第三章消毒與滅菌第1頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月基本概念滅菌指殺滅物體表面和內(nèi)部的一切微生物，包括細(xì)菌的芽孢和真菌的孢子。消毒指殺滅物體中的病原微生物，它只要求達(dá)到消除傳染性的目的，而對非病原微生物及芽孢、孢子并不嚴(yán)格要求殺死。用來消毒的化學(xué)藥品稱消毒劑。第2頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月

防腐指抑制物品中微生物繁殖的方法。用來防腐的化學(xué)藥品稱防腐劑，它與消毒劑無嚴(yán)格的界限，同種化學(xué)藥品高濃度時為消毒劑，低濃度時為防腐劑。

無菌是指沒有活微生物的狀態(tài)。防止微生物進入動物機體或其他物體的操作技術(shù)稱無菌操作。第3頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月殺菌--即滅菌。抑菌--即防腐?？咕?-包括防腐和殺菌。

第4頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)物理性滅菌、消毒及抑菌方法第5頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月一、熱力消毒、滅菌法

第6頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月高溫殺菌的機理高溫對微生物有明顯的致死作用，高溫可直接破壞菌體蛋白、核酸及酶系統(tǒng)，導(dǎo)致菌體死亡。高溫滅菌干熱滅菌濕熱滅菌第7頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）干熱滅菌法1、火焰滅菌法用火直接燒死物體中的微生物，是一種最徹底的滅菌法。燒灼接種環(huán)、試管口、瓶口等焚燒動物尸體、污染廢棄物等第8頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月

酒精燈（左）電子火焰滅菌器（右）第9頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月

火焰滅菌轉(zhuǎn)盤（左）無火焰高溫滅菌器（右）第10頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月

滅菌操作第11頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月2、熱空氣滅菌法又稱干烤滅菌，是在干烤箱中用熱空氣滅菌。該法以輻射傳導(dǎo)熱，穿透性差，需用較高溫度及較長時間。主要用于玻璃器皿、瓷器、金屬器械等的滅菌。通常用160～170℃維持2h，能殺死一切微生物及芽孢。第12頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月第13頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月第14頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）濕熱滅菌（消毒）法包括以下5種煮沸高壓蒸汽滅菌法巴氏消毒法間歇滅菌法流通蒸汽滅菌法第15頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月1、煮沸煮沸15～20min可殺死細(xì)菌的繁殖體、真菌和病毒，但殺不死芽孢。此法常用于刀剪、注射器、針頭及橡膠制品的消毒。第16頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月

煮沸消毒盒煮沸消毒器第17頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月2、高壓蒸汽滅菌法即利用高壓蒸汽滅菌器（高壓鍋）滅菌，是應(yīng)用最廣、最有效的滅菌法。用15磅的壓力（溫度為121.3℃）維持15～20min，可殺死一切微生物及芽孢。一切耐高溫的物品均可用此法滅菌。第18頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月

高壓蒸汽滅菌器第19頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月第20頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月3、巴氏消毒法用于液態(tài)食品的一種消毒法，常用于牛奶、啤酒、果酒、葡萄酒和一些飲料。特點:利用盡可能的低溫和短的時間，最大限度的殺死食品中的病原菌和一般雜菌，同時最大限度地保持食品的營養(yǎng)成分和風(fēng)味不發(fā)生改變第21頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月巴氏消毒的三種方法：①低溫維持法62～65℃維持30min②高溫瞬時法71～72℃保持15s③超高溫法132℃保持1～2s第22頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月

巴氏消毒裝置第23頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月二、輻射滅菌法

第24頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）非電離輻射包括：紫外線日光可見光紅外線微波第25頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月1、紫外線波長200～300nm的紫外線具有殺菌作用，其中253～265nm段殺菌力最強。殺菌機理：主要破壞菌體細(xì)胞DNA的構(gòu)型，使DNA分子中間形成胸腺嘧啶二聚體，干擾DNA的復(fù)制，造成菌體的死亡，此外，紫外線也能破壞菌體蛋白和酶。第26頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月缺點：穿透力差，普通玻璃、塵埃等均可阻擋紫外線，所以，紫外線只適合空間及物體表面的消毒，如無菌室、手術(shù)室等空間、墻壁及實驗臺表面的消毒。第27頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）電離輻射包括放射性同位素的射線（α、β、γ射線）、X射線等。小計量可誘發(fā)微生物變易，大計量具有抑菌及殺菌作用。在實際工作中主要是用X、β、γ射線，用于消毒、食品保鮮和微生物育種等方面。第28頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月三、超聲波第29頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月殺菌機理超聲波幾乎對所有的微生物都有殺滅作用，主要是以機械作用和氧化作用破壞菌體細(xì)胞壁、細(xì)胞膜，使內(nèi)容物逸出。用途可用超聲波裂解菌體細(xì)胞，研究菌體的構(gòu)造、化學(xué)組成、核酸、抗原、酶等。也可用超聲波從組織中提取病毒。第30頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月四、濾過除菌第31頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月濾過除菌是通過機械阻留作用除去液體及氣體中的細(xì)菌，所用裝置叫濾器。濾器上含有很多微細(xì)小孔，可使液體及氣體通過，細(xì)菌等大于孔徑的物體不能通過，借以獲得無菌液體及氣體。第32頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月用途主要用于不耐高溫的物體，如血清、毒素、抗毒素、酶、抗生素、維生素、氨基酸及特殊培養(yǎng)基等的除菌。濾器不能除去病毒、霉形體和L型細(xì)菌。第33頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月濾器的種類與型號濾器的種類很多，每種又有許多不同的型號，型號的區(qū)別主要是濾膜孔徑大小不同。除菌濾器孔徑通常為0.2～0.22μm。實驗室常用濾器耐酸玻璃濾器蔡氏濾器微孔濾膜第34頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月

