臨床免疫學(xué)檢驗技術(shù)1PPT課件一、概述免疫學(xué)檢驗是研究免疫學(xué)技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域應(yīng)用的一門學(xué)科。免疫檢驗技術(shù)則重點闡述各類免疫學(xué)技術(shù)的基本原理、方法類型和臨床應(yīng)用。19世紀末相繼建立了凝集試驗、沉淀試驗和補體結(jié)合試驗等三大經(jīng)典血清學(xué)試驗，用于檢測病原微生物的抗原或抗體對傳染病的診斷起到重要作用。2PPT課件一、概述隨著免疫學(xué)理論和實驗技術(shù)的發(fā)展，放射免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、酶免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)、流式細胞免疫分析技術(shù)等免疫標記技術(shù)應(yīng)用于臨床免疫學(xué)檢驗，加快了免疫學(xué)檢驗的自動化、標準化進程，極大地提高了免疫學(xué)檢驗的靈敏度，拓展了免疫學(xué)檢測范圍，從檢測免疫相關(guān)物質(zhì)（抗原、抗體、補體、免疫活性細胞和細胞因子等）到檢測體液中的微量物質(zhì)（激素、酶、血漿微量蛋白、血藥濃度、微量元素等）。3PPT課件一、概述免疫檢驗技術(shù)以其特有的特異性、敏感性和微量、快速、穩(wěn)定等優(yōu)勢被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)。4PPT課件二、免疫檢驗技術(shù)在臨床免疫學(xué)檢驗的應(yīng)用1.傳染病的免疫學(xué)檢查機體被細菌、病毒、支原體、衣原體、螺旋體等微生物感染后，?？稍谘逯谐霈F(xiàn)與病原體相對應(yīng)的特異性抗體，檢測這類抗體有助于明確疾病的診斷（血清學(xué)診斷）。此外，還可以用含有特異性抗體的診斷血清鑒定相應(yīng)的病原體及有關(guān)抗原，為確定傳染的病原提供依據(jù)。5PPT課件二、免疫檢驗技術(shù)在臨床免疫學(xué)檢驗的應(yīng)用2.機體天然免疫的檢測主要是對各種吞噬細胞如中性粒細胞、NK細胞、單核巨噬細胞的功能進行檢測以及檢測在機體組織損傷、局部缺血、急性感染與炎癥反應(yīng)時升高的血漿蛋白，如C反應(yīng)性蛋白，血漿中CRP濃度在急性心肌梗死、創(chuàng)傷、感染、炎癥、外科手術(shù)、腫瘤浸潤時迅速顯著地增高，可達正常水平的2000倍。CRP是引發(fā)心臟病的最強烈的危險因素。6PPT課件二、免疫檢驗技術(shù)在臨床免疫學(xué)檢驗的應(yīng)用3.免疫球蛋白、循環(huán)免疫復(fù)合物和補體的測定包括測定五類免疫球蛋白的含量、血清總補體活性及補體成分的含量和在多種疾病時血清中升高的循環(huán)免疫復(fù)合物。7PPT課件二、免疫檢驗技術(shù)在臨床免疫學(xué)檢驗的應(yīng)用4.細胞免疫相關(guān)指標測定檢測淋巴細胞亞群和淋巴細胞的功能以及白細胞介素—2等多種細胞因子，用于判斷機體細胞免疫功能狀況。8PPT課件二、免疫檢驗技術(shù)在臨床免疫學(xué)檢驗的應(yīng)用5.自身抗體測定機體在發(fā)生自身免疫性疾病時，?？沙霈F(xiàn)各自身抗體，用免疫學(xué)方法檢測這些抗體，可為自身免疫性病的診斷、疾病狀態(tài)判斷和療效監(jiān)測提供依據(jù)。9PPT課件二、免疫檢驗技術(shù)在臨床免疫學(xué)檢驗的應(yīng)用6.腫瘤標志物測定免疫學(xué)方法定性或定量檢測在腫瘤發(fā)生和增殖過程中由腫瘤細胞合成、釋放或機體對腫瘤反應(yīng)產(chǎn)生的一些生化物質(zhì)，對腫瘤的篩查、鑒別診斷、治療后病情監(jiān)測及預(yù)后判斷均有重要意義。10PPT課件三、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linkedimmunosorbent

