桑黃子實(shí)體分化培養(yǎng)條件的研究

桑黃是一種雙殼類孔菌，屬于波斯尼亞和波斯尼亞。這是目前發(fā)現(xiàn)的最有效的生物抗癌領(lǐng)域之一。由于其極高的藥用價(jià)值,導(dǎo)致近年來各地對(duì)野生桑黃進(jìn)行掠奪性采集,子實(shí)體孢子無法大量形成,在東北地區(qū)資源難以恢復(fù),西北地區(qū)也即將枯竭,因而,人工培養(yǎng)桑黃菌已成為當(dāng)務(wù)之急。針對(duì)野生桑黃資源日趨緊張,國內(nèi)外市場(chǎng)需求量不斷上升,人工培養(yǎng)技術(shù)尚不成熟這一現(xiàn)狀,在對(duì)桑黃菌現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上,通過人工培養(yǎng)觀察及分析,總結(jié)桑黃菌子實(shí)體分化發(fā)育所需營養(yǎng)條件及環(huán)境要求,為桑黃菌子實(shí)體商品化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1供試培養(yǎng)基(1)供試菌株:韓國桑黃、日本桑黃。(2)供試培養(yǎng)基:棉子殼78%,麩皮20%,石膏1.5%,MgSO40.2%,KH2PO40.3%,料水比1∶1.5。1.2菇的管理策略菌絲生長條件:28℃,定時(shí)通風(fēng)以利發(fā)菌。待菌絲生長滿袋或接近滿袋時(shí)轉(zhuǎn)入自制人工培養(yǎng)箱中進(jìn)行出菇管理?？刂婆囵B(yǎng)箱內(nèi)條件:溫度28℃,空氣相對(duì)濕度90%~100%,給予散射光,每天早中晚各打開培養(yǎng)箱門通風(fēng)1次(每次15min)。1.2.1碳源子實(shí)體形成的影響設(shè)3種不同碳源處理:棉子殼78%、棉子殼與木屑各39%、木屑78%。每個(gè)處理做10個(gè)平行。1.2.2氮源子實(shí)體形成的影響1.2.3溫度子的形成的影響1.2.4影響水生植物形成的第二天實(shí)體1.2.5網(wǎng)絡(luò)生成的影響1.2.6光緒年間的實(shí)體形成的影響1.2.7蘑菇法對(duì)子實(shí)體形成的影響設(shè)3種不同出菇方式處理:脫袋埋土出菇、側(cè)切破袋出菇、開蓋出菇。每個(gè)處理做10個(gè)平行。2結(jié)果與分析2.1主要碳源的菌袋無原基日本桑黃在原基形成階段(第30天左右)就對(duì)不同的碳源有明顯的區(qū)別反應(yīng)(圖1):棉子殼為主要碳源的菌袋已生成大量原基(黑色小突起),棉子殼與木屑摻半作為主要碳源的菌袋在同一時(shí)期只有少量的原基生成,而木屑作為主要碳源的菌袋沒有產(chǎn)生原基。隨著子實(shí)體的形成成熟,不同碳源對(duì)其影響的差別日益顯現(xiàn),圖2,為培養(yǎng)30d的韓國桑黃子實(shí)體,明顯看出在棉子殼培養(yǎng)基上子實(shí)體生長最快。2.2添加20%麩皮原基的情況日本桑黃在原基形成階段就對(duì)不同的氮源有明顯的不同反應(yīng):在添加20%麩皮的培養(yǎng)基上原基形成所需天數(shù)比添加10%麩皮的少5d左右,而且形成原基的數(shù)量也相差很大。韓國桑黃在子實(shí)體剛剛形成時(shí),對(duì)不同氮源的反應(yīng)最為明顯(圖3),在添加20%麩皮的培養(yǎng)基上的子實(shí)體大小均勻,表面光滑,顏色更正(黃),生長速度更快;而在添加10%麩皮的培養(yǎng)基上子實(shí)體大小參差不齊,表面有凹陷,顏色淺(鵝黃),生長速度相對(duì)較慢。2.3桑黃的生長溫度試驗(yàn)結(jié)果顯示,日本桑黃子實(shí)體形成和發(fā)育適合的溫度為29~30℃;韓國桑黃子實(shí)體形成和發(fā)育適合的溫度為27~28℃。桑黃屬于高溫菌,比其他大型真菌需要更高的培養(yǎng)溫度。而日本桑黃更表現(xiàn)出嗜高溫的特性,在29~30℃培養(yǎng)條件下生長速度更快,顏色更好。2.4濕度、濕度、干成率對(duì)桑黃子實(shí)體的影響試驗(yàn)結(jié)果顯示,桑黃菌子實(shí)體形成最適合的濕度是90%~100%。濕度對(duì)子實(shí)體的形成和生長起著至關(guān)重要的作用,濕度越低子實(shí)體形成天數(shù)和成熟天數(shù)都明顯延長,子實(shí)體較小且生長不整齊,小于70%明顯抑制其形成和生長,而濕度90%~100%較適合桑黃子實(shí)體。