醫(yī)學微生物學寇曉霞kouxiaoxia163@163.com實驗一廣州醫(yī)科大學金域檢驗學院實驗室規(guī)則臨床微生物檢驗實驗室規(guī)則實驗室意外的應急處理值日衛(wèi)生請嚴格遵守各項規(guī)則、注意安全、節(jié)約！1.進入實驗室要穿白大衣。書及文具等放指定區(qū)域。實驗材料嚴禁帶出實驗室外。2.實驗室內禁止飲食。3.嚴格操作規(guī)程，無菌操作。出現皮膚刺傷、感染性物品溢出等意外要立即報告老師，及時處理。4.污染標本及使用過的有菌器材放于指定的消毒缸內，統(tǒng)一進行消毒處理。5.酒精燈要人離燈滅。嚴防發(fā)生火災。6.禁止將實驗用菌株帶出實驗室外。7.實驗完畢要清理桌面。白大衣反折，消毒液浸泡或肥皂水洗手后方可離開。

值日搞衛(wèi)生實驗室規(guī)則

1．皮膚刺傷或擦傷：受傷人員應當脫下實驗服，清洗雙手，盡可能擠出損傷處的血液，除盡異物，用肥皂和清水沖洗傷口或沾污的皮膚；如果粘膜破損，應用生理鹽水(或清水)反復沖洗。傷口應使用適當的皮膚消毒劑(如酒精、碘伏等)涂抹消毒，必要時進行醫(yī)學處理。

2．菌液流灑桌面：應傾倒適量消毒液于污染面，讓其浸泡30min后抹去；若手上沾有活菌，亦應浸泡于上述消毒液10min后，再以肥皂及水清洗干凈。實驗室意外應急處理措施醫(yī)學微生物學實驗報告1.實驗名稱、實驗時間2.主要材料（簡略）3.實驗原理（必要時）4.步驟（簡略）5.結果6.討論及問答請在實驗報告封面寫上：姓名班別學號組別醫(yī)學微生物學實驗報告

1.獨立操作；認真觀察示教結果。2.如實記錄實驗過程及結果。

實驗一1、細菌的革蘭染色法（每人做）取金葡菌、銅綠或大腸進行革蘭染色。2、細菌的特殊結構（示教）3、油鏡的使用與保護目的要求1、掌握細菌涂片制作方法2、掌握革蘭染色法3、認識細菌的基本形態(tài)和特殊結構特點實驗內容器材接種環(huán)接種針金屬環(huán)金屬柄塑料柄接種環(huán)器材染色涂片制備法（1）涂片：取潔凈載玻片一張，點燃酒精燈，左手持NS試管，右手以持手筆方式拿接種環(huán)，燒灼滅菌后取2環(huán)NS，燒灼滅菌后從平板取少量待檢菌，在NS中研磨。厚度適宜均勻（以透過涂面能看清字跡為宜）。（2）干燥：自然干燥；或將涂面向上，距火焰稍遠處烘干，切忌緊靠火焰。（3）固定：涂面向上在火焰最熱部分往返通過三次。

涂片厚薄適度，否則效果不好。涂片制作----染色前操作步驟1.涂片2.干燥3.固定染色細菌的涂片制作從平板上刮取菌落革蘭氏染色原理1.平板劃線法2.瓊脂斜面接種法3.液體接種法4.穿刺接種法5.涂布接種法（藥敏，計數）6.傾注平板法1.通透性學說：革蘭陽性菌細胞壁結構致密，肽聚糖層厚，脂質含量少，乙醇不易進入，不能溶解脫去細胞內結合的結晶紫；革蘭陰性菌細胞壁結構較疏松，肽聚糖層少，脂質含量多，乙醇易滲入，易使細胞內結合的結晶紫溶解脫去，隨后染上復紅的紅色。2.等電點學說：革蘭陽性菌等電點比革蘭陰性菌低，所帶負電荷比革蘭陰性菌多，與帶正電荷的結晶紫結合牢固不易脫色3.化學學說：革蘭陽性菌含大量核糖核酸鎂鹽，與結晶紫染料結合成大分子復合物，不易被乙醇脫色革蘭氏染色意義

1：將細菌染成兩大類，即革蘭陽性菌和革蘭陰性菌,可用于鑒別細菌。

2：研究細菌的致病性，革蘭陽性菌可產生外毒素，革蘭陰性菌可產生內毒素。3：選擇敏感的抗生素用于治療。革蘭染色

1.結晶紫：初染1min水洗

2.盧戈氏碘液：媒染1min水洗

3.95％乙醇：脫色0.5min水洗

4.稀釋石炭酸復紅：復染0.5min水洗

影響因素:操作染液菌齡等因素初染1min

水洗媒染1min脫色0.5min復染0.5min鏡檢1、操作因素涂片太厚或太薄，脫色時間長短2、染液因素染液新鮮配制，涂片積水過多改變染液濃度，脫色液乙醇濃度以95％為宜。3、細菌因素菌齡（老或幼齡），以18-24h培養(yǎng)物最好。革蘭染色法影響因素粗調焦螺旋細調焦螺旋油鏡的使用和保護

1.加香柏油時，一定要從載物臺上清取下玻片，加好之后再放上去，不能直接在載物臺上加香柏油。2.油鏡使用完畢，一定要及時的用擦鏡紙擦干凈鏡頭上的香柏油，保護鏡頭。

革蘭陽性

革蘭陰性結果觀察注意觀察細菌基本形態(tài)，比較其形狀、大小排列及染色性。球菌桿菌弧菌1、觀察標本

用油鏡觀察。（１）觀察莢膜的特點，如大小、顏色與菌體的關系。（２）觀察鞭毛的特點，如鞭毛的形態(tài)，數目及其位置。（３）觀察芽胞，注意芽胞的形狀、顏色及位置。

2、實驗報告

畫圖，圖示細菌基本形態(tài)及特殊結構，并加以適當描述細菌的特殊結構（示教）莢膜鞭毛周鞭毛單鞭毛芽孢染色涂片制備法（1）涂片：取潔凈載物玻片一張，點燃酒精燈，左手持NS試管，右手以持手筆方式拿接種環(huán)，燒灼滅菌后取2環(huán)NS，燒灼滅菌后從平板取少量待檢菌，在NS中研磨。厚度適宜均勻（以透過涂面能看清字跡為宜）。（2）干燥：自然干燥；或將涂面向上，距火焰稍遠處烘干，切忌緊靠火焰。（3）固定：涂面向上在火焰最熱部分往返通過三次。

涂片厚薄適度，否則效果不好。

1.結晶紫：初染1min水洗

2.盧戈氏碘液：媒染1min水洗

3.95％乙醇：脫色0.5min水洗

4.稀釋石炭酸復紅：