常見自身免疫性疾病的自身抗體檢測

自身抗體（autoantibody）是指抗自身細胞內、細胞表面和細胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗體(譜)

分類:

臟器特異性自身抗體

臟器非特異性自身抗體1精選課件自身免疫性疾病的重要標志高滴度存在于自身免疫性疾病患者與疾病的活動性相關參與免疫病理性損傷一、自身抗體的特性2精選課件自身抗體免疫球蛋白補體淋巴細胞細胞因子自身免疫性疾病的主要實驗檢測3精選課件

1948年Haragraves等發(fā)現(xiàn)LE細胞現(xiàn)象

1957年Holborow等應用IIF檢測ANA1961年Beck等發(fā)現(xiàn)ANA不同熒光染色模型

60–70年代IIF、ID、CIE應用新的自身抗體

1979年Towbin等應用免疫印跡技術檢測自身抗體

80年代IB、RIP應用蛋白多肽水平認識自身抗原

1987年DNA基因重組技術開始應用自身抗體研究近十年應用分子生物學技術自身抗體研究發(fā)展簡史4精選課件抗核抗體（ANA）抗可提取性核抗原抗體（ENA）抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）類風濕因子（RF）抗角蛋白抗體（AKA）抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）抗心磷脂抗體（ACLA）常檢測的自身抗體5精選課件標志抗體相關疾病dsDNASLESmSLESSBSS著絲點抗體PSS（局限型）Scl-70抗體PSS（彌漫型）AKA、抗CCP抗體RAJo-1抗體PM/DM（進行性系統(tǒng)性硬皮?。└叩味萊NP抗體MCTD肝腎微粒體抗體（LKM-1）Ⅱ型自身免疫性肝炎平滑肌抗體（SMA）Ⅰ型自身免疫性肝炎AMA（M2）PBC常見自身免疫性疾病的標志抗體6精選課件間接免疫熒光法（IIF）ELISA免疫印跡法（Western-blot）酶免疫斑點法檢測自身抗體常用的方法7精選課件

抗核抗體::以真核細胞（如HEp-2細胞、肝細胞）的各種細胞核成分為靶抗原所檢測的自身抗體的總稱。二、抗核抗體的檢測與應用8精選課件抗核抗體譜9精選課件以首先檢出該抗體的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗體等；以相關疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗體等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗體、抗線粒體抗體、抗核膜抗體、抗細胞漿抗體等；以抗原的化學名稱分類命名，如抗DNA、抗RNP、抗組蛋白抗體,抗核小體抗體等?？购丝贵w譜的分類和命名10精選課件間接免疫熒光法（indirectimmunofluorescence,IIF）酶免疫斑點法ELISA免疫印跡法

（Western-blot）

抗核抗體檢測方法11精選課件間接免疫熒光法示意圖HEp-2細胞肝組織切片熒光標記抗體病人血清（待檢抗體）12精選課件

細胞核細胞漿細胞骨架細胞周期

均質型核糖體型肌蛋白型中心體型斑點型線粒體型波形纖維蛋白型紡綞體型核仁型高爾基體型細胞角蛋白型紡綞絲型著絲點型溶酶體型原肌球蛋白型中間體型周邊型顆粒型紐帶蛋白型PCNA型核點型(dots)IIF檢測ANA熒光染色模型13精選課件斑點型（nRNP/Sm）

高滴度的抗U1-nRNP為MCTD的特征?？筍m抗體對SLE具有高度特異性。斑點型（SSA/SSB）抗SSA最常出現(xiàn)于SS及新生兒紅斑狼瘡（100%）?？筍SB抗體幾乎僅見于女性，可出現(xiàn)于SS和SLE。14精選課件均質型

