馬立克氏病在雞生產(chǎn)中的應用

馬立克病（md）是一種嚴重的危及養(yǎng)雞業(yè)的疾病。病雞因感染馬立克氏病毒(MDV)后,其淋巴組織細胞惡性增生,發(fā)生多發(fā)性神經(jīng)炎或內(nèi)臟器官惡性腫瘤。雞馬立克氏病腫瘤病變的臨床癥狀和病理變化與由反轉(zhuǎn)錄病毒引起的禽白血病(ALV)和禽網(wǎng)織內(nèi)皮組織增生癥(REV)基本相似:病雞逐漸消瘦、死亡;病雞的肝、脾、肺、腎、腺胃、生殖腺等部位出現(xiàn)乳白色腫瘤節(jié)結(jié),腫瘤密布或零星存在于臟器中,小至肉眼難辨,大至整個臟器形成一個腫瘤。近年來,由于馬立克氏病毒變異、活體排毒、免疫程序不當、衛(wèi)生管理不到位等多種問題的影響,雞群中馬立克氏病免疫失敗以及馬立克氏病與其它疾病混合感染的現(xiàn)象時有發(fā)生,馬立克氏病對于養(yǎng)雞業(yè)的威脅正在逐步增加。1病毒的基因特征馬立克氏病毒又名禽皰疹病毒2型,病毒分子結(jié)構(gòu)和基因組成與單純皰疹病毒非常相似。馬立克氏病毒也具有不同于其它α皰疹病毒的特征。一是馬立克氏病毒有兩種存在形式,即無囊膜的裸體病毒粒子和有囊膜的完全病毒粒子。內(nèi)臟腫瘤組織中的病毒是無囊膜的不完全病毒,是嚴格的細胞結(jié)合性病毒,在外界的存活力很低,離開活體組織和活細胞就很快死亡。羽毛囊上皮細胞中的病毒是有囊膜的完全病毒,是非細胞結(jié)合性病毒,可脫離細胞而存活,能在外界環(huán)境中存活較長時間,在傳播本病方面有極重要作用。二是馬立克氏病毒基因組含有腫瘤基因,可在淋巴細胞中形成潛伏感染,引起淋巴瘤。馬立克氏病毒分為3個血清性:即血清型Ⅰ型、血清型Ⅱ型和血清型Ⅲ型。這3個血清型病毒存在一定的關系,病毒具有相同的結(jié)構(gòu)特征和遺傳特征,病毒間的血清學反應也具有交叉性,具有共性抗原蛋白,具有交叉保護作用。這3個血清型病毒也存在差異,主要是病毒的來源、基因組成和其他生物學特性存在差異。同型抗原和血清之間的反應性要高于異型抗原和血清之間的反應性2馬立克氏病毒的發(fā)病情況馬立克氏病毒野毒株一直在不斷地進行變異。在Marek于1907年首次報道馬立克氏病后的10多年間,馬立克氏病主要表現(xiàn)為由“經(jīng)典MD毒株”引起的多發(fā)性神經(jīng)炎,發(fā)病率和死亡率均較低。1922年美國報道發(fā)生馬立克氏病,死亡率達20%,這一時期的馬立克氏病毒開始表現(xiàn)為內(nèi)臟器官出現(xiàn)淋巴腫瘤。自1950年起,“急性MD毒株”對于養(yǎng)雞業(yè)的危害已經(jīng)比較嚴重,馬立克氏病開始出現(xiàn)暴發(fā),不僅僅是神經(jīng)病變,內(nèi)臟淋巴腫瘤性病變也較多,死亡率超過30%。全球自1970年開始推廣使用疫苗,馬立克氏病得到了控制。1980年,出現(xiàn)馬立克氏病毒變異株。Witter等分離到的幾株馬立克氏病毒變異株可以突破HVT疫苗免疫的雞群,引起較高的發(fā)病率IsabelM.Gimeno認為導致病毒變異的原因至少有三種目前認為,馬立克氏病毒毒力變異不可能源自抗原漂移,主要來自病毒與宿主的相互選擇中發(fā)生突變,所以盡管馬立克氏病毒的毒力發(fā)生了變異,但致病株的血清型并未發(fā)生變化3馬立克氏病疫苗的制備自1970年開始,人們便尋求利用疫苗來控制馬立克氏病,抗馬立克氏病疫苗也隨著馬立克氏病防疫的要求不斷發(fā)展。