第一章發(fā)酵工程第1節(jié)傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用發(fā)酵工程：是指利用________的特定功能，通過________技術(shù)，規(guī)?；a(chǎn)對人類有用的產(chǎn)品，它涉及菌種的____________、產(chǎn)物的____________等方面。一、發(fā)酵與傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)1．發(fā)酵的歷史：約9000年前，我們的祖先就會利用微生物將____、____等發(fā)酵成________________。2.1857年，法國微生物學(xué)家巴斯德通過實驗證明，酒精發(fā)酵是由____________引起的。3.由于________________________________________，因此利用不同微生物，通過發(fā)酵就可以生產(chǎn)出人們所需要的多種產(chǎn)物。（1）發(fā)酵的概念：人們利用________，在____的條件下，將____通過________________轉(zhuǎn)化為____________________________的過程。（2）發(fā)酵類型好氧發(fā)酵：________發(fā)酵厭氧發(fā)酵：________發(fā)酵、________發(fā)酵4.發(fā)酵原理：________________________________________________，因此利用它們既可以生產(chǎn)出人們所需要的多種產(chǎn)物。5.傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的概念：直接利用________________________________的微生物，或利用________________________________________的微生物進行發(fā)酵、制作食品的技術(shù)一般稱為傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)。6.腐乳的制作(1)參與的微生物：多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，如______、______和毛霉等，其中起主要作用的是______。(2)腐乳的特點：經(jīng)過微生物的______，豆腐中的蛋白質(zhì)被分解成小分子的____________，味道鮮美，易于____________，便于______。7.傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)(1)概念：直接利用_________中天然存在的_________，或利用前一次發(fā)酵保存下來的面團、鹵汁等________中的_________進行發(fā)酵、制作食品的技術(shù)。(2)特點:：傳統(tǒng)發(fā)酵以_________的______發(fā)酵及_________發(fā)酵為主，通常是_______________式的。(3)發(fā)酵產(chǎn)品：利用傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)制作的食品有______、______、______、______、____________等，它們是我國傳統(tǒng)飲食文化的重要組成部分。8.使用酵母制作饅頭屬于傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)嗎？理由？______________________________________________________________________________________________________________________________。二、嘗試制作傳統(tǒng)發(fā)酵食品1.相關(guān)菌種（1）乳酸菌①分布及常見菌種：乳酸菌種類很多，在自然界中分布______。常見的乳酸菌有________________________。②代謝及反應(yīng)式：乳酸菌是______（需氧、厭氧、兼性厭氧）細(xì)菌，在______的情況下能將葡萄糖分解成______，反應(yīng)簡式為：____________________________________。③生產(chǎn)應(yīng)用可用于________________________、________________________等④分布______、______、____________、__________________。（2）酵母菌①分布：酵母菌是一類單細(xì)胞______，在一些含_____量較高的水果、蔬菜表面經(jīng)?？梢园l(fā)現(xiàn)酵母菌的存在。②代謝及反應(yīng)式：酵母菌能以多種糖類作為營養(yǎng)物質(zhì)和______的來源，酵母菌是____________微生物,在有氧條件下，酵母菌進行______呼吸，大量繁殖，反應(yīng)式為：______________________________；在無氧條件下，酵母菌能進行______發(fā)酵，反應(yīng)式為：__________________________________________。③應(yīng)用及影響因素：酵母菌可用于______、____________和______等。______是影響酵母菌生長的重要因素，釀酒酵母的最適生長溫度約為______℃。（3）醋酸菌①代謝及反應(yīng)式：醋酸菌是______細(xì)菌，當(dāng)______、______都充足時能將糖分解成醋酸，反應(yīng)式為：_____________________________________________________；當(dāng)缺少______時則將乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛，再將乙醛變?yōu)榇姿幔磻?yīng)式為：________________________________________________。②應(yīng)用及影響因素：醋酸菌可用于制作各種風(fēng)味的______。多數(shù)醋酸菌的最適生長溫度為______℃。三、探究.實踐一：泡菜的制作1.制作泡菜菌種的來源:制作傳統(tǒng)泡菜是利用____________________________________來進行發(fā)酵；發(fā)酵期間，乳酸會____________，當(dāng)它的質(zhì)量百分比為____________時，泡菜的口味、品質(zhì)最佳。（2）制作泡菜發(fā)酵條件:適宜的______、嚴(yán)格控制______條件。（3）制作泡菜方法步驟:____________→____________→____________→____________①____________:用清水和食鹽配制質(zhì)量百分比為______的鹽水,并將鹽水______,冷卻待用。②____________:將______蔬菜洗凈,切成塊狀或條狀,混合均勻,晾干后裝壇,裝至______時,放入______、______、及______香辛料,繼續(xù)裝至______成滿。③____________:將______的鹽水______倒入壇中,使鹽水__________________。④____________:蓋好壇蓋,向壇蓋邊沿的水槽中_____,發(fā)酵過程中注意____,根據(jù)室內(nèi)溫度控制發(fā)酵時間。2.制作泡菜實驗分析（1）鹽的相關(guān)分析①鹽的作用：__________________及______。②鹽水濃度為質(zhì)量百分比為______。③鹽水濃度要適宜的原因：________________________________________________________________________________________________________。④鹽水煮沸的目的：______，__________________。⑤鹽水冷卻后使用的目的：________________________（或________________________________________）。