抗dsDNA抗體抗組蛋白抗體(histone)抗ssDNA抗體抗核小體抗體(nucleosome)15精選課件周邊型

可見于膠原病、PBC、CAH等患者

16精選課件核點型（DOTS）

見于SLE、SS、PBC、風濕病

抗著絲點型

PSS局限型標志抗體17精選課件抗原纖維蛋白型

僅見于5%～10%的PSS，男性高于女性

抗RNA多聚酶Ⅰ型抗體

僅見于硬皮病患者，陽性率為4%18精選課件抗PM-Scl（PM-1）抗體

見于重疊綜合征（多發(fā)性肌炎PM/皮肌炎DM/彌漫性PSS）

19精選課件抗Scl-70型

PSS彌漫型的標志抗體20精選課件增殖細胞核抗原Ⅰ型（PCNA）

SLE特異性抗體，與發(fā)生彌漫性增殖性腎小球腎炎相關21精選課件抗核糖體P蛋白（rib-P）抗體抗線粒體抗體（AMA）SLE標志抗體原發(fā)性膽汁性肝硬化標志抗體22精選課件抗Jo-1抗體抗高爾基體抗體多發(fā)性肌炎（PM）標志抗體偶見于SLE和SS23精選課件抗肌動蛋白抗體見于自身免疫性慢性活動型肝炎

24精選課件抗雙鏈DNA抗體

抗dsDNA抗體與細胞核DNA（外圍區(qū)）脫氧核糖磷酸框架結合。

抗dsDNA抗體是SLE患者的特征性標志抗體。其抗體滴度與疾病的活動程度有相關性，抗體滴度的動態(tài)測定為監(jiān)控治療提供了有效的實驗室手段?？闺p鏈DNA抗體25精選課件檢測方法及應用間接免疫熒光檢測，是目前國內外臨床常規(guī)檢測抗dsDNA抗體最常用的方法。抗dsDNA抗體診斷SLE的特異性可達95%～100%，但其敏感性僅為30%～50%，因此抗dsDNA抗體陰性不能排除SLE的診斷。檢測方法及應用26精選課件

抗dsDNA抗體SLE特異性抗體，與病情活動度相關。27精選課件抗核小體抗體

核小體（nucleosome）是真核生物細胞核染色質的基本單位。凋亡細胞是核小體的重要來源，當SLE患者的吞噬細胞對凋亡細胞的清除能力受損或降低，導致核小體在患者體內大量存積，激活B細胞產生抗核小體抗體（Antinucleosomeantibody,AnuA）。

28精選課件檢測及應用AnuA的檢測通常采用ELISA檢測法。AnuA具有同抗ds-DNA抗體相同的診斷特異性，可達到95%，在系統(tǒng)性硬化（SSc）病中可有20%～50%低濃度陽性率，其他自身免疫性疾病中該抗體均為陰性。AnuA的表達與SLE病情活動分數(shù)相關。檢測及應用29精選課件

抗ENA抗體譜:可提取核抗原抗體的總稱

臨床常檢測的抗ENA抗體譜主要包括：

抗Sm抗U1-RNP抗SSA抗SSB抗Jo-1抗Scl-70抗rib-P蛋白三、抗ENA抗體譜的檢測與應用30精選課件抗可提取性核抗原（ENA）抗體31精選課件

雙向免疫擴散（ID）對流免疫電泳（CIE）免疫印跡法（Western-blot）

ELISA酶免疫斑點法ENA檢測方法32精選課件免疫印跡法

SDS電泳轉移電泳酶免疫檢測免疫印跡法33精選課件34精選課件抗可提取性核抗原（ENA）抗體抗Sm抗體：SLE標記性抗體（20%~30%）抗nRNP抗體：MCTD95%~100%（高滴度）抗SSA抗體：PSS60%~75%，其它CTD抗SSB抗體：

PSS10%~40%，其它CTD抗Scl-70抗體：SSc25%~75%,標記性抗體抗Jo-1抗體：PM/DM25%，標記性抗體抗rRNP抗體：

SLE特異性抗體（10%~30%）35精選課件抗中性粒細胞胞漿抗體（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）是一組以人中性粒細胞胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關的自身抗體，對系統(tǒng)性血管炎、炎癥性腸病等疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義。

