野薔薇根中熊果酸的提取工藝研究努爾皮達(dá)?阿卜拉江，其買古麗?阿沙木，迪麗努爾?馬里克基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(21165018)項(xiàng)目資助作者簡(jiǎn)介：努爾皮達(dá)，女，(維吾爾族)碩士研究生，主要從事天然產(chǎn)物的研究。聯(lián)系作者：迪麗努爾.馬里克(1964-)，女，教授，主要從事天然產(chǎn)物研究。(pkudilnur@)(新疆師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，新疆烏魯木齊840054)摘要：目的：優(yōu)選野薔薇根中熊果酸的超聲提取工藝。方法：使用超聲波提取法，采用L9(34)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，用高效液相色譜法測(cè)定熊果酸的含量，確定最佳提取工藝條件。結(jié)果表明：野薔薇根中熊果酸的提取最佳工藝是超聲功率為600W，超聲頻率為工作5s間歇5s，料液比1：25，提取時(shí)間為30min，各因素的影響依次為超聲波頻率>超聲波功率〉料液比和提取時(shí)間。結(jié)論：超聲輔助提取野薔薇根中熊果酸是一種簡(jiǎn)單、快捷、高效的提取方法。關(guān)鍵詞：野薔薇；熊果酸；超聲提??；HPLC法StudyonextractiontechnologyofUrsolicacidinRosamultifloraThunbNURPIDA-Ablajan，QIMANGUL-Hasan，DILNUR-Malik(Schoolofchemistryandchemicalengineeringxinjiangnormoluniversity，Urumqi830054)Abstract:objective:tooptimizetheultrasonicextractionofUrsolicacidinRosamultifloraThumb.Method:byutilizingtheultrasonicextractionmethodandusingtheorthogonaltestofL9(34),withhigh-performanceliquidchromatography(HPLC)todetermineursolicacidcontentandtheoptimumextractionconditions.Theresultsshowthattheorderofeachfactoraffectingtheextractionwasultrasonicfrequency>ultrasonicpower>ratioofliquidtomaterial>extractingtime,andtheoptimumconditionsofextractingursolicacidfromtherootofwildroseswereasfollows:ultrasonicpower600W,ultrasonicfrequencyofrestingfor5sintheworkingperiodof5s,ratioofliquidtomaterial1:25,extractingtime30min,.Conclusion:theultrasonic-assistedextractingofursolicacidfromtherootofwildrosesisasimple,quickwayofextractionwithhighefficiency.Keywords:Rosamultiflora;ursolicacid;UltrasonicExtraction;HPLCmethod熊果酸(Ursolicacid)，又名烏蘇酸、烏索酸、a-香樹脂醇，是一種弱酸性五環(huán)三萜類化合物［1］。熊果酸純品為白色針狀結(jié)品(乙醇中結(jié)品)，味苦，具有多種生物活性，有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌，降低血糖，抗肝炎⑵等多種生物學(xué)效應(yīng)，熊果酸還具有明顯的抗氧化功能⑶，所以是一種很有開(kāi)發(fā)價(jià)值的植物活性成分，被廣泛地用作醫(yī)藥和化妝品原料，日本等國(guó)家已經(jīng)將其作為天然抗氧化劑應(yīng)用于食品中［3］。新疆野薔薇（Rosaspp）富含多種人體所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)［4-5］,有較大開(kāi)發(fā)利用價(jià)值，現(xiàn)代研究證明，野薔薇中含有熊果酸、齊墩果酸等三萜類化合物6］。本文以野薔薇根為原料，采用近幾年興起的新方法超聲波法提取熊果酸，通過(guò)研究?jī)?yōu)化該方法工藝條件，旨在提高熊果酸產(chǎn)率，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用野薔薇提供參考。材料與方法1.1材料、試劑與儀器野薔薇根：采自阿勒泰縣，粉碎，過(guò)篩，備用。熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110709-200304）；甲醇（色譜純）；超純水；乙醇（分析純）。高效液相色譜儀（安捷倫1200LC，美國(guó)）；色譜柱（安捷倫公司HC-C184.6x150mm，粒徑為5pm）；JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（波新芝生物科技股份有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮儀器有限公司）。1.2試驗(yàn)方法1.2.1超聲波提取樣品液的制備精密稱取野薔薇根粉末2g，按一定料液比，加人不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇，浸泡4h，于不同超聲頻率、不同功率下超聲處理不同時(shí)間，靜置放冷，濾過(guò)，重復(fù)2次，合并濾液，回收溶劑至十，殘?jiān)眉状既芙舛ㄈ苡?0mL容量瓶中，作為測(cè)試樣品。1.2.2熊果酸提取率的測(cè)定方法色譜條件AgilentHC-C18（4.6mmX150mm，粒徑為5pm）色譜柱；流動(dòng)相為甲醇：水=50:50；流速0.5mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm；柱溫室溫；進(jìn)樣量為10pL。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取干燥至恒重的熊果酸對(duì)照品3.3mg，置于5mL容量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，得含熊果酸0.66mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，置4°C冰箱中保存。用母液依次配置濃度為528pg/mL、396pg/mL、264pg/mL、132pg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣10pL，測(cè)定峰面積。以峰面積平均值為縱坐標(biāo)，其對(duì)應(yīng)進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸計(jì)算，得線性方程為：y=39.197x-850.99，相關(guān)系數(shù)（R2=0.9977）。熊果酸濃度在132?528pg/mL，線性關(guān)系良好。

