微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)課件微生物原核:真核非細(xì)胞類：細(xì)菌、放線菌、支原體、藍(lán)藻等酵母菌、霉菌等真菌：原生生物病毒、類病毒、朊病毒等①種類多；②分布廣；③易培養(yǎng)；④個(gè)體微?。虎輼?gòu)造簡(jiǎn)樸；⑥繁殖快；⑦代謝強(qiáng)；⑧易變異。微生物的類群顯微藻類：衣藻、小球藻等原生動(dòng)物：草履蟲(chóng)、變形蟲(chóng)等微生物的特征（一）球菌（二）桿菌（三）螺旋菌肺炎雙球菌金黃色葡萄球菌乳酸鏈球菌大腸桿菌蘇云金芽孢桿菌枯草芽孢桿菌霍亂弧菌幽門螺旋菌齒垢密螺旋體細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌的芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一種橢圓形的休眠體（不是繁殖體），叫做芽孢。

芽孢的壁很厚，含水量極低，抗逆性極強(qiáng)（對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力）。細(xì)菌芽孢的結(jié)構(gòu)模式圖環(huán)境合適時(shí)，芽孢能夠萌發(fā)，形成一種細(xì)菌。

菌落具有大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等基本特征。菌落是鑒定菌種的主要根據(jù)。菌落菌落由單個(gè)細(xì)菌（或其他微生物）細(xì)胞或少數(shù)同種細(xì)胞在合適固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)繁殖到一定程度，形成肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群落。課題1微生物的試驗(yàn)室培養(yǎng)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1.提供營(yíng)養(yǎng)和條件2.預(yù)防污染6（一）培養(yǎng)基

（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。（2）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。（3）按成份分：天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。2.培養(yǎng)基的類型1、概念：

人們按照微生物對(duì)__________的不同需求，配制出供其

的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)叫培養(yǎng)基

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生長(zhǎng)繁殖種類制備方法原理用途例選擇培養(yǎng)基加入某種化學(xué)物質(zhì)對(duì)某物質(zhì)的抗性分離微生物青霉素分離酵母菌和霉菌鑒別培養(yǎng)基加入某種化學(xué)物質(zhì)或指示劑某種代謝產(chǎn)物與特定物質(zhì)或指示劑反應(yīng)鑒別微生物伊紅和美藍(lán)鑒別大腸桿菌按培養(yǎng)基的功能（用途）培養(yǎng)基應(yīng)用加入青霉素分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽分離金黃色葡萄球菌不加氮源分離固氮菌不加有機(jī)物的培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷分離雜交瘤細(xì)胞3.基本成份：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽⑴碳源無(wú)機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源無(wú)機(jī)氮源：有機(jī)氮源：N2、NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源。主要用于合成細(xì)胞物質(zhì)、作為能源物質(zhì)主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物4、其他條件pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（如維生素等）、氧氣的需求等。部分加生長(zhǎng)因子——是微生物生長(zhǎng)不可缺乏的微量有機(jī)物，一般是酶和核酸的構(gòu)成成份。（主要涉及維生素、氨基酸和堿基等）5.配制原則⑴目的明確：⑵營(yíng)養(yǎng)全方面、濃度合適、百分比恰當(dāng)⑶合適的pH值：有機(jī)碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸（CO2碳源）生產(chǎn)科研12（二）無(wú)菌技術(shù)1、無(wú)菌技術(shù)就是取得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是對(duì)試驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行__________將培養(yǎng)皿、接種用具進(jìn)行_________接種的過(guò)程要在_________附近進(jìn)行。試驗(yàn)后對(duì)培養(yǎng)基等也要_______處理預(yù)防外來(lái)雜菌的入侵預(yù)防雜菌污染的操作技術(shù)。涉及清潔消毒滅菌酒精燈滅菌消毒：指使用較為溫和的物理或化學(xué)措施僅殺死物體表面或內(nèi)部部分對(duì)人體有害的微生物（不涉及芽孢和孢子）。滅菌：指使用強(qiáng)烈的理化原因殺死物體內(nèi)外全部微生物，涉及芽孢和孢子。滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最一般也是最主要的技術(shù)。2.消毒與滅菌的概念1、煮沸消毒法:100℃煮沸5~6min2、巴氏消毒法：70~75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精;氯氣消毒水源等4、紫外線消毒……(1)消毒的措施：3.常用的消毒與滅菌的措施1、灼燒滅菌接種環(huán)、接種針等接種工具及試管口2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.(2)滅菌的措施：1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)預(yù)防試驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？2.請(qǐng)你判斷如下材料或用具是否需要消毒或滅菌。假如需要，請(qǐng)選擇合適的措施。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）試驗(yàn)操作者的雙手答：無(wú)菌技術(shù)還能有效防止操作者本身被微生物感染。答：（1）中培養(yǎng)基用高壓蒸汽、培養(yǎng)皿與（2）用干熱滅菌；（3）用酒精擦拭消毒。旁欄思索例題：消毒和滅菌是兩個(gè)不同的概念，下列哪些事物合用于消毒處理()

