當(dāng)歸六黃湯中藥配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑中鹽酸小檗堿含量的比較【摘要】目的對(duì)當(dāng)歸六黃湯中藥配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑中鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行比較，從而為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法采用反相液相色譜法，DIKMAODS-C18柱(5μm，mm×250mm)，流動(dòng)相為乙腈－%的三乙胺，流速為ml·min-1，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為343nm。結(jié)果配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑中鹽酸小檗堿含量分別為mg/處方，mg/處方。結(jié)論中藥配方顆粒中鹽酸小檗堿含量明顯高于傳統(tǒng)湯劑。

【關(guān)鍵詞】當(dāng)歸六黃湯鹽酸小檗堿

當(dāng)歸六黃湯出自李東垣《蘭室秘藏》，藥方組成為當(dāng)歸6g，生地黃6g，熟地黃6g，黃連6g，黃芩6g，黃柏6g，黃芪12g，藥材均為粗末。每服五錢(qián)，水兩盞，煎至一盞，口服［1］。主治陰虛火旺證的發(fā)熱盜汗，面赤心煩，口干唇燥，大便干結(jié)，小便黃赤，舌紅苔黃，脈數(shù)等癥。李東垣稱(chēng)當(dāng)歸六黃湯為“治汗之圣藥也”，并為歷代醫(yī)家所推崇。本研究對(duì)當(dāng)歸六黃湯中藥配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑中鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行比較，從有效成分含量變化的角度探討其臨床應(yīng)用的科學(xué)依據(jù)。

1儀器與試藥

Aglient1100高效液相色譜儀；(包括真空脫氣機(jī)，自動(dòng)進(jìn)樣器，四元泵，DAD檢測(cè)器)，HP1100/WIND3D化學(xué)工作站。鹽酸小檗堿對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。乙腈為色譜純，水為純凈水，其它試劑均為分析純。藥材經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院董麗莎教授鑒定，當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensia(Oliv.)Diels的干燥根，黃芩為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根，黃連為毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch.的干燥根莖，黃柏為蕓香科植物黃皮樹(shù)的干燥樹(shù)皮PhellodendronchinenseSchneid.。黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根。地黃為玄參科植物地黃RehmanniaglutinosaLibosch.的干燥塊莖。

2方法與結(jié)果

中藥配方顆粒、傳統(tǒng)湯劑、陰性樣品的制備

中藥配方顆粒樣品稱(chēng)取黃芪120g，先加8倍量的水，煎煮1h后過(guò)濾，濾渣加6倍量的水煎煮1h，過(guò)濾，合并濾液，濃縮，減壓干燥，粉碎。分別稱(chēng)取生地、熟地、黃連、黃柏、當(dāng)歸、黃芩各60g，按上述方法進(jìn)行制備，即得各味藥材的浸膏粉。

傳統(tǒng)湯劑樣品按處方比例稱(chēng)取各味藥材粗粉，加20倍量的水，煎煮至10倍量，過(guò)濾，濃縮，減壓干燥，粉碎，即得傳統(tǒng)湯劑樣品。

陰性樣品按照處方比例稱(chēng)取除黃柏、黃連外的各味藥材浸膏粉，混合均勻，即得分煎陰性樣品；按照處方比例稱(chēng)取除黃柏、黃連外的各味藥材，加20倍量的水，煎煮至10倍量，濃縮，減壓干燥，即得合煎陰性樣品。

色譜條件色譜柱：DIKMAODS-C18(5μm,mm×250mm)，以乙腈－%的三乙胺為流動(dòng)相，流速：ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：343nm，柱溫：30℃。

對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取在60℃減壓干燥4h的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成濃度為2mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液，備用。

供試品溶液的制備分別精密稱(chēng)取干燥的分煎與合煎樣品約g，置100ml量瓶中，加鹽酸∶甲醇(1∶100)稀釋至刻度，稱(chēng)重，超聲處理30min，放冷，加鹽酸∶甲醇(1∶100)補(bǔ)足減失溶媒，過(guò)濾，即得。