四、與小血管炎相關的自身抗體檢測與應用36精選課件

熒光染色型

靶抗原

胞漿型(cANCA)

蛋白酶3（PR3）殺菌/通透性增高蛋白（BPI）

核周型(pANCA)髓過氧化物酶（MPO）組織蛋白酶G（Cath-G）乳鐵蛋白（LF）白細胞彈性蛋白酶（HLE）

非典型型(aANCA)兼有兩種特性ANCA熒光染色型與靶抗原37精選課件周邊型抗中性粒細胞胞漿抗體（pANCA）主要見于炎癥性腸?。冃越Y腸炎和克羅恩?。?8精選課件胞漿型抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)主要見于Wegener’s肉芽腫及微小多動脈炎39精選課件

ANCA臨床應用

髓過氧化物酶（MPO）與顯微鏡下多血管炎、壞死性新月體型腎小球腎炎、過敏性肉芽腫性血管炎相關殺菌/通透性增高蛋白（BPI）主要見于肺部炎癥性疾病并與長期慢性綠膿桿菌感染有一定關系

蛋白酶3（PR3）與Wegener’s肉芽腫（WG）密切相關。僅cANCA診斷WG的特異性大于90%，聯(lián)合PR3可超過95%，活動期幾乎100%陽性。

組織蛋白酶G(Cath-G)白細胞彈性蛋白酶(HLE)乳鐵蛋白(LF)可見于SLE、IBD、PBC、PSC等40精選課件RA早期診斷相關自身抗體

抗角質層蛋白抗體（AKA）：1979年Young等報告靶抗原：filaggrin（40KD）抗核周因子（APF):1964年Nienhuis等報告靶抗原：profilaggrin（37-41KD）及其降解產物抗聚角蛋白微絲蛋白抗體（AFA）：1993年Simon等報告靶抗原：filaggrin（40KD）抗Sa抗體：1994年Despres等報告靶抗原:50/55KD非?；嚯模肟乖?瓜氨酸抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）：1998Schellekens五、與RA相關自身抗體的檢測與應用41精選課件

類風濕因子（rheumatoidfactor,RF）為抗變性IgGFc的自身抗體，主要是IgM型

致病機理：RF與體內變性IgG結合形成免疫復合物，激活補體或被吞噬細胞吞噬，產生炎性介質導致組織炎性損傷，使患者發(fā)生骨關節(jié)炎及血管炎。42精選課件1.膠乳顆粒凝集實驗定性、半定量，敏感性和特異性不高，測定IgM-RF

2.速率散射比濁法（ARRAY、IMAGE）定量、準確、快速，測定IgM-RF

3.ELISA定量、準確，可測定不同類型的RF檢測方法43精選課件

（1）RF在RA、SLE、PSS等多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出。疾病陽性率（%）RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25臨床應用44精選課件（2）RF滴度與RA患者臨床表現(xiàn)呈正相關，

IgM-RF效價>80IU/ml并伴有嚴重關節(jié)功能障礙時通常提示患者預后不良。

（3）IgG-RF與RA患者的滑膜炎、血管炎和關節(jié)

癥狀密切相關，常伴隨IgM-RF同時出現(xiàn)，在正常人及非RA患者中很難檢出。

（4）IgA-RF與RA患者關節(jié)癥狀的嚴重程度及骨質破壞有顯著相關性。45精選課件AKA主要見于RA，陽性率36%~59%，特異性95%~99%，其出現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn)；高滴度可預示較嚴重的RA類型?？菇堑鞍卓贵w（AKA）46精選課件常用方法：ELISA臨床意義：RA特異性自身抗體，敏感性65%~85%，特異性為94%~98%；高濃度抗CCP抗體是RA發(fā)生關節(jié)侵蝕的危險因子之一，定量檢測有助于判斷預后?？弓h(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）47精選課件自身免疫性肝病是與自身免疫密切相關的特殊類型的肝病，其診斷和治療完全不同于一般的慢性病毒性肝炎