①皮膚②飲用水③牛奶④注射器⑤培養(yǎng)皿

⑥接種環(huán)⑦培養(yǎng)基⑧果汁⑨醬油⑩手術(shù)刀

A．④⑤⑥⑦⑩B．①②③⑧⑨

C．①②③④⑤⑥⑧

D．以上全部B（三）試驗(yàn)操作

以牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌純化培養(yǎng)為例1、制備培養(yǎng)2、純化大腸桿菌1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（1）.計(jì)算：依配方計(jì)算100mL培養(yǎng)基所需各成份的用量。

（2）稱量：玻璃棒挑取牛肉膏于稱量紙上稱取。（3）溶化：注：牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋。牛肉膏、稱量紙、少許水加入燒杯→加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→攪拌溶解→冷卻調(diào)pH→瓊脂→攪拌熔化→補(bǔ)水至100mL牛肉膏黏稠，確保粘附在稱量紙上的牛肉膏也溶于水中，降低誤差作為凝固劑預(yù)防瓊脂糊底而造成燒杯破裂(4)滅菌：培養(yǎng)基裝入錐形瓶，加棉塞，包牛皮紙?jiān)o，高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿5～8套作一包，放于干熱滅菌箱內(nèi)滅菌。(5)倒平板培養(yǎng)基冷卻至約50℃左右時(shí)②灼燒滅菌①左手拔出棉塞③倒入培養(yǎng)基蓋蓋④冷卻倒置(6)無(wú)菌檢驗(yàn)：37℃倒置培養(yǎng)24～48h，觀察是否有微生物生長(zhǎng)。預(yù)防污染和揮發(fā)滅菌時(shí)防止水蒸氣浸濕棉塞，取出培養(yǎng)基時(shí)，也起到隔絕空氣中雜菌的作用①溶化時(shí)為何要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?②加瓊脂的目的是什么?為何要用玻璃棒攪拌？③在滅菌前,用牛皮紙、舊報(bào)紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？④培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？可確保粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中,降低誤差作為凝固劑；預(yù)防瓊脂糊底造成燒杯破裂。在滅菌時(shí)能防止水蒸汽凝結(jié)時(shí)浸濕棉塞,在取出培養(yǎng)基錐形瓶時(shí)也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用不能,因?yàn)榕囵B(yǎng)皿要保持干燥,應(yīng)該用干熱滅菌.問(wèn)題討論答：用手觸摸錐形瓶，感覺(jué)剛剛不燙手時(shí)。2.為何需要使錐形瓶的瓶口經(jīng)過(guò)火焰？答：灼燒滅菌，預(yù)防瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。問(wèn)題討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才干用來(lái)倒平板。你用什么措施來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？3.平板冷凝后，為何要將平板倒置？答：既能夠預(yù)防培養(yǎng)基表面的水分過(guò)快揮發(fā)，又能夠預(yù)防皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4.在倒平板的過(guò)程中，假如不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為何？答：最佳不要用。因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诖俗躺＜兓竽c桿菌微生物接種：最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法一、平板劃線操作：微生物的接種技術(shù)還涉及斜面接種、穿刺接種等措施。雖然這些技術(shù)和操作措施各不相同，但是，其關(guān)鍵都是要預(yù)防雜菌污染，確保培養(yǎng)物純度。一、平板劃線操作：?jiǎn)栴}討論1、為何在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，依然需要灼燒接種環(huán)嗎？為何？①操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物②殺死上次殘留的菌種，確保使下一次劃線時(shí)，菌種直接起源于上次劃線的末端，預(yù)防菌落連成一片。③及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防止細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2、在灼燒接種環(huán)之后，為何要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。問(wèn)題討論3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為何總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目伴隨劃線次數(shù)的增長(zhǎng)而逐漸降低，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)成分離單菌落的目的；存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一種條狀的菌落。4.平板劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基的原因？例：有關(guān)平板劃線操作正確的是（）A．打開(kāi)含菌種的試管需要經(jīng)過(guò)火焰滅菌，取出菌種后需要立即塞上棉塞B．使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過(guò)程中不再滅菌