assay,ELISA）原理：酶聯(lián)免疫吸附試驗是免疫酶技術(shù)固相酶免疫測定的一種技術(shù)，是將待測抗原或抗體先固定于固相載體表面，再用酶標記的抗原或抗體與已被固定的相應(yīng)抗體或抗原發(fā)生特異性反應(yīng)，加入酶底物及色原后呈色，呈色程度用吸光度（A）值表示，所測A值與待測抗體或抗原的水平呈相關(guān)關(guān)系。11PPT課件三、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linkedimmunosorbent

assay,ELISA）此法常用多孔聚苯乙烯反應(yīng)板作為固相載體，讀取結(jié)果需用酶標儀。標記抗原或抗體所用的酶常選擇辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）等，HRP常用的底物有鄰苯二胺（OPD）或四甲基聯(lián)苯胺（TMB），堿性磷酸酶一般采用對硝基苯磷酸酯（P-NPP）作為底物，產(chǎn)物為黃色的對硝基酚，在405nm波長處有最高吸收峰。12PPT課件三、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linkedimmunosorbent

assay,ELISA）根椐方法和步驟不同可分為以下幾種基本反應(yīng)模式。1.間接法是檢測樣本中特異性抗體最常用的方法。將已知特異性抗原包被于固相載體上，加待檢樣本，若其中含特異性抗體則與固相抗原結(jié)合形成抗原—抗體復(fù)合物；洗棄未反應(yīng)的成分，加酶標記抗抗體（一般為酶標記抗人IgG或葡萄球菌A蛋白），使在固相載體上形成抗原—待檢抗體—標記抗體（或SPA）復(fù)合物；洗棄未反應(yīng)的成分，加酶底物，終止反應(yīng)后，在一定波長下用酶標儀測吸光度（A）值判定待測抗體的有無或含量。間接法的優(yōu)點是制備一種酶標記抗抗體（或SPA），只需更換不同的固相抗原，便可檢測多種抗體。如HCV-IgG抗體的檢測13PPT課件三、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linkedimmunosorbent

assay,ELISA）2.夾心法夾心法有雙抗體夾心法（測抗原）和雙抗原夾心法（測抗體），兩者試驗步驟相同，但包被物、酶結(jié)合物和檢測對象不同。雙抗體夾心法用于檢測相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)抗原。先將已知特異性抗體包被于固相載體上，加待測樣本，若其中有相應(yīng)的抗原則與固相抗體特異性結(jié)合；洗板后加入酶標記特異性抗體，使成包被抗體—待測抗原—酶標抗體復(fù)合物；抗原或抗體含量與所測吸光度（A）值呈正相關(guān)。如乙型肝炎HBsAg的檢測、抗HBs的檢測、HBeAg的檢測。14PPT課件三、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linkedimmunosorbent

assay,ELISA）3.競爭法用于檢測待檢樣本中未知抗原或抗體。以測定抗體的競爭法為例，將已知抗體吸附于固相載體，洗滌除去未結(jié)合抗體，；加特異性抗原與包被抗體形成固相抗原抗體復(fù)合物，洗滌除去游離抗原，加標本和酶標抗體，標本中的抗體與酶標抗體競爭結(jié)合固相復(fù)合物中的抗原。標本中的抗體越多，其競爭力越強，與固相抗原結(jié)合的酶標抗體越少，加酶底物顯色，有色產(chǎn)物的多少與酶標抗體量成正比，與被測抗體量成反比。如乙型肝炎總抗HBc的檢測、抗HBe的檢測。15PPT課件三、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linkedimmunosorbent

assay,ELISA）4.捕獲法用于測定特異性IgM類抗體。被檢血清中針對某抗原的特異性IgM和IgG常同時存在，為避免IgG的干擾，一般采用捕獲法來測定IgM。先將已知特異性抗體（如抗人μ鏈）包被于固相載體上，加待測人血清樣本，其中的IgM（IgM分子相對于固相抗μ鏈又是一種抗原）被固相抗μ鏈抗體特異性捕獲，形成IgM-抗IgM復(fù)合物。洗滌除去血清中的其他Ig和雜質(zhì)；加特異性抗原試劑，該抗原只與固相上的特異性IgM結(jié)合。16PPT課件三、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linkedimmunosorbent