所開發(fā)的疫苗株有三種血清型:一種是血清型Ⅰ型馬立克氏病毒的弱化疫苗株,代表株有HPRS-16att、CVI988/Rispens、814株等,血清型Ⅰ型馬立克氏病毒疫苗株要求細胞結(jié)合性,其生產(chǎn)、保存、運輸、儲存的造價相對較高。CVI988/Rispens使用的早期曾有致腫瘤風險的疑慮,沒有被廣泛使用,以后通過病毒的細胞傳代,降低了這一風險,開始大量應用。第二種是血清型Ⅱ型馬立克氏病毒,該病毒因?qū)τ陔u無致瘤性,被用于疫苗,其代表株有SB-1、Z4株等。血清型Ⅱ型馬立克氏病毒疫苗株免疫效果較血清Ⅰ型馬立克氏病毒疫苗株效果相對較低,較少單獨使用,主要用于制備多價苗。第三種是血清型Ⅲ型馬立克氏病毒,即HVT,HVT是一種對于雞無致病性的病毒,商品名為FCl26株,對于免疫雞具有較好的免疫保護效果,HVT無細胞結(jié)合性,其生產(chǎn)、保存、運輸、儲存的造價相對較低,使用過程中不存在致腫瘤的風險。HPRS-16att株是第一個廣泛用于抗馬立克氏病的有效疫苗,主要用于1970年初期,能提供一定保護力,但效果不理想,其后就被其它疫苗所取代。美國于1970年采用HVT疫苗取代HPRS-16att株,其效果要優(yōu)于HPRS-16att株。1980年美國發(fā)生HVT疫苗免疫失敗的馬立克氏病,主要由vvMDV型馬立克氏病毒變異引起株。為控制變異株的感染,采用HVT與SB1二價苗給雞群免疫,比單一使用其中任何一種防護力都高。在歐洲,Rispens等于1971年開發(fā)出CVI988/Rispens,首先在荷蘭使用,自1972年起被普遍用到許多歐洲國家及亞洲國家,該毒株對于強毒株具有較好的抵抗作用。在1990年以前,在使用CVI988/Rispens疫苗免疫的雞群中未發(fā)生過馬立克氏病。在1990年,由于病毒變異,野毒株的毒力進一步增強,在采用二價苗(美國)和采用CVI988/Rispens(歐洲、澳洲、南美洲、亞洲)免疫的雞群中,均發(fā)生了由vv+MDV變異株引起的馬立克氏病。美國從那時起采用CVI988/Rispens控制了疫情,而對于已經(jīng)使用了CVI988/Rispens疫苗的國家,則采用三價苗加強免疫,控制了vv+MDV引起的疾病。目前,用這些疫苗株開發(fā)的馬立克氏病疫苗商用產(chǎn)品有單價苗,有二價苗和三價苗。單價苗有由HVT或CVI988/Rispens制備的疫苗,二價疫苗有SB1+HVT、301B/1+HVT、CVI988/Rispens+HVT、Z4+HVT;三價疫苗有CVI988/Rispens+SB1+HVT、814+SB1+HVT等。利用基因工程研制馬立克氏病疫苗也取得一些重要進展。Nazerian等用禽痘病毒為載體構(gòu)建了能表達馬立克氏病毒gB基因的重組體FPV-gB,將重組體FPV-gB接種至SPF雞群可使之獲得抗強毒株的攻擊,但對有母源抗體的商品雞保護力低4馬立克氏病毒的檢測馬立克氏病引起雞發(fā)生腫瘤病變的臨床癥狀和病理變化與禽白血病和禽網(wǎng)織內(nèi)皮組織增生癥基本相似,這幾種腫瘤性疾病目前在臨床均有發(fā)生。