DNA的粗提取和鑒定一、提取DNA的方法1．提取生物大分子的基本思路(1)選用一定的

方法分離具有不同物理或化學性質的生物大分子。(2)DNA粗提取方法：利用DNA與

等在物理和化學性質方面的差異，提取DNA，去除其他成分。物理或化學RNA、蛋白質和脂質2．DNA粗提取與鑒定的原理(1)分離原理：DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的

溶液中

不同，利用這一特點，選擇適當?shù)柠}濃度就能使DNA充分

，而使雜質沉淀，或者相反，以達到分離目的。NaCl溶解度溶解(2)提純原理：①DNA不溶于

溶液，但細胞中的某些蛋白質則溶于酒精。②蛋白酶能水解蛋白質，但是對

沒有影響。③大多數(shù)蛋白質不能忍受

℃的高溫，而DNA在80℃以上才會

。④洗滌劑能夠瓦解

，但對DNA沒有影響。(3)鑒定原理：在沸水浴的條件下，DNA遇

會被染成藍色。酒精DNA60～80變性細胞膜二苯胺二、實驗設計1．實驗材料的選取選用

含量相對較高的生物組織。2．破碎細胞(1)動物細胞的破碎——以雞血為例：在雞血細胞中加入一定的

，同時用

后，收集濾液即可。(2)植物細胞的破碎——以洋蔥為例：先將洋蔥切碎，然后加入一定的

和

進行充分攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。DNA蒸餾水玻璃棒攪拌過濾洗滌劑食鹽3．去除濾液中雜質(1)方案一：通過控制

溶液的濃度去除雜質。(2)方案二：直接向濾液中加入

，反應10～15min，嫩肉粉中的

酶能夠分解蛋白質。(3)方案三：將濾液放在

的恒溫水浴箱中保溫10～15min，注意嚴格控制溫度范圍，使

沉淀而

分子還未變性，可以將DNA與蛋白質分離。NaCl嫩肉粉木瓜蛋白60～75℃蛋白質DNA4．DNA的進一步提純利用DNA不溶于

這一原理，可從體積分數(shù)為

中析出較純凈的DNA，此時DNA的狀態(tài)為

。5．DNA的鑒定將絲狀DNA溶解于5mL的物質的量濃度為

溶液中，再加入4mL的

試劑，進行沸水加熱5min，待試管冷卻后，觀察試管中顏色變化，二苯胺要

。冷卻的酒精95%的冷卻酒精白色絲狀物2mol/LNaCl二苯胺現(xiàn)配現(xiàn)用三、操作提示(1)以血液為實驗材料時，每100mL血液中需要加入3g

，防止

。(2)加入洗滌劑后，動作要

，否則容易產生大量的

，不利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免

，導致DNA分子不能形成

。(3)

試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響鑒定的效果。檸檬酸鈉血液凝固輕緩、柔和泡沫加劇DNA分子的斷裂絮狀沉淀二苯胺1．仔細閱讀教材P54[基礎知識]的相關內容，分析圖5－1曲線，歸納并回答下列問題。(1)討論并交流DNA在NaCl溶液中的溶解度具有怎樣的變化規(guī)律？

提示：DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小；當NaCl溶液濃度低于此值時，隨NaCl濃度的升高，DNA溶解度減??；當NaCl濃度高于此值時，隨NaCl濃度的升高，DNA溶解度增大。(2)根據(jù)(1)討論得到的結果，嘗試在下列坐標內構建DNA在NaCl溶液中溶解度曲線模型。

提示：如下圖所示(3)想一想：鑒定DNA除了用二苯胺試劑外，還有什么方法？提示：利用甲基綠染色，呈現(xiàn)綠色。2．讀教材P55[實驗設計]相關內容，歸納并回答下列問題：(1)本實驗選取雞血細胞作實驗材料的原因是什么？

提示：雞血細胞核DNA含量豐富，取材容易；雞血細胞極易吸水漲破。(2)選用植物細胞做實驗材料，能否通過吸水漲破的方法使其釋放出核物質？提示：不能。因為植物細胞含有細胞壁，對細胞膜有支撐作用，不容易吸水漲破。(3)利用雞血細胞提取DNA實驗過程中，兩次用到蒸餾水，其目的相同嗎？提示：不相同。第一次用蒸餾水漲破細胞，提取核物質，第二次用蒸餾水稀釋NaCl溶液析出DNA。(4)利用雞血細胞提取DNA實驗過程中，需進行三次過濾，其目的分別是什么？提示：第一次濾掉核外物質；第二次濾掉核蛋白；第三次濾取DNA。(5)試分析在提取DNA的實驗中，用玻璃棒攪拌時需要沿同一個方向緩慢攪拌的原因。

提示：防止DNA斷裂。3．根據(jù)你的實驗體會，分析討論下列問題：(1)若實驗中提取到的絲狀物不是白色，且利用二苯胺試劑鑒定后不出現(xiàn)藍色，分析其原因。提示：DNA中雜質太多；DNA的含量極低。(2)若出現(xiàn)實驗結果不明顯現(xiàn)象，可能的原因有哪些？提示：①材料中核物質沒有充分釋放出，如研磨不充分或蒸餾水的量不夠。②加入酒精后搖動或攪拌時過猛，DNA被破壞。③二苯胺配制時間過長，最好現(xiàn)配現(xiàn)用，否則二苯胺變成淺藍色，影響鑒定效果。④析出含DNA的黏稠物時，蒸餾水要沿燒杯內壁慢慢地加入，不能一次性快速加入，否則會影響實驗結果。⑤實驗中有多次攪拌，但是其目的及操作方法是不同的，要注意區(qū)分，否則會影響結果。下列關于“DNA粗提取與鑒定實驗”的敘述，正確的是(

)A．洗滌劑能瓦解細胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度B．將DNA絲狀物放入二苯胺試劑中沸水浴后冷卻變藍C．常溫下菜花勻漿中有些酶類會影響DNA的提取D．用玻棒緩慢攪拌濾液會導致DNA獲得量減少[解析]

提取植物細胞中DNA時加入洗滌劑可瓦解植物細胞膜，利于DNA的釋放，但不能增加DNA在NaCl溶液中的溶解度；含DNA的絲狀物應先溶解在物質的量濃度為2mol/L的NaCl溶液中，再加入二苯胺試劑在沸水浴條件下檢測；菜花勻漿中含有DNA水解酶，常溫下其活性較高，可催化DNA水解，從而影響DNA的提?。挥貌０艟徛龜嚢铻V液不會使DNA分子斷裂，則不會導致DNA的獲得量減少。[答案]

CDNA的粗提取與鑒定實驗中有三次過濾：(1)過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細胞液；(2)過濾含黏稠物的0.14mol/L的NaCl溶液；(3)過濾溶解有DNA的2mol/L的NaCl溶液。以上三次過濾分別為了獲得(

)A．含核物質的濾液、紗布上的黏稠物、含DNA的濾液B．含核物質的濾液、濾液中DNA黏稠物、含DNA的濾液C．含核物質的濾液、濾液中DNA黏稠物、紗布上的DNAD．含較純的DNA濾液、紗布上的黏稠物、含DNA的濾液[解析]用蒸餾水稀釋雞血細胞液，使血細胞的細胞膜、核膜破裂，釋放出核物質，此時過濾可得到含核物質的濾液。第二次過濾是因DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小，DNA析出成絲狀黏稠物，經過濾留在紗布上。第三次過濾，是將第二次獲得的黏稠物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，過濾除去雜質獲得含DNA的濾液。[答案]

A實驗中2次加蒸餾