assay,ELISA）洗滌除去未結(jié)合的特異性抗原；加入針對特異性抗原的酶標抗體，此酶標抗體只與固相上的特異性抗原結(jié)合。洗滌除去未結(jié)合酶標抗體，加酶底物反應(yīng)，色的多少與標本中特異性IgM的量成正比。如甲肝(抗HAV-IgM)檢測、抗HBc-IgM的檢測。17PPT課件三、酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linkedimmunosorbent

assay,ELISA）5.生物素—親合素ELISA（avidin—biotin—peroxi—dasecomplex，ABC-ELISA）是將生物素（biotin）和親合素(avidin)或鏈霉親合素(streptavidin,SA)引入ELISA的方法。生物素是一種小分子物質(zhì)，經(jīng)活化后可高比度的偶聯(lián)抗體或抗原等大分子。親合素（或鏈霉親合素）與生物素的結(jié)合力極強，一分子親合素可與4個生物素分子結(jié)合。在反應(yīng)系統(tǒng)中引入生物素和酶標記親合素，可將ELISA的反應(yīng)多級放大，顯著提高檢測方法的敏感性。18PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控（一）ELISA檢測室內(nèi)質(zhì)控1．現(xiàn)狀：ELISA法檢測的影響因素多，多為手工操作，很難標準化；未得到實驗室的重視，質(zhì)控品來源有限或價格因素，操作人員意識不夠，有些基層單位不是每天做或者根本沒有做，有的不知從何做起。19PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控2．質(zhì)控品的選擇：除了試劑盒附帶的陰陽性對照以外，實驗室還應(yīng)該選擇至少一個弱陽性質(zhì)控品，接近Cutoff值，S/CO值應(yīng)該為2-4之間（最好是購買商品）。20PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控3．臨界值與弱陽性質(zhì)控血清不同點（1）臨界值血清：實驗結(jié)果處于（陰、陽性）分界點時的樣品中分析物濃度值，低于此值，定性實驗的結(jié)果為陰性，高于此值，定性實驗的結(jié)果為陽性。對于定性實驗來講，臨界值是唯一的醫(yī)學(xué)決定水平，當樣品中被測物濃度處于臨界水平時，定性實驗重復(fù)檢查同一樣品，將產(chǎn)生50%的陽性結(jié)果和50%的陰性結(jié)果。當樣品濃度在臨界值以上增加時，陽性結(jié)果比率增加；而當樣品濃度在臨界值以下減低時，陰性結(jié)果比率增加。21PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控（2）弱陽性質(zhì)控血清：A《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》的弱陽性定為S/CO=2-4；B用陰性混合血清梯度稀釋陽性混合血清，用現(xiàn)用檢測系統(tǒng)進行檢測所能測出陽性結(jié)果的最低濃度。C質(zhì)控品S/CO值-3S≥1的最低濃度水平。22PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控4．測定頻度：每次檢測患者樣本時至少測定一次室內(nèi)質(zhì)控品；ELISA測定每塊板都要測定室內(nèi)質(zhì)控品。5．質(zhì)控圖繪制：定性測定可采用弱陽性質(zhì)控品的S/CO值作質(zhì)控圖。判定規(guī)則為12S（警告限），13S。23PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控（二）標本量少的定量測定項目的質(zhì)控方法是“即刻法”質(zhì)控（Grubs異常值取舍法）（1）對于某些不是每天開展的項目、有效期限較短的試劑盒的項目，用上述方法計算獲得平均數(shù)和標準差有很大的難度。采用Crubbs氏法，只需連續(xù)測定3次，即可對第3次檢驗結(jié)果進行檢驗和控制。具有計算方法如下：24PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控