C．最終將平板倒置，放入恒溫箱中培養(yǎng)D．將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可C6支試管，分別加入9ml無(wú)菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml1061、梯度稀釋菌液：菌液微量移液器二、稀釋涂布平板法：浸不超出0.1ml各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照滴灼涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍2、涂布平板：1、梯度稀釋菌液：二、稀釋涂布平板法：稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍2、涂布平板：1、梯度稀釋菌液：二、稀釋涂布平板法：例、平板劃線法和稀釋涂布平板法接種大腸桿菌的操作中，相同的是（）

①能夠用相同的培養(yǎng)基

②都需要使用接種針進(jìn)行接種③菌液均需稀釋后再接種④都能夠用來(lái)計(jì)數(shù)活菌⑤根據(jù)的原理相同⑥都需要在火焰旁進(jìn)行接種A．①②B．③④

C．①⑥D(zhuǎn)．②④涂布平板的全部操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)怎樣進(jìn)行無(wú)菌操作？應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)確?！盁o(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。C問(wèn)題討論培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同1、培養(yǎng)基的制作是否合格假如未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無(wú)菌落生長(zhǎng)，闡明培養(yǎng)基的制備是成功的，不然需要重新制備。2、接種操作是否符合無(wú)菌要求假如培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則闡明接種操作是符合要求的；假如培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則闡明接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)成要求，需要分析原因，再次練習(xí)。3、是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與統(tǒng)計(jì)課題成果評(píng)價(jià)菌種的保存：1、臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后置于4℃冰箱保藏。后來(lái)每3-6個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。這種措施保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種易被污染和產(chǎn)生變異。課題的延伸2、長(zhǎng)久保存：甘油管藏法。在3ml的甘油瓶中，裝入1ml甘油后滅菌。將1ml培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱中保存。本課題知識(shí)小結(jié):課堂鞏固1.（2023.寧夏高考）某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了試驗(yàn)。試驗(yàn)涉及制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計(jì)數(shù)。請(qǐng)回答與此試驗(yàn)有關(guān)的問(wèn)題。（1）培養(yǎng)基中具有蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了和。除此之外，培養(yǎng)基還必須具有的基本成份是和。（2）對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的措施是。碳源氮源無(wú)機(jī)鹽水高壓蒸汽滅菌（3）為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的試驗(yàn)成果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37℃。要使該試驗(yàn)所得的成果可靠，還應(yīng)該同步在另一平板上接種作為對(duì)照進(jìn)行試驗(yàn)。（4）培養(yǎng)20小時(shí)后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這闡明湖水樣品中有種細(xì)菌。一般說(shuō)來(lái)，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越。恒溫箱無(wú)菌水多大2.（2023.寧夏高考）（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過(guò)程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮、和滲透壓等條件。因?yàn)樵摷?xì)菌具有體積小、構(gòu)造簡(jiǎn)樸、變異類型輕易選擇、、等優(yōu)點(diǎn)，所以常作為遺傳學(xué)研究的試驗(yàn)材料。（2）在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為預(yù)防雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行（填“消毒”或“滅菌”）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和（填“消毒”或“滅菌”）；靜止空氣中細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能。溫度酸堿度易培養(yǎng)生活周期短滅菌消毒損傷DNA的構(gòu)造（3）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、屢次反復(fù)外，還應(yīng)確保待測(cè)樣品稀釋的。（4）一般，對(duì)取得的純菌種還能夠根據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的。（5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)措施是、。。（6）若用大腸桿菌進(jìn)行試驗(yàn)，使用過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)處理后才干丟棄，以預(yù)防培養(yǎng)物的擴(kuò)散。百分比合適鑒定將未接