腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法1概迷同一個(gè)標(biāo)志物可以用不同的方法檢測(cè),如可以從血清水平、免疫組化水平檢測(cè)CEA和P-gp等,也可以從細(xì)胞和分子水平用FCM和RT-PCR來(lái)檢測(cè)。概迷2目三血清學(xué)水平◆血清學(xué)水平:除了傳統(tǒng)的放射免疫分析(RIA)和酶聯(lián)免疫分析(ELSA)外?！裟壳霸趪?guó)內(nèi)主要有三類全自動(dòng)免疫化學(xué)分析系統(tǒng)(化學(xué)免疫發(fā)光免疫分析系統(tǒng)、熒光免疫分析系統(tǒng)和電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng))廣泛的應(yīng)用于臨床,對(duì)血清腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)具有快速、準(zhǔn)確、半定量?！艨蓹z測(cè)AFP、CEA、CA19-9、CA72-4、CA125、CA15-3、NSE、Cyfra21-1、PSA、f-PSA等。目三血清學(xué)水平31放射免疫分析(一)◆放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)放射免疫分析自20世紀(jì)60年代問(wèn)世以來(lái),在生物醫(yī)學(xué)各個(gè)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。◆20世紀(jì)90年代,RIA技術(shù)研究的主要進(jìn)展是試管固相法。學(xué)者將試管固相法稱之為第四代RIA1放射免疫分析(一)41放射免疫分析(二)◆固相RIA和免疫放射測(cè)量法(IRMA)的靈敏度、特異性、穩(wěn)定性及測(cè)量范圍均優(yōu)于液相競(jìng)爭(zhēng)法;◆尤其是不需要使用離心機(jī)進(jìn)行分離,簡(jiǎn)化了操作步驟,提高了檢測(cè)的精密度;◆活化試管RIA和IRMA技術(shù)系共價(jià)鍵結(jié)合,包被均,穩(wěn)定性好,實(shí)現(xiàn)了分析技術(shù)一步法,易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化分析。1放射免疫分析(二)52酶免疫分析(一)◆酶免疫分析(enzymeImmunoassay,EIA)由于RIA和IRMA有著自身固有的、難以克服的缺陷,Engva11和Vanweemen各自領(lǐng)導(dǎo)的研究小組分別以酶代替同位素,于1971年創(chuàng)立了酶免疫分析技術(shù)(EIA)。因其標(biāo)記物制備簡(jiǎn)單,有效期長(zhǎng),對(duì)環(huán)境無(wú)污染等特點(diǎn),EIA技術(shù)得到了迅速的普及和發(fā)展?！?0世紀(jì)90年代后期,在EIA中引進(jìn)了放大系統(tǒng),主要是生物素一親和素系統(tǒng)的應(yīng)用,使測(cè)定的靈敏度趕上或超過(guò)了RIA2酶免疫分析(一)62酶免疫分析(二)◆酶聯(lián)免疫熒光測(cè)量法(ELIFA)同時(shí)兼具酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和熒光免疫分析(FIA)兩種方法的優(yōu)點(diǎn),其靈敏度較傳統(tǒng)的ELISA明顯提高,最小檢出值達(dá)10-15mo/L◆增強(qiáng)發(fā)光酶免疫分析法(ELEIA)是20世紀(jì)80年代后期發(fā)展起來(lái)的新型免疫分析技術(shù),其特點(diǎn)是:酶促增強(qiáng)發(fā)光信號(hào),且發(fā)光信號(hào)保持穩(wěn)定,該方法的最小檢出值達(dá)10-20mol/L2酶免疫分析(二)73化學(xué)發(fā)光免疫分析(一)◆化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminesentimmunoassay,CLIA)1981年,Pannnag將化學(xué)發(fā)光原理與免疫反應(yīng)結(jié)合起來(lái)建立了化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)?！暨@種方法雖然靈敏度可以達(dá)到放免的水平,但是影響檢測(cè)結(jié)果的因素較多,穩(wěn)定性較差,而且在發(fā)生化學(xué)反應(yīng)之后,樣品的發(fā)光無(wú)法再現(xiàn)◆使用甲基吖啶酯標(biāo)記抗體更為理想,因不必加催化劑,所以受外界因素的干擾少,且操作簡(jiǎn)單,穩(wěn)定性高,標(biāo)記蛋白后不影響發(fā)光信號(hào)的產(chǎn)生。在這一領(lǐng)域全自動(dòng)測(cè)定儀器的研制發(fā)展很快,極大地提高了該方法的分析效率和普及推廣。3化學(xué)發(fā)光免疫分析(一)83化學(xué)發(fā)光免疫分析(二)◆近年來(lái),免疫電化學(xué)發(fā)光(IECL)技術(shù)正在快速發(fā)展。這一方法具有靈敏、快速、穩(wěn)定、選擇性強(qiáng)重現(xiàn)性好、易于操作、方法靈活多樣的優(yōu)點(diǎn)。它是集電化學(xué)發(fā)光、生物素一抗生物素、免疫分析,并由固相免疫分析發(fā)展起來(lái)的磁微球等技術(shù)于一體是眾多學(xué)科交叉的研究領(lǐng)域?！鬒ECL分析方法多樣,廣泛地應(yīng)用于抗原、半抗原和抗體的免疫檢測(cè),其線性范圍也較寬,符合臨床檢驗(yàn)的需要。IECL技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)在于合成新的發(fā)光標(biāo)記物,優(yōu)化標(biāo)記技術(shù)和免疫分析方法3化學(xué)發(fā)光免疫分析(二)9時(shí)間分辨光免疲分析(一)◆時(shí)間分辨熒光免疫分析(timeresolvedfluorecenceimmunoassay,TRFIA)◆是20世紀(jì)80年代初問(wèn)世的另一種非放射性免疫分析法其主要特點(diǎn)是示蹤物為標(biāo)記稀土元素,如Eu3+、Tb3+或Sm3+。◆TRFIA靈敏度高、應(yīng)用范圍廣,目前已實(shí)現(xiàn)分析技術(shù)完全自動(dòng)化。時(shí)間分辨光免疲分析(一)10腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法光譜腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)課件11腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法光譜腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)課件12腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法光譜腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)課件13腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法光譜腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)課件14腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法光譜腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)課件15腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)方法光譜腫瘤標(biāo)志物檢