馬立克氏病毒可能是單獨感染雞引起發(fā)病,也可能是與禽白血病或禽網(wǎng)織內(nèi)皮組織增生癥病毒混合感染雞引起發(fā)病。僅通過臨床癥狀和病理變化難以將這三種疾病加以區(qū)別。實驗室鑒別診斷方法依賴于病毒分離、特異性抗體的檢測和腫瘤組織的病理學檢查。從感染雞組織中分離到馬立克氏病毒,可證明雞群感染了本病。分離病毒用的材料可以是從肝素抗凝血樣中分離的白細胞,也可以用淋巴瘤細胞或脾細胞懸液。田間分離毒株在送檢過程中需低溫保存,因為馬立克氏病毒具有高度細胞結(jié)合性,所以這些懸液中的細胞必須是活的細胞。也可以用羽尖作為馬立克氏病毒分離材料,但這種方法不常用于診斷,因為免疫過馬立克氏病疫苗的健康雞存在羽髓排毒的可能。應用特異性熒光抗體可以鑒定從病雞分離的馬立克氏病毒,單克隆抗體可用于血清型的鑒別。聚合酶鏈反應(PCR)可以用于鑒別一些致瘤性和非致瘤性馬立克氏病毒,也可以用于鑒定2型和3型疫苗株。PCR也可用來對組織中的馬立克氏病毒進行定量,區(qū)分血液或羽囊中的馬立克氏病毒或HVT。PCR檢測方法一方面克服了鑒別診斷的困難,另一方面使多重病毒感染的檢測成為可能,所以是一種診斷禽腫瘤病毒的首選方法。定量實時PCR現(xiàn)被用于區(qū)分3種馬立克氏病毒血清型和確定不同器官的病毒含量。檢測抗體最常用的方法是瓊脂免疫擴散試驗(AGID),還有熒光抗體試驗和ELISA方法。這些方法具有型特異性,但會受到交叉抗原的干擾,熒光抗體試驗和ELISA方法比AGID試驗更敏感。病毒中和試驗用來檢測血清中和病毒、病毒蝕斑的抗體活性,這種方法適用于科學研究工作,很少用做常規(guī)性診斷。由于馬立克氏病毒無處不在,抗體檢測方法在診斷上的重要性是有限的,但用于鑒別反轉(zhuǎn)錄病毒感染還是一種有效方法。腫瘤的病理組織學檢查對診斷有一定幫助,但有時細胞浸潤特征呈多樣性、不具有病征學特點,結(jié)果判定較難。馬立克氏病腫瘤細胞浸潤呈多形性,含有從小到大的淋巴細胞混合群。典型的馬立克氏病神經(jīng)病變有兩種類型,一是脫髓鞘作用和神經(jīng)鞘瘤細胞增生,二是輕度到中度的漿細胞和小淋巴細胞彌散性增生。禽白血病和禽網(wǎng)織內(nèi)皮組織增生癥所致的腫瘤,浸潤細胞為形態(tài)均一的淋巴母細胞,分別為T或B淋巴細胞。禽網(wǎng)織內(nèi)皮組織增生癥和禽白血病感染在組織學上無法區(qū)別。5建立生物安全體系,防止早期暴露安全防范馬立克氏病,應當通過免疫、衛(wèi)生管理、抗病育種等來實現(xiàn)。免疫接種是防治馬立克氏病的重要措施,要選擇優(yōu)質(zhì)、高效、具有足夠病毒含量、并無其它病原體污染的馬立克氏病疫苗。盡早免疫接種,所有雞均在出殼后盡早接種疫苗,因免疫接種與雛雞接觸野毒的時間間隔越長,免疫效果越好。近年來國外有人對孵化雞胚進行免疫接種,使雞一出殼就具有對馬立克氏病的抵抗力,效果令人滿意衛(wèi)生管理也是防治馬立克氏病的重要措施。在養(yǎng)禽業(yè)密集地區(qū),雞場羽毛屑、飼養(yǎng)器具、工作服、用過的墊料、運料車、人員進出、運雞設備等,都可能是潛在馬立克氏病傳播媒介,使雛雞很早就暴露于環(huán)境中的馬立克氏病原體中,甚至多重感染白血病、雞傳染性貧血、雞新城疫等免疫抑制性疾病。