玻璃耐酸濾器第35頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月五、低溫抑菌法

第36頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月低溫抑菌的機理大多數(shù)微生物對低溫抵抗力很強，在低溫條件下微生物的代謝活動降低到最低水平，生長繁殖停止，但仍可長時間保持生命。低溫在微生物學(xué)工作中的用途主要用于保存微生物，如：0～4℃保存細(xì)菌-20℃以下保存病毒第37頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月低溫保存微生物注意事項有少數(shù)細(xì)菌和病毒對低溫特別敏感，如淋球菌、巴氏桿菌在4℃保存比室溫保存死亡更快，皰疹病毒在-20℃保存比4℃死亡更快。反復(fù)凍融容易引起微生物死亡。冷凍保存細(xì)菌時，溫度必須迅速降低，以免菌體內(nèi)的水分形成結(jié)晶冰而損傷細(xì)胞膜。第38頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月冷凍真空干燥法（凍干法）保存微生物及生物制品最好的方法方法：先將要保存的菌種加上保護劑（如甘油、蔗糖、脫脂乳、血清、二甲基亞楓等），裝到安瓿中，在凍干機中迅速冷凍、抽真空、干燥、封口。這樣保存的菌種經(jīng)多年不失去活性。第39頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)化學(xué)消毒滅菌法第40頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月一、化學(xué)消毒劑及防腐劑

消毒劑用于殺滅病原微生物的化學(xué)藥物。防腐劑也稱抑菌劑，是用于抑制微生物生長繁殖的化學(xué)藥物。二者統(tǒng)稱消毒防腐劑第41頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月化學(xué)消毒防腐劑的種類：根據(jù)對菌體的作用分為：使菌體蛋白變性或凝固的，如酚類（高濃度）、醇類、重金屬鹽類（高濃度）、酸堿類、醛類損傷胞漿膜的，如酚類（低濃度）、表面活性劑、醇類等脂溶劑干擾細(xì)菌酶系統(tǒng)和代謝的，如某些氧化劑、重金屬鹽類（低濃度）改變核酸功能的，如染料、烷化劑等第42頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月使用方法化學(xué)消毒劑與防腐劑不僅可殺死病原菌，同時對動物的組織細(xì)胞也有損害作用，所以它只能外用，用于體表、環(huán)境及物體的消毒。浸泡擦拭氣體熏蒸噴霧及噴灑等第43頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月選藥原則在實際工作中應(yīng)根據(jù)用途與消毒劑的特點來選擇藥品、使用方法和濃度。最理想的消毒劑應(yīng)是殺菌力強、價格低、無腐蝕性、能長期保存、對動物無毒性或毒性較小、無殘留或?qū)Νh(huán)境無污染的化學(xué)藥品。第44頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月二、影響消毒劑作用的因素

1、消毒劑的性質(zhì)2、消毒劑的濃度3、作用時間與其他環(huán)境條件4、微生物的種類第45頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月三、化學(xué)治療劑

用于消除動物體內(nèi)病原微生物或其他寄生物的化學(xué)藥品稱化學(xué)治療劑（chemo-therapeuticagent）。如磺胺類藥物、呋喃類藥物和其他抗代謝藥物。這些藥物的作用有較強的選擇性，主要作用于病原微生物，而對機體毒副作用較小，主要用于臨床治療。第46頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)生物因素對微生物的作用第47頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月一、抗生素、細(xì)菌素和植物殺菌素的殺菌作用

第48頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）抗生素（antibiotics）是某些微生物在代謝過程中產(chǎn)生的一類能殺死或抑制另一些微生物的化學(xué)物質(zhì)。其主要來源于放線菌和霉菌，細(xì)菌產(chǎn)生的僅有多粘菌素、桿菌肽等少數(shù)幾種。目前發(fā)現(xiàn)的抗生素有2500多種，但臨床常用的僅幾十種。分為廣譜抗生素和窄譜抗生素?？股乜捎糜谥委熂?xì)菌感染和抑菌。第49頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）細(xì)菌素（bacteriocin）是某些細(xì)菌產(chǎn)生的一類具有殺菌作用的蛋白質(zhì)，只能作用于同種細(xì)菌不同的菌株或與它有親緣關(guān)系的其他細(xì)菌。例如：

