單元八工業(yè)菌種擴大培養(yǎng)技術

項目二種子質(zhì)量的控制一、影響種子質(zhì)量的因素及控制培養(yǎng)基培養(yǎng)條件種齡接種量1.培養(yǎng)基營養(yǎng)成分適合種子培養(yǎng)的需要選擇有利于孢子發(fā)芽和菌體生長的培養(yǎng)基；營養(yǎng)上要易于被菌體直接吸收和利用；營養(yǎng)成分要適當豐富和完全，氮源和維生素含量要高營養(yǎng)成分要盡可能與發(fā)酵培養(yǎng)基相近。2.培養(yǎng)條件（1）溫度（2）通氣量在種子罐中培養(yǎng)的種子除保證供給易被利用的培養(yǎng)基外，有足夠的通氣量可以提高種子質(zhì)量。3.種齡種齡：是指種子罐中培養(yǎng)的菌絲體開始移入下一級種子罐或發(fā)酵罐時的培養(yǎng)時間。通常種齡是以處于生命力旺盛的對數(shù)生長期，菌體量還未達到最大值時的培養(yǎng)時間較為合適。不同菌種或同一菌種工藝條件不同，種齡是不一樣的，一般需經(jīng)過多種實驗來確定。4.接種量接種量：接入的種子液體積和接種后整個發(fā)酵液體積的比例。二、種子質(zhì)量的控制措施必須保證生產(chǎn)菌種的穩(wěn)定性提供種子培養(yǎng)的適宜環(huán)境條件，保證無雜菌侵入四.種子質(zhì)量的控制措施1.

菌種穩(wěn)定性的檢查少量菌種--無菌生理鹽水--遞增稀釋--平板劃線培養(yǎng)。挑出形態(tài)整齊，孢子豐滿的菌落進行搖瓶試驗，測定其生產(chǎn)能力。

2.無菌檢查種子液平板劃線、斜面培養(yǎng)用肉眼觀察是否有異常菌落、異?，F(xiàn)象及鏡檢是否有雜菌。三、種子質(zhì)量標準1.細胞或菌體單細胞：菌體健壯、菌形一致、均勻整齊有的還要求有一定的排列或形態(tài)2.生化指標

種子液的糖、氮、磷的含量和pH變化。3.產(chǎn)物生成量在抗生素發(fā)酵中，產(chǎn)物生成量是考察種子質(zhì)量的重要指標，因為種子液中產(chǎn)物生成量的多少間接反映種子的生產(chǎn)能力和成熟程度。4.酶活力種子液中某種酶的活力，與目的產(chǎn)物的產(chǎn)量有一定的關聯(lián)。四、種子異常分析

菌種生長速度，過快或過慢菌絲結團菌絲粘壁種子擴大培養(yǎng)舉例例一、谷氨酸生產(chǎn)的種子制備斜面菌種→一級種子培養(yǎng)→二級種子培養(yǎng)→發(fā)酵1、斜面(AS1.299)培養(yǎng)基：蛋白胨1%，牛肉膏1%，氯化鈉0.5

瓊脂2%，pH7.0-7.2培養(yǎng)基特點：有利于菌體的生長，原料比較精細培養(yǎng)條件：32℃，生長18-24小時生長斜面要求：生長良好，所使用斜面連續(xù)傳代不超過3次2.一級種子（搖瓶）培養(yǎng)條件：于1000ml三角瓶中，裝液200-250ml,32℃培養(yǎng)12小時。培養(yǎng)基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米漿2.5%，

K2HPO40.1%培養(yǎng)基特點：有利于菌體的生長，所使用的原料已經(jīng)基本接近于發(fā)酵培養(yǎng)基3.二級種子(種子罐)培養(yǎng)條件：在種子罐中培養(yǎng)（容積為發(fā)酵罐的1%），

32℃培養(yǎng)7-10個小時培養(yǎng)基：和一級種子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，濃度為2.5%培養(yǎng)基的特點：長菌體，更接近于發(fā)酵培養(yǎng)基種子的