因此加強飼養(yǎng)管理,實行全進全出制,建立生物安全防治體系,嚴格消毒,防止早期暴露,將傳染源杜絕于雞場之外,可以降低疾病的暴發(fā)?？共∮N是防治馬立克氏病的另外一條途徑。不同遺傳品系的雞對馬立克氏病的易感性是不同的,因此,人們期待著培育出抗病的優(yōu)質(zhì)商品雞品系,用于生產(chǎn)。選育抗病品系的方法以前多用后裔測定、攻毒幸存者的繁殖或兩者結(jié)合的方法6免疫有待于進一步改進馬立克氏病一直在世界各國養(yǎng)雞地區(qū)流行,之所以難以防控,原因復雜。病毒在環(huán)境中的廣泛存在是一個主要原因,目前所用的各種疫苗和各種免疫方法盡管對于雞群起到了明顯的免疫保護效果,但這樣的免疫效果均只能保護免疫雞不發(fā)生臨床疾病,不能保護免疫雞免受感染,感染病毒仍可在免疫雞體內(nèi)和羽毛囊內(nèi)復制,并終生向外界排毒;商品肉雞缺乏馬立克氏病免疫也導致病原增加,因為許多商品肉雞出欄時間較短,生產(chǎn)商為節(jié)約成本,既沒有接種馬立克氏病疫苗,也沒有防范馬立克氏病傳染的措施,這樣的肉雞盡管發(fā)生馬立克氏病的病例不多,但卻是馬立克氏病的傳染源和散播病毒的載體。此外,存在于羽毛囊及脫落的皮屑中的成熟的馬立克氏病毒粒子在自然環(huán)境中可以存活較長時間,使病毒通過環(huán)境感染雞群的危險性進一步增加。馬立克氏病的免疫有待于進一步改進。馬立克氏病毒在環(huán)境中的廣泛存在增加了雞群感染的機會,感染免疫健康雞的病毒可以在體內(nèi)長久復制,在雞體內(nèi)復制的病毒長期承受著來自機體的免疫壓力和環(huán)境的選擇壓力,于是,馬立克氏病毒發(fā)生變異。變異的結(jié)果往往是產(chǎn)生毒力更強的毒株,可以突破既有的免疫方法和疫苗株,發(fā)生群體免疫失敗,導致出現(xiàn)更大的經(jīng)濟損失。從已經(jīng)出現(xiàn)的馬立克氏病毒變異株的發(fā)生規(guī)律可以看出,當馬立克氏病野毒株對于相應的免疫方法經(jīng)過大約二十多年的適應后,可能變異成為毒力更強的毒株。根據(jù)這一現(xiàn)象推測,盡管現(xiàn)在采用的三價苗的多重優(yōu)化免疫可以基本控制vv+MDV的野毒株引起的疾病,但再過二十多年以后,則有可能出現(xiàn)毒力超過vv+MDV的變異野毒株,可以突破目前采用的的三價苗多重優(yōu)化免疫保護。為對付不斷變異的毒株,馬立克氏病疫苗也由單價苗逐步發(fā)展為三價苗,其變化的空間幾乎已經(jīng)達到飽和。而到目前為止,對付vv+MDV野毒株的最佳方法就是三價苗的多重優(yōu)化免疫,超過此三價苗免疫效果的疫苗株還沒有被發(fā)現(xiàn)。人們不僅擔心:當下一步出現(xiàn)毒力超過vv+MDV野毒株的變異株、能突破現(xiàn)在看來最佳的三價苗免疫時,是否還有可供選擇的其它免疫方法對其加以控制?馬立克氏病的流行病學研究有待進一步加強。從臨床病理變化判定腫瘤性疾病并不困難,但如果要與其它腫瘤疾病區(qū)分,進一步鑒定是否因馬立克氏病感染引起的腫瘤疾病則并不容易,必須借助流行病學調(diào)查或?qū)嶒炇以\斷。但目前的情況是,可供借鑒的資料和手段不多。當臨床中出現(xiàn)腫瘤性