大腸菌素作用大腸桿菌其他菌株和與它有親緣關(guān)系的志賀氏菌、沙門氏菌、克雷伯氏菌等。細(xì)菌素目前只用于細(xì)菌的分型和流行病學(xué)調(diào)查，對治療疾病意義不大。第50頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）植物殺菌素（phytocide）是某些植物中存在的殺菌物質(zhì)，如黃連、板藍(lán)根等都含有殺菌物質(zhì)。第51頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月二、噬菌體

第52頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月噬菌體（bacteriophage,phage）是寄生于細(xì)菌、放線菌、霉形體、螺旋體、真菌等其他微生物的一類病毒。在自然界分布及廣，凡是有上述微生物的地方，都有相應(yīng)種類的噬菌體。第53頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月1、噬菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu)噬菌體有四種外形，即蝌蚪形、球形、絲狀和檸檬形。典型的噬菌體呈蝌蚪形，由頭部和尾部組成。頭部由核酸和蛋白質(zhì)衣殼構(gòu)成，呈20面體對稱；尾部主要含蛋白質(zhì)，呈螺旋形，分尾領(lǐng)、尾鞘、尾髓、尾板、尾刺和尾絲幾部分，尾部有的能收縮，有的不能收縮。第54頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月第55頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月2、噬菌體的增殖噬菌體只能在活的敏感菌細(xì)胞內(nèi)增殖，并將菌體細(xì)胞裂解。其寄生生活有嚴(yán)格的菌種及菌型的特異性，即一種噬菌體只能寄生及裂解一種和它相應(yīng)的細(xì)菌，或僅作用于該種細(xì)菌的某一型。噬菌體的增殖分4個階段

吸附—侵入—生物合成—成熟和釋放第56頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月吸附第57頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月侵入第58頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月生物合成（復(fù)制和成熟）第59頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月釋放第60頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月噬菌體生長跡象的觀察：噬菌體可使混濁的細(xì)菌液體培養(yǎng)物變清朗，在固體培養(yǎng)基上可形成噬菌斑。一個噬菌斑由一個噬菌體繁殖而成，不同噬菌體產(chǎn)生的噬菌斑大小、形態(tài)、邊緣和透明度均不同，所以，噬菌斑可用于噬菌體的鑒定、純種分離和計數(shù)。第61頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月3、噬菌體與寄主的關(guān)系有些噬菌體在菌體細(xì)胞增殖后，迅速導(dǎo)致菌體裂解，此種噬菌體稱毒性噬菌體或烈性噬菌體。第62頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月烈性噬菌體的溶解周期第63頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月有些噬菌體感染細(xì)菌后，并不馬上裂解細(xì)菌，而是將其基因整合到細(xì)菌的基因組中，與細(xì)菌的DNA一道復(fù)制，并隨細(xì)菌的分裂而傳給后代，此種噬菌體叫溫和噬菌體，整合到細(xì)菌DNA上的噬菌體基因叫前噬菌體，帶有前噬菌體的細(xì)菌叫溶原性細(xì)菌。溫和噬菌體可能會在某個世代自發(fā)地從菌體DNA上脫離并復(fù)制，引起菌體裂解而釋放出噬菌體。第64頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月溫和噬菌體的增殖第65頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月噬菌體的應(yīng)用由于噬菌體感染具有菌種或菌型的特異性，故可用噬菌體進行細(xì)菌的鑒定和分型、檢測未知細(xì)菌、進行流行病學(xué)調(diào)查。此外，噬菌體也是分子生物學(xué)及基因工程研究的工具。第66頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月第四節(jié)微生物實驗室的生物安全第67頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月一、生物安全的概念和一般要求第68頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）生物安全是指與生物有關(guān)的各種因素對社會、經(jīng)濟、人類健康可能產(chǎn)生的潛在的有害影響。而獸醫(yī)微生物實驗室的生物安全是指在轉(zhuǎn)移、檢查和處理病料、污染材料等過程中，避免污染環(huán)境及對人員造成危害。第69頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月

微生物實驗室的生物安全有三層含義是指防止病原微生物等及其他有害生物或物質(zhì)傳入實驗室（防止實驗室污染）是指防止病原微生物等傳出實驗室（防止散播傳染）是指實驗室人員的自身安全防護（防止自身感染）第70頁，課件共76頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）實驗室生物安全的一般要求安全要點主要包括：1、生物安全的潛在危險在于處理臨床樣本，樣本的氣溶膠往往最容易污染實驗室并造成人員感染。所有送檢樣本都應(yīng)視為有傳染性并做相應(yīng)處理。不允許用嘴吸取液體，應(yīng)采用相