A.計算出測定結(jié)果（至少3次）的平均值（X）和標準差（S）。

B.計算SI上限值和下限值:SI上限值=(X最大值-X)/SSI下限值=(X-X最小值)/S25PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控C.查表，將SI上限SI下限與SI值表中的數(shù)值進行比較

nn3s

n2snn3s

n2s31.151.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.66

2.3761.941.82152.702.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.5626PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控當SI上限和SI下限值〈n2s時，表示處于控制范圍之內(nèi)，可以繼續(xù)進行測定，并重復(fù)以上計算；當SI上限和SI下限有一值處于n2s和n3s值之間時，說明該值在2s-3s27PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控范圍，處于“警告”狀態(tài)；當SI上限和SI下限值有一值處于>n3s時說明該值在3s范圍以外，屬“失控”。數(shù)字處于“警告”和“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，重新測定該項目質(zhì)控品和病人樣本。舍去的只是失控的這次數(shù)值，其它次測定值仍可繼續(xù)使用。當檢測的數(shù)字超過20次以后，可轉(zhuǎn)入使用常規(guī)的質(zhì)控方法進行質(zhì)控。28PPT課件四、臨床免疫室內(nèi)質(zhì)控（三）其它免疫檢測的質(zhì)控1．定量測定參照臨床化學(xué)的規(guī)則和失控判定（如化學(xué)發(fā)光儀檢測的腫瘤標記物項目）。2．膠體金、膠體硒等試紙條快速檢測可不做室內(nèi)質(zhì)控品的測定。3．凝集試驗：血凝及乳膠凝集試驗的室內(nèi)質(zhì)控品可采用試劑盒帶的陰陽對照。29PPT課件五、ELISA檢測中的注意事項30PPT課件試劑因素:抗原抗體的純度,抗體的親和力、標記物的比活性或免疫活性等均對測定結(jié)果產(chǎn)生直接影響。試劑盒的穩(wěn)定有效期,運輸條件及儲存方式等也均會對結(jié)果產(chǎn)生一定程度影響。ELISA檢測的主要影響因素31PPT課件ELISA檢測的主要影響因素標本因素:內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)干擾。內(nèi)源性物質(zhì)常見的有:類風(fēng)濕因子(RF)、嗜異性抗體(Id)、補體、人抗動物抗體(HAAA)、藥物及其致的代謝產(chǎn)物和交叉反應(yīng)物質(zhì)等等。RF、Id和等的干擾機制相似,均為固相抗體和標記抗體之間的橋聯(lián)抗原,在夾心法中易產(chǎn)生假陽性。32PPT課件ELISA檢測的主要影響因素對于含有內(nèi)源性干擾物的標本可以作以下處理:(1)去除分析用抗體Fc

片段,用F(ab)2替代完整的IgG,可以減少RF、Id和HAAA等對分析結(jié)果的影響;(2)用63℃,10min或56℃,30min熱處理來減少RF和補體等對結(jié)果的影響;(3)用2巰基乙醇加入標本稀釋液中,可使RF降解,用EDTA稀釋標本可緩解補體對結(jié)果的干擾;33PPT課件ELISA檢測的主要影響因素設(shè)備：加樣系統(tǒng)、孵育設(shè)備、洗板機、酶標儀環(huán)境因素：水質(zhì)操作：標本處理、加樣、溫育、洗板、顯色、終止34PPT課件設(shè)備衛(wèi)生行業(yè)標準－乙型肝炎表面抗原酶免疫檢驗方法(WS/T223－2002)酶標儀在450nm和492nm的波長不精密度應(yīng)在≤1%，分別在449nm-451nm和491nm-493nm之間，吸光度（A值）要求可以測到小數(shù)點后兩位；35PPT課件設(shè)備移液系統(tǒng)在100μl和50μl

