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1、紅細(xì)胞裂解液(去除紅細(xì)胞)配制試劑所需材料:AmmoniumChloridex10LysingConcentrateSolutionTOC\o"1-5"\h\zNH4Cl(1.5M) 80gKHCO3(100nM) 10gNa4EDTA(10nM) 3.7gDistilledH2O 1000mL1NHClor1NNaOH(調(diào)節(jié)pH值用)配制步驟:將以上a、b、c試劑溶于900ml去離子水中;調(diào)節(jié)溶液pH值到7.2-7.4,加去離子水定容到1000ml;在制備工作液時(shí),將此儲(chǔ)存液稀釋10倍后使用。保存:1.10x儲(chǔ)存液儲(chǔ)存于2-8°C不能超過半年(六個(gè)月);2.在使用前,工作液每天都應(yīng)該新鮮配制放置于室溫,當(dāng)日用不完的棄掉。2、 ripa裂解液NP-40orTriton-1001%TrisHCl(pH8.0)50mmol/LNaCl150mmol/LPMSF(苯甲基磺酰氟)0.1mmol/L(100pg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制劑)1pmol/L(0.7pg/ml)Leupeptin(亮抑制肽)0.5mg/mlAprotinin(抑蛋白酶肽)0.3pmol/L(1pg/ml)(注:PMSF貯存液:100mmol/L即17.4mg/ml于異丙醇中;Aprotinin貯存液:10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin貯存液:10mg/ml溶于水中;Pepstatin貯存液10mg/ml于甲醇液中.均于-20°C保存)3、 細(xì)胞裂解液(Tris-HCL)1MTris溶液的配置取Tris242.2g,加ddH2O至1600ml,加熱溶解。1MTris-HCLPh=8.0溶液的配置取1MTris溶液160ml用分析純鹽酸調(diào)至Ph=8.0(需濃鹽酸約8.5ml),加ddH2O定容至200ml,高壓滅菌備用。0.5MEDTA溶液的配置稱EDTA-Na237.2g先用140mlddH2O溶解,加入14mlNaOH(10M)使EDTA-Na2溶解,再用NaOH(10M)溶液調(diào)至Ph=8.0,加ddH2O定容至200ml,高壓滅菌備用。細(xì)胞裂解液的配制稱15gCTAB(Hexadecyltrimethylammoniumbromide)(先用約600mlddH2O加熱溶解)放入燒杯中,加入75ml1MTris-HCL(Ph=8.0),58.5gNaCL(先用少量ddH2O溶解),30ml0.5MEDTA,定容至1000ml,混合均勻備用。
4、組織裂解液配方:'7MUrea(60.06)4.2042g2Mthiourea(76.12)1.5224g100mMDTT0.1543g4%CHAPS0.4g0.5mMEDTA0.00146g40MmTris0.0485g2%(v/v)NP-400.2ml1%(v/v)TritonX-1000.1ml5mMPMSF用前加0.00871g2%pharmalyte0.2ml共10ml分裝成400^1/每管(可應(yīng)用于30-80毫克組織裂解)蛋白質(zhì)的定位與蛋白質(zhì)裂解液的選擇:全細(xì)胞:NP-4
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