞的殺傷作用更明顯(P=)。

Table3.KillingeffectofactivatedTcellsonU266cellsdetectedbyMTT

GroupE∶T=5∶1E∶T=10∶1E∶T=20∶1±±±±±±±±±

Group1:TcellsactivatedbyIL2；group2:TcellsactivatedbyIL2+U266DC；group3:TcellsactivatedbyIL2+DC；E：effectcell；T：targetcell.

討論

DC是已知功能最強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞(APC)，存在于除腦組織外的所有組織器官中，與B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、活化的T淋巴細(xì)胞等其它APC不同的是，DC是唯一能刺激初始T淋巴細(xì)胞增殖的APC，是機(jī)體免疫反應(yīng)的始動(dòng)者。樹(shù)突狀細(xì)胞受抗原性物質(zhì)刺激后能夠分泌多種細(xì)胞因子，誘導(dǎo)特異的免疫反應(yīng)。對(duì)于外源性抗原如細(xì)菌、真菌和胞外寄生蟲(chóng)等，DC通過(guò)MHCⅡ類分子途徑激活初始CD4+T細(xì)胞。對(duì)于內(nèi)源性抗原如病毒包膜蛋白、胞內(nèi)寄生菌等在DC細(xì)胞中內(nèi)源合成的蛋白質(zhì)，是通過(guò)MHCⅠ類分子途徑被CD8+T細(xì)胞的TCR識(shí)別，刺激產(chǎn)生CTL。DC還能通過(guò)自身分泌或誘導(dǎo)其它細(xì)胞分泌IL12而啟動(dòng)CD4+相關(guān)免疫應(yīng)答，活化的Th細(xì)胞可通過(guò)產(chǎn)生IFNγ、GMCSF和TNFα等細(xì)胞因子正反饋上調(diào)DC分泌IL12和共刺激分子。DC也能直接向CD8+CTL呈遞抗原，CD4+和CD8+T細(xì)胞通過(guò)共同分泌細(xì)胞因子或直接殺傷腫瘤細(xì)胞而產(chǎn)生抗腫瘤反應(yīng)。另外，DC還通過(guò)表達(dá)高水平的多種共刺激分子(如B71/CD80、B72/CD86和CD40)和黏附分子(如ICAM1/CD54、LFA3/CD58)使T細(xì)胞充分激活，產(chǎn)生抗腫瘤反應(yīng)。

DC在體內(nèi)的數(shù)量極少，占人外周血單個(gè)核細(xì)胞的1%以下，直接獲取大量DC較難，因此有必要尋找有效途徑進(jìn)行體外擴(kuò)增。目前，體外擴(kuò)增用的DC主要來(lái)源有：骨髓CD34+干細(xì)胞、外周血CD14+單核細(xì)胞和臍血CD34+干細(xì)胞。骨髓取材較困難，對(duì)患者有一定創(chuàng)傷；臍血盡管來(lái)源豐富，但臍血來(lái)源的DC存在MHC限制性，限制了臨床應(yīng)用；外周血來(lái)源的DC由于采集簡(jiǎn)便、患者痛苦小，已廣泛應(yīng)用于臨床。適當(dāng)?shù)募?xì)胞因子配伍和應(yīng)用順序?qū)C的誘導(dǎo)培養(yǎng)影響很大。常用的細(xì)胞因子為GMCSF、IL4和TNFα。GMCSF可以調(diào)控CD34+細(xì)胞向粒系分化并產(chǎn)生CFUDC,是維持DC分化發(fā)育最基本的細(xì)胞因子。IL4可以抑制其向巨噬細(xì)胞分化的潛能，并維持DC于未成熟狀態(tài)，從而使其具有較強(qiáng)的負(fù)載并提呈抗原的潛能。TNFα可以促使DC成熟。除此之外，SCF、Flt、IL3、IL1β等都具有提高DC數(shù)量的作用。DC的CD40分子配基能強(qiáng)有力地促進(jìn)DC的增殖和成熟。本研究參照文獻(xiàn)［3］在體外用細(xì)胞因子rhGMCSF、rhIL4誘導(dǎo)擴(kuò)增外周血來(lái)源的DC前體細(xì)胞定向分化為DC并擴(kuò)增，研究表明40ml外周血可收獲×106的DC。

Feuerstein等［5］就體外擴(kuò)增的大量DC如何保存進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以自體血漿+10%DMSO+5%葡萄糖組成的配方可有效的保存疫苗于液氮中至少4個(gè)月，復(fù)蘇后細(xì)胞活力達(dá)85%-100%，凍存的DC的表型及功能與新鮮的DC無(wú)顯著性差異。還有人用40%人AB血清和20%DMSO來(lái)保存DC［6］。國(guó)內(nèi)有學(xué)者采用聚四氟乙烯袋內(nèi)培養(yǎng)DC，用10%DMSO+20%人血白蛋白保存DC疫苗于-80℃或液氮中，1個(gè)月后復(fù)蘇DC細(xì)胞活力達(dá)70%左右，其表型及功能未受明顯影響［7］。表明體外擴(kuò)增后的DC經(jīng)復(fù)蘇后大部分仍有活性。

目前國(guó)內(nèi)培養(yǎng)DC多采用RPMI1640+FBS培養(yǎng)液，應(yīng)用此種含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)的DC在應(yīng)用于臨床時(shí)，由于含有異種血清，重復(fù)接種有可能誘發(fā)異種免疫反應(yīng)，造成不良后果，并且FBS含有大量的細(xì)胞因子和活性成分，容易使培養(yǎng)的DC質(zhì)量不易控制。使用AIMV無(wú)血清培養(yǎng)液則避免了上述問(wèn)題，使體外培養(yǎng)的DC能夠安全的應(yīng)用于臨床。