自身免疫性肝炎(AIH)

原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)

原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)

重疊綜合征六、與自身免疫性肝病相關自身抗體的檢測與應用48精選課件

在多種累及肝膽疾患的自身免疫疾病中，自身抗體在發(fā)病機制中起重要作用自身免疫性肝病具有相對特異性自身抗體譜自身抗體檢測對自身免疫性肝病的診斷及鑒別診斷具有重要意義自身免疫性肝病與自身抗體49精選課件自身免疫性肝病及其自身抗體譜疾病類型相關自身抗體

自身免疫性肝炎（AIH）

Ⅰ型AIHANA/ASMAⅡ型AIHanti-LKM-1anti-LC-1Ⅲ型AIHanti-SLA(可溶性肝抗原)

原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）

AMA(M2/M4/M8/M9)anti-gp210，sp100ACA

原發(fā)性硬化性膽管炎（PSC）pANCA

自身免疫性肝病及其自身抗體譜50精選課件

抗甲狀腺球蛋白抗體(TGAb)

抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb

）抗促甲狀腺素受體抗體（TSH-RAb）七、與橋本甲狀腺炎相關自身抗體的檢測與應用51精選課件重癥肌無力（MG）自身抗體譜：

抗骨胳肌抗體（ASA）、抗乙酰膽堿受體(AchR)抗體多發(fā)性硬化（MS）自身抗體譜：

抗髓鞘堿性蛋白（MBP）抗體、抗腦苷脂抗體、抗神經(jīng)結苷脂抗體急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)?。ǜ窳吱D巴利綜合征）自身抗體譜：抗髓鞘糖脂抗體、抗髓鞘硫脂抗體

八、與神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性相關自身抗體的檢測與應用52精選課件

大多數(shù)自身免疫患者血清中可測到高效價的自身抗體，特別是有些自身抗體的檢測已納入某些自身免疫性疾病的診斷標準中，自身抗體檢測已是臨床免疫檢測的一項重要的實驗室指標。第五節(jié)自身抗體檢測的臨床應用53精選課件

篩查性試驗與確診性試驗項目的合理組合選擇相關的自身抗體檢測項目切忌盲目的全面檢測實驗中應同步設置陽性和陰性對照一、自身抗體檢測的一般原則54精選課件

95%～99%可排除SLE

（－）SLE治療緩解病情特重（大量IC沉積消耗抗體）（＋）低滴度常見于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可作為診斷SLE的依據(jù)ENA抗體譜檢測（－）不能排除抗dsDNA、Sm、rib抗體（＋）可幫助診斷ANA初篩二、實驗室方法的選擇及結果的確認55精選課件自身免疫性疾病ANA陽性率（%）SLE80~100MCTD95~100RA20~40PSS85~95PM/DM30~50SS70~80潰瘍性結腸炎26慢性活動性肝炎30~40其它風濕病20~50ANA在自身免疫性疾病中的檢出率

56精選課件第六節(jié)自身免疫性疾病的相關實驗檢測在自身免疫病患者體內，因有多種自身抗原的存在，自身抗體的種類也可有交叉重疊現(xiàn)象，故實驗中檢測出多種自身抗體陽性時還必須結合臨床癥狀進行綜合分析。57精選課件自身抗體↑→免疫球蛋白↑II型及III型自身免疫病消耗補體↑→補體↓→監(jiān)測病情一、免疫球蛋白及

補體檢測及臨床意義58精選課件淋巴細胞數(shù)量及功能→反應患者體內免疫細胞狀態(tài)二、淋巴細胞檢測及臨床意義59精選課件細胞因子介導和調節(jié)免疫應答