的移液不精密度應(yīng)≤1%，分別在99-101μl和49.5μl-50.5μl之間；恒溫系統(tǒng)在37℃、43℃的溫度變異應(yīng)成士I℃。36PPT課件RF多為IgM型，也有IgG和IgA型。RF具有與變性IgG產(chǎn)生非特異性結(jié)合的特點，因此在ELISA檢測過程中可能與固相上包被的抗體及酶標抗體結(jié)合，并將這藕連起來產(chǎn)生假陽性結(jié)果。這種情況在利用捕獲法測定IgM型抗體的過程中尤其嚴重。因為捕獲法測定IgM型抗體試劑盒中固相上包被的抗體為抗人μ鏈。內(nèi)源性干擾37PPT課件內(nèi)源性干擾補體:補體經(jīng)典活化途徑從C1q開始,在固相抗體和酶標抗體吸附及結(jié)合過程中,抗體分子可能發(fā)生變構(gòu),從而使Fc段的補體C1q分子結(jié)合點暴露出來,則C1q可將二者連結(jié)起來,造成假陽性。38PPT課件內(nèi)源性干擾可采用RF吸附劑去除RF，63℃10min或56℃30min滅活補體采用抗體的Fab段替代完整的IgG可有效避免RF干擾。39PPT課件溶血：Hb含有的血紅素基團具有類似過氧化物的活性，若標本中Hb濃度過高則可能吸附于固相并于隨后加入的HRP底物反應(yīng)顯色。外源性干擾：40PPT課件外源性干擾：細菌污染：細菌的一些內(nèi)源性酶本身會對用相應(yīng)酶作標記測定方法產(chǎn)生干擾。標本貯存時間過長：標本在2-8℃保存時間過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深甚至假陽性。41PPT課件外源性干擾：標本凝固不全：血液采集后如收集管中促凝劑和抗凝劑，血液一般在半小時后開始凝固。在臨床工作中可能因為趕時間而在血液還未凝固之前就強行離心分離血清，此時分離的“血清”可能殘留有部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中形成纖維蛋白而沉積、吸附在酶標板內(nèi)，而常規(guī)洗板難以完全去除。42PPT課件溶血和非溶血、脂濁與非脂濁兩組樣品A值無統(tǒng)計學(xué)意義。AFP、RF、補體、自身抗體陽性樣品的吸光度值明顯高于對照組吸光度值,具有統(tǒng)計學(xué)意義,這可能是AFP、RF、補體和某些自身抗體能夠與固相一抗,標記二抗Fc

結(jié)合或影響它們的結(jié)合而造成假陽性三種不同的溫育方式均會導(dǎo)致邊緣效應(yīng),中央孔和周圍孔的吸光度有顯著性差異但水浴法溫育比較穩(wěn)定,邊緣效應(yīng)相對較小,孵箱法較大,微波法最為明顯。43PPT課件44PPT課件建議:①使用抗凝血標本,便于標本的離心分離。②不抗凝血液標本過夜之后才檢測,讓血凝塊更好地收縮,讓標本中的非特異性物質(zhì)被充分地包裹,降低非特異性反應(yīng)所致的假陽性率[2]。③標本離心時,加大離心轉(zhuǎn)速,延長離心時間,使紅細胞和纖維蛋白充分沉降,使標本的離心分離更加徹底[3]④標本加樣時避免加入紅細胞和/或纖維蛋白,避免這兩種干擾物質(zhì)對實驗結(jié)果的影響45PPT課件46PPT課件12份HBsAg

陽性血清標本按常規(guī)檢測,加顯色劑后,不加終止劑,在酶標儀上每5min測一次410nmOD值42份HBsAg

陽性血清標本做三排孔檢測,每排分別加酶標記抗體40μl、50μl、60μl,其余按說明書操作并測定OD值。47PPT課件加酶結(jié)合物前放置不同時間得到的抗HBc結(jié)果：隨機檢測44份抗HBc

陰性的血清樣品,加樣后室溫25℃分別放置0、5、10、15、20、30min后加入酶結(jié)合物,其后嚴格按說明書操作。結(jié)果0、5、10、15、20、30min陽性率分別為0、2.3%(1/44)、11.4%(5/44)、15.9%(7/44)、20.5%(9/44)、22.7%(10/44),與加入酶結(jié)合物0min組陽性率相比較:5min組P>0.05,10min組P<0.05,其余各組P均<0.01。不同人員稀釋樣品所得到的抗HBc結(jié)果將5份抗HBc