（2）相關(guān)氣密性的分析①泡菜壇子使用之前要檢查密封性的目的：給泡菜壇內(nèi)創(chuàng)造__________，嚴(yán)格控制__________，利于__________。②用水密封泡菜壇的目的：給泡菜壇內(nèi)創(chuàng)造__________，嚴(yán)格控制__________。③泡菜壇應(yīng)裝至______成滿？為什么？防止_____________________________________________________，防止____________________________________________________________。（3）在冷卻后的鹽水中可加入少量“陳菜泡液”，目的是________________________________________。（4）泡菜制作過程中，是否只有乳酸菌起作用？理由？______________________________。（5）蔬菜應(yīng)新鮮的原因：________________________________________。（6）為什么含有抗生素的牛奶不易發(fā)酵為酸奶？________________________________________________________________________________。泡菜壇的發(fā)酵液表面會長出一層白膜，這層白膜是乳酸菌嗎？理由？___________________________________________________________________。制作泡菜過程中，保證壇內(nèi)乳酸菌發(fā)酵所需無氧環(huán)境的操作是：__________________________________________________________________________________。四、探究.實踐二：制作果酒和果醋（一）制作果酒：1.參與發(fā)酵的主要微生物及來源：________________________________________；2.發(fā)酵原理①許多____________________附著有大量的不同種類的____________________；②在這些酵母菌的作用下，水果可以發(fā)酵成果酒（通過__________大量繁殖，通過__________產(chǎn)酒精）；③相關(guān)反應(yīng)式：____________________________________________________________3.發(fā)酵條件：①溫度：將溫度控制在________進行發(fā)酵；②氧氣含量：氧氣充足的情況下，_________；無氧條件下，進行________________；4.制作流程:將發(fā)酵瓶、榨汁機等器具用洗潔精清洗干凈，并____________________________，晾干備用將發(fā)酵瓶、榨汁機等器具用洗潔精清洗干凈，并____________________________，晾干備用器具消毒取新鮮葡萄，________________取新鮮葡萄，________________，________________和腐爛的籽粒，瀝干沖洗葡萄榨汁裝瓶用榨汁機榨取葡萄汁，將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶（注意：榨汁裝瓶用榨汁機榨取葡萄汁，將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶（注意：要留有大約____的空間），蓋好瓶蓋將溫度控制在_____將溫度控制在______℃進行發(fā)酵，在發(fā)酵過程中，每隔______左右將瓶蓋______一點（注意：不是____________），此后______瓶蓋。發(fā)酵時間為______d.酒精發(fā)酵酒精發(fā)酵可通過可通過從____________取樣來對發(fā)酵的情況進行檢測果酒檢測果酒檢測（二）制作果醋：參與發(fā)酵的主要微生物及來源：________的醋酸菌或________的醋酸菌_；制作果醋所利用的菌種屬于__________，與釀造果酒所需菌種相比較，該菌種在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的主要特點是________________________________________________。發(fā)酵原理①在________的條件下，果酒經(jīng)醋酸菌的作用可以進一步發(fā)酵成________；②當(dāng)糖源充足時，醋酸菌還可以直接將糖分解為________；③相關(guān)反應(yīng)式：________________________________________________________發(fā)酵條件：①溫度：發(fā)酵溫度為________℃；②氧氣含量：氧氣供應(yīng)_________果酒制作制作流程（以________為底物的類型為例）果酒制作打開瓶蓋，蓋上紗布當(dāng)葡萄酒制作完成后，打開瓶蓋，蓋上紗布當(dāng)葡萄酒制作完成后，_______________，________________，進行葡萄醋的發(fā)酵。發(fā)酵溫度為________℃，時間為________d。果醋檢測果醋檢測5.制作果酒實驗分析:(1)用________________________給發(fā)酵瓶、榨汁機消毒。(2)沖洗葡萄的目的：________________________。(3)沖洗1-2次即可，能否連續(xù)沖洗？為什么？____________________________________________________。(4)去梗之前沖洗還是去梗之后沖洗？________。為什么？________________________________________。(5)葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時，能裝滿嗎？________________________。為什么？a.________________________________________________________________；b.________________________________________________。(6)每隔12h左右將瓶蓋擰松一點這樣做的目的是的目的：________________。但又不打開，此后再擰緊目的是________________________________。(8)果酒制作過程中，在不滅菌的情況下，酵母菌是如何成為優(yōu)勢菌種的？____________________________________________________________________________________________________________________。(9)在制作果酒過程中，除了酵母菌，是否還有其他微生物生長？它們會對果酒發(fā)酵產(chǎn)生影響嗎？如果有，如何避免這種影響？_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。（10）如何檢測果酒的發(fā)酵情況________________________________________________________________。（11）葡萄酒呈現(xiàn)深紅色的原因：_______________________________________________________________。（12）果酒制作中，酒精含量達(dá)一定程度后不變，CO2也不產(chǎn)生，原因可能是_____________________________________________________________。6.制作果醋的實驗分析（1）在制作果醋的過程中，酵母菌是否還會繼續(xù)發(fā)酵？____________________________________________________________________________________________________。醋酸菌從何而來？______________________________________________________________________________________________________________________________。