實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解動物細(xì)胞融合的常用方法。2、學(xué)習(xí)化學(xué)融合的基本操作過程。3、觀察動物細(xì)胞融和過程中細(xì)胞的行為和變化。實(shí)驗(yàn)用品顯微鏡、水浴箱、普通離心機(jī)、高心管、載玻片、蓋玻片、酒精燈、試管、量筒、電子天枰肝素鈉、Alsever液、0.85%生理鹽水、Hanks液、聚乙二醇（PEGMr=4000）0.2%亞甲基藍(lán)染液實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞融合（cellfusion）：由兩個或多個細(xì)胞相互接觸后，其細(xì)胞膜發(fā)生分子重排，導(dǎo)致細(xì)胞合并、染色體等遺傳物質(zhì)重組的過程稱為細(xì)胞融合。分為細(xì)胞自發(fā)融合和誘導(dǎo)細(xì)胞融合。實(shí)驗(yàn)步驟——10%雞血細(xì)胞的制備1、取雞血細(xì)胞懸液1ml到10ml離心管，加入9ml0.85%生理鹽水混勻，1000r\min離心5min，棄上清液，再按照上述條件離心洗滌兩次2、收集沉淀細(xì)胞，加入8-10mlHanks液配制成10%的雞血細(xì)胞懸液實(shí)驗(yàn)步驟——50%PEG溶液的制備取一定量的PEG（Mr=4000）放入刻度離心管內(nèi)，用試管夾夾住，在酒精燈上加熱，使其溶化，待冷卻到50—60℃時，加入預(yù)熱的等體積Hanks液混勻，置37℃水浴箱中保溫待用實(shí)驗(yàn)步驟——細(xì)胞融合1、取10%的雞血細(xì)胞懸液1ml放入離心管中，加入5mlHanks液混勻，1000r\min離心5min，小心棄上清液；加入8—10mlHanks液再次懸浮細(xì)胞，離心洗滌一次，棄上清液后將離心管倒置于濾紙上，盡量流盡殘余液體。用手指輕彈離心管底壁，使細(xì)胞團(tuán)松散。

2、取50%PEG0.5ml，在1min內(nèi)逐滴加入到離心管中，邊加邊輕輕搖動混勻，將PEG全部加入后靜止1—2min（此過程要在37℃的水浴中進(jìn)行）實(shí)驗(yàn)步驟——細(xì)胞融合3、緩慢加入9mlHanks液，輕輕吹打混勻，在37℃水浴中靜止5min。4、離心棄上清液，加入2—3mlHanks液，在37℃水浴中溫育20—30min。實(shí)驗(yàn)步驟——制片及觀察分別溫育5min、10min、20min、30min后，取細(xì)胞懸液一滴制成臨時裝片，以0.2%亞甲基藍(lán)染液染色，在顯微鏡下觀察細(xì)胞融合的不同階段實(shí)驗(yàn)步驟——制片及觀察通常將融合過程分為5個階段：1、兩個細(xì)胞的細(xì)胞膜互相接觸、黏連。2、相接的兩細(xì)胞膜破口粘合形成細(xì)胞膜通道。3、兩細(xì)胞之間細(xì)胞質(zhì)相遇，形成細(xì)胞質(zhì)通道。4、通道擴(kuò)大，兩細(xì)胞連成一體。5、細(xì)胞合并完成，形成一個含有兩個或多個核的圓形細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)步驟——融合率融合率是指在顯微鏡視野內(nèi)，已發(fā)生融合的細(xì)胞，其細(xì)胞核總數(shù)與視野內(nèi)所有細(xì)胞（包括已融合和未融合細(xì)胞）的細(xì)胞核總數(shù)之比。對孵育30min時制備的臨時裝片計(jì)算融合率。通常以百分?jǐn)?shù)表示，進(jìn)行多個視野測定值的平均統(tǒng)計(jì)更加準(zhǔn)確。融合率=（融合的細(xì)胞核數(shù)/總細(xì)胞核數(shù)）×100%注意事項(xiàng)1、制備的50%PEG一定要保存于37℃水浴中，不然冷卻后結(jié)晶析出。2、在理想管中加PEG之前，一定要將離心管倒置于濾紙上，流盡剩余液體，否則殘留液會改變PEG的濃度。3.操作規(guī)范，防止試劑污染。4.細(xì)胞懸液的涂片制作要輕柔。5.使用離心機(jī)要注意平衡，轉(zhuǎn)速從低到高。完謝謝！離心洗滌洗滌的目的是洗去固體中的殘留溶劑，保證固體中盡量少的雜質(zhì)殘留；

具體操作就是離心過程中，無明顯液體被離心機(jī)甩出后，降低