對(duì)照品、樣品色譜圖如圖1。

a-鹽酸小檗堿對(duì)照品b-分煎樣品c-合煎樣品

圖1對(duì)照品及樣品色譜圖

線性關(guān)系考察分別精密吸取對(duì)照品溶液1，2，4，6，8，10ml置10ml量瓶中，用甲醇定容至刻度,搖勻。在上述色譜條件下進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積。以峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為A=18，r=97鹽酸小檗堿在2～0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，在上述色譜條件下測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD＝％，表明精密度良好。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取同一批分煎、合煎樣品各6份，按上述供試品溶液的制備方法和色譜條件測(cè)定，計(jì)算鹽酸小檗堿的含量，RSD分別為%，%。結(jié)果表明該方法具有良好的重現(xiàn)性。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取分煎、合煎樣品各g，按供試品溶液的制備方法處理，分別在0，2，4，6，8h進(jìn)樣，在上述色譜條件下測(cè)定，RSD分別為％，％，表明兩種樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率實(shí)驗(yàn)分別精密稱(chēng)取已知含量分煎、合煎樣品各9份，加入適量阿魏酸對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備方法處理，上述色譜條件下測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1～2。表1合煎樣品加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表2分煎樣品加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

樣品的測(cè)定按供試液制備方法分別處理樣品，在“”色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果：分煎樣品與合煎樣品含量分別為：，。在鹽酸小檗堿出峰位置陰性對(duì)照液無(wú)干擾。

分煎樣品與合煎樣品中平均含量的比較

兩種供試品精密度的比較分煎、合煎樣品鹽酸小檗堿含量分別為n1=6，-χ1=；n2=6，-χ2=計(jì)算得S1=2，S2=6；f1=6-1=5，f2=6-1=5查表得，5,5=根據(jù)公式F=S12S22=

F

兩種樣品中鹽酸小檗堿平均含量的比較可求得合并標(biāo)準(zhǔn)偏差為

S=Σ2+Σ2+(n2-1)=

t=-χ1--χ2Sn1n2n1+n2=

查表，當(dāng)置信度為95%，f=n1+n2-2=10時(shí)，,10=。

t，10，分煎、合煎樣品中鹽酸小檗堿平均含量之間存在顯著性差異。

3討論

在測(cè)定過(guò)程中，分別考察了①mol/L磷酸二氫鉀溶液－乙腈［2］；②乙腈-mol·L-1磷酸二氫鈉溶液-mol·L-1十二烷基硫酸鈉溶液(50∶25∶25)［3］；③乙腈－％三乙胺(27∶73)等流動(dòng)相，結(jié)果以③為流動(dòng)相時(shí)，保留時(shí)間適中，分離效果好且很好地消除拖尾現(xiàn)象。

分別用鹽酸－甲醇［4］、甲醇［2］為提取溶媒，進(jìn)行考察。結(jié)果表明用鹽酸－甲醇為提取溶媒，鹽酸小檗堿的含量較高。

分別考察超聲處理15，30，45，60min，結(jié)果表明30min時(shí)鹽酸小檗堿含量較高，且能夠提取完全。

當(dāng)歸六黃湯分煎樣品中鹽酸小檗堿含量比合煎樣品高。組方中當(dāng)歸含有阿魏酸,在合煎過(guò)程中酸堿可能發(fā)生中和反應(yīng),從而導(dǎo)致合煎樣品中小檗堿含量偏低。但中藥復(fù)方成分復(fù)雜，其原因還需作進(jìn)一步深入的研究。

【參考文獻(xiàn)】

［1］李飛.方劑學(xué)，上冊(cè)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：641.

［2］遲芳振，劉群，李偉妮.黃柏膠囊中鹽酸小檗堿的含量