PCR技術(shù)的基石1953年，Watson和Crick提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)1962年獲諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎1956年，Kornberg闡明了DNA自我復(fù)制的分子機制，并在1957年鑒定了第一個DNA聚合酶1959年獲諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎1968年獲諾貝爾獎的印裔學(xué)者Gobind

Khorana，他指導(dǎo)的博士后Kleppe等人原創(chuàng)性的發(fā)表了后來被稱為PCR技術(shù)性文章Kleppe

K,

Ohtsuka

E,

Dleppe

R,

et

al.

Studies

on

polynucleotides.

XCVI.

Repairreplications

of

short

synthetic

DNA’s

as

catalyzed

by

DNA

polymerases.

J

Mol

Biol.1971;

56(2):

341-361.1969年Gordon

Conference

——Stuart

Linn——Karry

Mullis1977年，Sanger在PNAS上發(fā)表了題為“鏈末端終止DNA測序法”的文章，使用了寡核苷酸引物，DNA聚合酶和能終止反應(yīng)引物延伸的、修飾過的核酸。Sanger

F,

Nicklen

S,

Coulson

AR.

DNA

sequencing

with

chain-terminating

inhibitors.Proc

Natl

Acad

Sci

USA.

1977;

74(12):

5463-5467.1980年，因建立了Sanger核酸測序而獲得諾貝爾獎Mullis開車的時候,瞬間感覺兩排路燈就是DNA的兩條鏈，自己的車和對面開來的車象是DNA聚合酶，面對面地合成著DNA，……才木的文章Saiki

RK,

Scharf

S,

Faloona

F,

Mullis

KB,

Horn

GT,

Erlich

HA,

Arnheim

N.

Enzymaticamplification

of

beta-globin

genomic

sequences

and

restriction

site

analysis

fordiagnosis

of

sickle

cell

anemia.

Science.

1985

Dec

20;

230(4732):

1350-1354.Kary

Mullis的文章Mullis

KB,

Faloona

FA

.

Specific

synthesis

of

DNA

in

vitro

via

a

polymerase-catalyzedchain

reaction.

Methods

Enzymol.

1987;

155:

335-350.阿曼德·費根堡姆全面質(zhì)量管理Mario

PlebaniUniversity-Hospital

of

Padova,

ItalyIFCC教育與管理部（EMD）實驗室差錯與患者安全小組（WG-LEPS）主席Analytical

factorspre-analytical

factorspost-analytical

factorsintra-analytical

factors%

of

total

errors46–68.218.5–47<15序號審核內(nèi)容審核意見符基本符合不符合合但有缺陷暫不需評論與說明要考核標本管理實驗室有各類患者準備、標本采 集、運送、接收（或拒收）、保存或安全處置的具體要求和操作規(guī)程標本運送應(yīng)符合生物安全的要求， 組織標本應(yīng)立刻冷凍并于低溫條件下運送，標本采集、運送、接收全程可跟蹤在接收標本時應(yīng)有其狀態(tài)的詳細記錄6.4

實驗室應(yīng)確定標本是否符合檢測要求，拒收標本原因要明確6.5

標本檢測全過程包括核酸提取、擴增、雜交、保存等都應(yīng)保持標本的唯一編號6.6

實驗室應(yīng)對標本保存條件進行監(jiān)控和記錄綱領(lǐng)文件質(zhì)量手冊程序性文件支持文件第三層次：第四層次：作業(yè)指導(dǎo)書（標準操作規(guī)程）質(zhì)量記錄（表格、記錄本等）證實監(jiān)督文件質(zhì)量體系文件層次圖采集時間采集時間采集類型肝素使DNA抽提得率降低肝素在DNA提取過程中難以去除肝素使PCR擴增效率降低唯一編號 姓名 性別病歷號采集時間接收時間標本類別標本狀態(tài)□男□女月日時月日時□全血□□正常□□男□女月日時月日時□全血□□正?！酢跄小跖氯諘r月日時□全血□□正常□□男□女月日時月日時□全血□□正?！酢跄小跖氯諘r月日時□全血□□正?！跣彰?性別病歷號采集時間接收時間標本類別拒收原因拒收人簽字送檢人簽字□男□女月日時月日時□全血□□正?！酢跄小跖氯諘r月日時□全血□□正?！酢跄小跖氯諘r月日時□全血□□正?！酢跄小跖氯諘r月日時□全血□□正?！酢跄小跖氯諘r月日時□全血□□正?！踅邮諘r間月日時標本類別拒收原因拒收人簽字送檢人簽字姓名 性別病歷號采集時間□男

月日時□女□全血□□正?！鯓吮揪苁赵颍夯颊咝彰虿v號不符標本容器為非不含任何添加劑的真空采血管采血量低于2ml標本采用肝素抗凝容器破損標本采集后送檢時間超時標本重度或中度溶血標本脂血標本類型不正確（10）其它：時間長短根據(jù)報告單上的承諾而定病理樣本處理對DNA提取的影響1．固定劑對DNA的影響固定劑的類型直接影響提取DNA的質(zhì)量中性緩沖甲醛固定的標本，DNA保存完好，可以獲得高分子量DNA。甲醛和戊二醛固定可使得DNA產(chǎn)量降低，醋酸甲醇（MAA）可導(dǎo)致DNA明顯降解。乙醇被認為是保存核酸的最佳固定劑。用AMex方法處理組織，既可保存許多抗原成分，亦可使大分子量DNA完好無損。病理樣本處理對DNA提取的影響固定時間對DNA的影響不同標本對不同固定劑所需的最佳固定時間應(yīng)摸索選定固定溫度對DNA的影響加熱到65℃時，氫鍵開始斷裂；約90℃時，產(chǎn)生兩條單鏈分子。在此變性狀態(tài)下，甲醛與酸反應(yīng)很快，通過羥甲基化作用可抑制DNA冷卻后的再復(fù)性。通過應(yīng)用緩沖