Reichardt等［2］選取12例大劑量化療或干細(xì)胞移植后3-6個(gè)月的多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血單核細(xì)胞，分別在無(wú)血清和血清條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)DC，發(fā)現(xiàn)二者在誘導(dǎo)特異性T細(xì)胞增殖反應(yīng)中的作用是相同的。用無(wú)血清培養(yǎng)的DC負(fù)載Id，以匙孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白為佐劑，10例患者中有2例出現(xiàn)了Id特異性的T細(xì)胞增殖，1例出現(xiàn)了Id特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng)。本研究采用AIMV無(wú)血清培養(yǎng)液培養(yǎng)健康人外周血來(lái)源的DC，與含F(xiàn)BS的培養(yǎng)液相比，培養(yǎng)出的DC在數(shù)量、表型和刺激T細(xì)胞增殖上無(wú)顯著性差異，這為DC的臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。體外分離腫瘤抗原脈沖DC，使其致敏得到DC瘤苗，該瘤苗進(jìn)入體內(nèi)不僅保證腫瘤抗原被有效攝取、呈遞，還可提供攻擊腫瘤細(xì)胞必需的共刺激分子，能夠結(jié)合并殺傷腫瘤細(xì)胞。

體外負(fù)載腫瘤抗原的方式很多，由于特異性的腫瘤抗原易產(chǎn)生免疫耐受或免疫逃避，目前多采取以下幾種方法使DC負(fù)載腫瘤抗原：①腫瘤細(xì)胞與DC融合：將腫瘤細(xì)胞與DC通過(guò)化學(xué)方法(聚乙二醇法)或物理方法(電融合)進(jìn)行融合,可以使DC負(fù)載所有的腫瘤抗原信息；同時(shí)融合細(xì)胞又保留了DC的MHC分子和共刺激分子等表面標(biāo)志。腫瘤DC融合細(xì)胞不但具有DC的抗原呈遞功能,還能表達(dá)內(nèi)源性腫瘤抗原以進(jìn)入MHCⅠ類分子的呈遞途徑。②腫瘤細(xì)胞裂解物負(fù)載DC：通過(guò)反復(fù)凍融法、超聲法破碎腫瘤細(xì)胞，離心過(guò)濾獲取腫瘤細(xì)胞的裂解上清液，加入DC培養(yǎng)液中，可誘導(dǎo)Id特異性的CTL作用。③凋亡腫瘤細(xì)胞負(fù)載DC：未成熟DC可以吞噬凋亡體并攝取加工和提呈腫瘤抗原。多種配體和受體分子參與了DC對(duì)凋亡體的識(shí)別和攝取，其中較為重要的是整合素αvβ和CD36［8］。通過(guò)紫外線或γ射線照射、流感病毒感染以及放線菌素D、絲裂霉素C、神經(jīng)酰胺等處理可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。④腫瘤細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)DC：腫瘤細(xì)胞RNA包含編碼腫瘤細(xì)胞全部抗原，可以利用腫瘤細(xì)胞的RNA轉(zhuǎn)染DC從而誘導(dǎo)腫瘤特異性CTL效應(yīng)。本研究采用了較簡(jiǎn)便的腫瘤細(xì)胞裂解物即骨髓瘤細(xì)胞全抗原來(lái)負(fù)載DC，通過(guò)液氮反復(fù)凍融法制備U266細(xì)胞裂解物，臺(tái)盼藍(lán)染色后顯微鏡觀察細(xì)胞裂解率可達(dá)到99%以上。負(fù)載健康人外周血來(lái)源的DC后與T細(xì)胞共培養(yǎng)，最后將T細(xì)胞與U266細(xì)胞按照效應(yīng)細(xì)胞:靶細(xì)胞5∶1、10∶1、20∶1共同培養(yǎng)，MTT法檢測(cè)T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞的殺傷比率，結(jié)果表明T細(xì)胞殺傷率隨著效靶比的增加而增加；未負(fù)載U266細(xì)胞全抗原的DC活化的T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞也有殺傷作用，但較負(fù)載U266細(xì)胞全抗原的DC活化的T細(xì)胞對(duì)U266細(xì)胞殺傷作用小，可能與非特異性細(xì)胞毒作用有關(guān)。

總之，用健康人外周血誘導(dǎo)擴(kuò)增DC，體外負(fù)載U266細(xì)胞全抗原后可以刺激自體T細(xì)胞增殖并能特異性殺傷U266細(xì)胞。因此，體外培養(yǎng)外周血來(lái)源的DC負(fù)載瘤細(xì)胞全抗原后有望應(yīng)用于臨床以清除微小殘留病。

【參考文獻(xiàn)】

1FieldsRC,ShimizuK,MuleJJ.Murinedentriticcellspulsedwithwholetumorlysatesmediatespotentantitumorimmuneresponsesinvitroandinvivo.ProcNatlAcadSciUSA,1998;95:9482-9487

2ReichardtVL,MilazzoC,BruggerW,etal.Idiotypevaccinationofmultiplemyelomapatientsusingmonocytederiveddendriticcells.Haematologica,2003;88:1139-1149

3WenYJ,MinR,TricotG,etal.TumorlysatespecificcytotoxicTlymphocytesinmult