但濕度太大容易滋生雜菌,所以控制濕度在90%~95%為宜。2.5子實(shí)體的形成試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),桑黃菌子實(shí)體形成時(shí)期需要足量的通氣,通氣每日1次與每日3次相比,子實(shí)體形成和成熟時(shí)間均延長近一半時(shí)間,子實(shí)體體積偏小,相差較大。通氣每日3次就能夠保證桑黃子實(shí)體正常形成和發(fā)育。圖4是同樣培養(yǎng)條件下,韓國桑黃培養(yǎng)第30天的照片,有光照的試驗(yàn)組已經(jīng)全部形成子實(shí)體,大小均一、顏色均勻;無光照的實(shí)驗(yàn)組還沒有形成子實(shí)體。說明在子實(shí)體分化階段,光照對(duì)其的重要性,菌絲只有在有光的條件下才能發(fā)生分化,進(jìn)而形成子實(shí)體。2.7脫袋埋土出菇試驗(yàn)表明,日本桑黃應(yīng)采用側(cè)切破袋的方式出菇,即在菌袋肩部切開1~2個(gè)小口。韓國桑黃應(yīng)采用直接開蓋的出菇方式。脫袋埋土的方式不適合任何一種桑黃。日本桑黃和韓國桑黃在出子實(shí)體的部位上有非常大的不同,日本桑黃只有在側(cè)切口處能正常形成子實(shí)體;而韓國桑黃菌絲的頂端優(yōu)勢(shì)明顯,宜于在菌袋頂端(開蓋處)形成子實(shí)體。由此是否可以推斷這兩種桑黃的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。2.8最優(yōu)條件下子實(shí)體形成情況根據(jù)以上單因素試驗(yàn),我們初步得到了適合桑黃菌子實(shí)體分化形成的營養(yǎng)和環(huán)境條件:棉子殼作主要碳源,麩皮作主要氮源。出菇時(shí),日本桑黃采用側(cè)切破袋出菇,韓國桑黃采用開蓋出菇,28~29℃培養(yǎng),提供散射光(1000lx),90%~95%的濕度和足量的通氣(每日至少通風(fēng)2次)。按照上述的營養(yǎng)和環(huán)境條件做一組驗(yàn)證試驗(yàn),再次對(duì)兩種桑黃菌進(jìn)行培養(yǎng)觀察,以驗(yàn)證單因素試驗(yàn)的綜合效果,同時(shí)對(duì)兩種桑黃菌的子實(shí)體形成情況作一個(gè)綜合比對(duì)(圖5)。如圖5所示,在最優(yōu)培養(yǎng)條件下日本桑黃和韓國桑黃均能正常分化形成子實(shí)體(日本桑黃25~28d,韓國桑黃約17d)。桑黃子實(shí)體大小均勻,顏色正常,長勢(shì)良好,不易染菌。我們發(fā)現(xiàn)子實(shí)體發(fā)育階段,韓國桑黃不同于日本桑黃的兩個(gè)特性:(1)在子實(shí)體形成第3~第10天,在子實(shí)體表面出現(xiàn)大量棕色水質(zhì)分泌物(圖6),一般在傍晚時(shí)開始形成,次日上午消失(吸收)。這種現(xiàn)象隨子實(shí)體生長速度而不同,子實(shí)體生長速度越快,分泌物越多。(2)能夠形成第2潮子實(shí)體(培養(yǎng)第33天左右),如果第1潮子實(shí)體沒有即時(shí)采收,第2潮子實(shí)體能夠在第1潮已經(jīng)木質(zhì)化的成熟子實(shí)體上繼續(xù)生長,如圖7。3黃菌子實(shí)體發(fā)育上述驗(yàn)證試驗(yàn)達(dá)到了預(yù)期的效果:既驗(yàn)證了初步確定的營養(yǎng)和環(huán)境條件適合桑黃菌子實(shí)體的形成;又對(duì)在此條件下兩種桑黃菌生長和出子實(shí)體的情況有了初步了解。由此我們確定了適合桑黃菌子實(shí)體形成的營養(yǎng)和環(huán)境條件,但對(duì)子實(shí)體生長發(fā)育情況掌握還不全面,有待以后進(jìn)一步研究。設(shè)2種不同氮源處理:添加10%麩皮、添加20%麩皮。每個(gè)處理做10個(gè)平行。設(shè)3種不同溫度處理:25~26℃、27~28℃、29~30℃。每個(gè)處理做10個(gè)平行。設(shè)3種不同濕度處理:70%~80%、80%~90%、90%~100%。每個(gè)處理做10個(gè)平行。設(shè)2種不同通氣處理:通氣1次/d、通氣3次/d。每個(gè)處理做10個(gè)平行。設(shè)2種不同光照