臨界陰性的血清混合,選擇4名檢驗人員按照各自工作習(xí)慣對混合血清分別稀釋16孔(稀釋比例為1∶30),同時用振蕩器平行稀釋16孔作為標準對照,將所有稀釋樣品隨機加入同一酶標板中。實驗結(jié)果顯示:4名檢驗人員檢測結(jié)果(S/CO的.x±s,A值)和標準對照結(jié)果分別為0.85±0.09、0.96±0.11、1.17±0.11、0.97±0.17、1.31±0.11,兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義48PPT課件方法1：檢測樣本39℃水浴,反應(yīng)孔底部不接觸水面;方法2：37℃水浴,反應(yīng)孔底部2/3浸入水中;方法3：反應(yīng)板置37℃干式孵育箱孵育方法2、3之間無顯著性差異;方法2、3與方法1間的差異有顯著性方法1液面上方的溫度是通過水溫進行調(diào)節(jié)的,所以反應(yīng)板孵育時升溫比較緩慢,達到平衡溫度所需時間也較長。因此采用該方法對檢測的結(jié)果影響較大。方法3孵育時反應(yīng)孔的四周受熱均勻,因此反應(yīng)板達到平衡溫度的時間要短于方法1,且反應(yīng)體系中各種物質(zhì)的作用較為均勻,結(jié)果也比較穩(wěn)定。3種孵育方式均會產(chǎn)生不同程度的邊緣效應(yīng)。其中方法1對結(jié)果的影響最大49PPT課件三種不同的溫育方式均會導(dǎo)致邊緣效應(yīng),中央孔和周圍孔的吸光度有顯著性差異但水浴法溫育比較穩(wěn)定,邊緣效應(yīng)相對較小,孵箱法較大,微波法最為明顯。50PPT課件51PPT課件12份HBsAg

陽性血清標本按常規(guī)檢測,加顯色劑后,不加終止劑,在酶標儀上每5min測一次410nmOD值42份HBsAg

陽性血清標本做三排孔檢測,每排分別加酶標記抗體40μl、50μl、60μl,其余按說明書操作并測定OD值。52PPT課件加終止液后隨著時間的增加,A值逐漸下降。而且濃度越高其A值隨時間下降越快。但弱陽性的HBsAg

質(zhì)控物,其A值并不隨時間增加而變化,在終止反應(yīng)后28min內(nèi)始終處于同一水平；HBsAg、抗HBs、HBeAg

三項結(jié)果陰陽性判斷似乎不受時間的影響,其原因有待進一步研究。但對于競爭法而言,可能會產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果,因此建議在終止反應(yīng)后立即比色。53PPT課件同步稀釋測定法PEG法:酶標二抗試劑中加入4%PEG600振動態(tài)ELISA法:，該方法可將HOOK效應(yīng)發(fā)生的臨界濃度減少兩個稀釋度盡量選擇測定范圍寬的試劑盒；每一批號試劑盒隨樣本做高濃度質(zhì)控(10000ng/ml)：54PPT課件注：計算公式：根據(jù)正態(tài)分布u檢驗單側(cè)99.5%的可信限，u值=2.5855PPT課件上海市臨床實驗室質(zhì)量管理基本內(nèi)容和要求（2009年）:

復(fù)檢范圍的確定按下列公式計算：cutoff值×0.8≤樣品測定值≤cutoff值×3，不得小于此范圍。56PPT課件以(CO-2s)作為陽性低限判斷值,其中s值是以衛(wèi)生部臨檢中心臨界質(zhì)控血清(HBsAg1ng/ml,抗HCV2NCU/ml的RCVK所測得的s值。CO至(CO—2s)的范圍稱為灰區(qū)。理由為:國產(chǎn)試劑盒的CO一般是以陰性對照A值加或乘一個常數(shù)得出,陰性對照是小牛血清而非人血清,A值不超過0105即按0105計算,亦即CO為一不變的常數(shù),這樣就忽視了試劑批間差、板間差和操作誤差;國產(chǎn)試劑的靈敏度普遍不高,如HBsAg進口試劑的靈敏度為0.1～0.21ng/ml而國產(chǎn)試劑為0.5～11ng/ml,一般認為0.11ng/ml即有傳染性。57PPT課件六、酶標儀的使用及維護1．酶標儀的基本原理酶標儀實際上就是一臺變相的專用光電比色計或分光光度計。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進入塑料微孔板中的待測標本，該單色光一部分被標本吸收，另部分則透過標本照射到光電