精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取熊果酸對(duì)照品溶液（52叩g/mL）10四L，進(jìn)樣，連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)定熊果酸對(duì)照品峰面積的RSD為1.62%（n=5）,結(jié)果表明儀器精密度良好。加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的野薔薇果皮0.20g,共5份，分別精密加入一定量的熊果酸對(duì)照品，按供試品溶液制各方法制備，采用上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，其平均回收率為101.8%，表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=5）Tab.1Exprimentresultofsampleinjectingrecovery樣品序號(hào)樣品含量/mg加樣量/mg測(cè)得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%10.5210.5281.04198.48%20.5420.5281.05096.21%30.5320.5281.04697.35%97.73%1.02%40.5180.5281.03998.67%50.5250.5281.04297.92%1.2.3樣品測(cè)定取測(cè)試樣品用0.45pm微孔濾膜過(guò)濾，精密吸取10J11，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。重復(fù)進(jìn)樣三次，取均值，根據(jù)回歸方程計(jì)算熊果酸的量。色譜圖見(jiàn)圖2。mAU g150100■SO-25:圖1熊果酸對(duì)照品HPLC色譜圖Fig.1HPLCchromatogramofcomparativeursolicacid

七Fig.2HPLCchromatogramofsampleursolicacid圖2熊果酸樣品HPLC七Fig.2HPLCchromatogramofsampleursolicacid圖2熊果酸樣品HPLC色譜圖上面的圖可以看出這兩個(gè)圖的保留時(shí)間相等分離效率也比較好，說(shuō)明在此條件下熊果酸峰與雜質(zhì)峰能得到較好分離。1.2.4野薔薇根中熊果酸提取工藝優(yōu)化正交實(shí)驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)：根據(jù)已有的資料和實(shí)際情況，選用提取時(shí)間(A)、超聲頻率(B)、超聲功率(C)和料液比(D)作為考查因素，以野薔薇果皮中熊果酸的提取效率為考查指標(biāo)，選用L16(44)正交表，因素水平見(jiàn)表2。表2實(shí)驗(yàn)因素及水平Tab.2Fantorsandlevels水平因素A功率/WB超聲頻率C時(shí)間/minD料液比/g/mL1200工作5s間歇5s101：202400工作6s間歇4s201：253600工作7s間歇3s301：30結(jié)果與分析2.1正交試驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析用HPLC法測(cè)定樣品中熊果酸的含量(以每g野薔薇果皮中含熊果酸mg計(jì))的結(jié)果如下表3。表3L16(44)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Tab.3ResoutsofL16(44)orthogonaltest試驗(yàn)號(hào)超聲功率A頻率B時(shí)間C料液比D提取量mg/g111112.112212221.842313331.657421232.085522311.925623121.731731322.327832131.876933211.749k11.87032.1751.9061.929k21.91371.8811.8921.9667k31.9841.7121.96971.873R0.11370.46270.0780.094由試驗(yàn)結(jié)果并通過(guò)極差R的大小可知,各試驗(yàn)因素對(duì)熊果酸提取率影響的大小次序?yàn)椋築>A>D>C，即對(duì)野薔薇果皮中熊果酸提取影響最大的因素是超聲頻率，超聲功率和料液比影響次之，超聲時(shí)間影響最小。最佳提取工藝條件為：A3B1C3D2，，即超聲功率為600W，超聲頻率為工作5s間歇5s，料液比我1：25，提取時(shí)間為30min。2.3正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果的驗(yàn)證按2.1正交實(shí)驗(yàn)的最佳工藝條件進(jìn)行1.2.1實(shí)驗(yàn)，平行三次，取平均值，得最佳提取條件下熊果酸的提取率為2.426mg/g。結(jié)論野薔薇根中熊果酸的最佳提取工藝參數(shù)：超聲功率為600W，超聲頻率為工作5s間歇5s，料液比我2：25,提取時(shí)間為30min。。在最優(yōu)因素水平組合條件下，熊果酸提取率為2.426mg/g。超聲輔助提取野薔薇果皮中熊果酸主要是利用超聲波的空化作用，即一定頻率的超聲波對(duì)細(xì)胞的破化有助于有效成分的溶出，另外超聲波的次級(jí)效應(yīng)，如機(jī)械振動(dòng)、乳化、擴(kuò)散、擊碎、化學(xué)效應(yīng)等也能加速欲提取成分的擴(kuò)散釋放并充分與溶劑混合，有利于提取。采用高效液相色譜法對(duì)熊果酸的含量進(jìn)行分析，建立了快速，簡(jiǎn)便，靈敏的HPLC測(cè)定方法。分析結(jié)果表明，該方法簡(jiǎn)單快速，高效靈敏，重現(xiàn)性好。[1]孟艷秋，陳瑜，王丹.熊果酸的研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志.2007,16(1):25?27⑵王鵬等.熊果酸在藥用植物中的分布及藥理作用[J].中藥材，2000,29(6)：420BalanehruS，NagarajanB.Protectiveeffectofoleanolicacidandurso-licacidagainstlipidperoxidation.BiochemInt，1991，24(5):981-984.梁頌華，周文革.新疆野薔薇果汁工藝研究.食品與發(fā)酵工業(yè)[J].2008,28(2):84-86杜英華，陳保國(guó),賈洪斌.刺玫果營(yíng)養(yǎng)成分的分析測(cè)定.內(nèi)蒙古石油化工[J].2002,28(4):24-25PangNN,MalikeD,LiuHW.SimultaneousDeterminationofMainBioactiveComponentsinRosamultifloraThunb.andTheirFragmentationStudyby