采用什么措施可以加快果醋的制作？__________________________________________________________________________________________________________________________________________________。（4）在果酒和果醋制作中，哪些做法可防止發(fā)酵液被污染？a.________________________________________________________________________________________；b.________________________________________________________；c.________________________________________________________。（6）如何檢測果醋的發(fā)酵情況？_______________________________________________________________。第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用微生物是________________________的統(tǒng)稱，包括________、________、________及一些_________等。本章中提及的微生物主要指用于發(fā)酵的________________。一、微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.________________________________是研究和應(yīng)用微生物的前提（即發(fā)酵工程的重要基礎(chǔ)）。2.在實驗室培養(yǎng)微生物：一方面：________________________________________（培養(yǎng)基）。另一方面：________________________________________________（無菌技術(shù)）。（一）培養(yǎng)基的配制1．培養(yǎng)基概念：________________________________________________________________。2.培養(yǎng)基作用：用以________、________、________、________微生物或積累其代謝物。3．培養(yǎng)基的分類（按照物理性質(zhì)分類）（1）液體培養(yǎng)基：________________，呈________狀態(tài)。用途：________________________________。目的是________________________。（2）固體培養(yǎng)基：含凝固劑（如瓊脂），呈________狀態(tài)。用途：________________等。培養(yǎng)基的基本成分：成份：各種培養(yǎng)基一般都含有______、______、______和______等營養(yǎng)物質(zhì)，此外還需要滿足微生物生長對______、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及______的需求。如培養(yǎng)乳酸菌時需要在培養(yǎng)基中添加______培養(yǎng)霉菌(真菌)時需將培養(yǎng)基調(diào)至______，培養(yǎng)細(xì)菌時需將培養(yǎng)基調(diào)至______或______，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供______的條件。微生物培養(yǎng)基需要氮源，這是因為：__________________________________________。下表是某微生物培養(yǎng)基的成分，該培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)______（自養(yǎng)、異養(yǎng)）型微生物。若除去①，此培養(yǎng)基______（能、不能）培養(yǎng)圓褐固氮菌，原因是：_________________________________________________________________________________________________________________。編號①②③④⑤成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量/g0.44.00.50.5100mL4.如何將液體培養(yǎng)基制成固體培養(yǎng)基？__________________。6.實驗室中最常用的培養(yǎng)基之一：__________________。7.微生物在瓊脂固體培養(yǎng)基的____________生長，可以形成菌落。9.牛肉膏和蛋白胨來源于____________，含有______、______和______等營養(yǎng)物質(zhì)，蛋白胨提供的主要營養(yǎng)為__________________。牛肉膏提供的主要營養(yǎng)為________________________。10.含C、H、O、N的有機物可作為異養(yǎng)型微生物的______、______、______。11.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物培養(yǎng)基的主要差別在于______。12.能否根據(jù)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類型？理由？__________________________________________________________________________________________。12.無機氮源能給自養(yǎng)型微生物提供能源嗎？理由？___________________________________________________________________________________。13.無機鹽除了可以調(diào)節(jié)酸堿平衡、維持一定的滲透壓之外，還能有什么功能？____________________________________________________________________________________________________________。14.是否所有培養(yǎng)基中都必須添加碳源、氮源？理由？_______________________________________________________________________________________。二、無菌技術(shù)1．獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵：________________。無菌技術(shù)應(yīng)圍繞________________________展開。無菌技術(shù)主要包括______和______。2.無菌技術(shù)（______和______）工作主要包括兩個方面：(1)對操作的______、操作者的______和______進行______和______。(2)對用于微生物培養(yǎng)的______、______和______等進行滅菌。3.做好消毒滅菌工作后，要注意：實驗操作時應(yīng)避免____________________________與____________接觸。4.為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，應(yīng)如何操作？________________________________________________。5.無菌技術(shù)除用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，_________________________________________________________________。為達(dá)到后一目的，操作者在實驗室中不可____________，離開實驗室時__________________。另外，為避免污染環(huán)境，我們對使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進行____________。6.消毒:(1)概念：是指______________________________________________________________________________。(2)方法:____________、____________、____________。a.日常生活中經(jīng)常用到____________，操作方法：100℃煮沸5～6min；b.對于一些不耐高溫的液體如牛奶，可使用____________，操作方法：62～65℃消毒30min或80～90℃消毒30s-1min；c.生物活體、水源等還可使用___________進行消毒，操作方法：用______擦拭雙手、用______消毒水源等；d.接種室、接種箱或超凈工作臺在使用前，可以用______照射，操作方法：紫外線照射30min。7.滅菌:（1）概念：是指__________________________________________________________________。（2）方法:______滅菌法、______滅菌法、______滅菌。a.培養(yǎng)基等一般用______滅菌法，______滅菌是一種利用沸水、流通蒸汽或____________進行滅菌的方法，其中___________滅菌的效果最好，操作方法：物品放入______________內(nèi),100kPa，溫度121℃,15～30min。b.耐高溫的和需要保持干燥物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)、金屬用具等，可以用______滅菌法，操作方法：物品放入____________,160～170℃加熱2～3h。c.接種過程中，微生物的涂布器、接種環(huán)、接種針或其他金屬用具、試管口、瓶口通過物品______滅菌法來滅菌，操作方法：直接在______________________________。9.酒精消毒的最適范圍是__________________________________。原因：________________________________________________________________________________________________________________________。11.用紫外線進行消毒時，可以怎么做來加強消毒效果？__________________________________________。12.灼燒滅菌是將需滅菌的用具直接在酒精燈火焰的____________灼燒，優(yōu)點是__________________。13.培養(yǎng)基的滅菌方法____________（濕熱滅菌法）；培養(yǎng)皿的滅菌方法__________（也可用濕熱滅菌法）。14.下圖表示對______的______滅菌，其正確的操作順序應(yīng)是____________。（P11“教材圖”）三、微生物的純培養(yǎng)1．純培養(yǎng)概念：在微生物學(xué)中，將接種于______內(nèi)，在合適條件下形成的含__________________的群體稱為培養(yǎng)物。2.純培養(yǎng)物概念：由__________________所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得____________的過程就是純培養(yǎng)。______一般是由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。3.微生物純培養(yǎng)的步驟：微生物的純培養(yǎng)包括____________、______、______、______和______等步驟。5.微生物純培養(yǎng)的原理：采用____________和__________________將______微生物______。6.在固體培養(yǎng)基上，之后得到的單菌落一般是由單個微生物形成的__________________。四、酵母菌的純培養(yǎng)（以酵母菌的純培養(yǎng)為例）1.酵母菌的純培養(yǎng):用__________________培養(yǎng)酵母菌。菌落：___________________________________________________________________________________________________。一個單菌落即一個______。______通?？梢杂脕碜鳛殍b定菌種的重要依據(jù)。獲得單菌落的方法：____________和____________法。2.酵母菌的純培養(yǎng):制備培養(yǎng)基、接種和分離酵母菌、培養(yǎng)酵母菌。(1)制備培養(yǎng)基：制備馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基的正確順序為：________________________（用文字、“→”表示）。(2)接種和分離酵母菌：通過__________在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步___________到培養(yǎng)基表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后______，可以分離得到____________。(3)培養(yǎng)酵母菌：完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板（一般做______組，目的：__________________）和一個______的平板______，放入______℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的__________________中培養(yǎng)_______h。制備培養(yǎng)基的步驟：①____________：稱取______的馬鈴薯200g,切成小塊，加水1000ml，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用______過濾。向濾液中加入20g______（也可用蔗糖代替）、15-20g______，用蒸餾水定容至1000ml。②______：將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至______中，塞上棉花塞，包上______，并用______，再放入_________________，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌______min。將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入____________內(nèi)，在______℃下滅菌______h。在滅菌前,用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是________________________________________________________________________。③____________：使培養(yǎng)基冷卻到______左右，在____________附近倒平板。3.制備培養(yǎng)基實驗注意事項（1）培養(yǎng)基滅菌后為什么要冷卻到50℃左右時開始倒平板？_____________________________________________________________________。（2）為什么倒平板和接種整個過程要在酒精燈火焰旁進行？因為_____________________________________________________________________。拔掉瓶塞后為什么要使錐形瓶的瓶口通過火焰？______________________________________________。（3）在倒平板的過程中，若不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？______。為什么？______________________________________________________。（4）倒平板時，能將培養(yǎng)皿的皿蓋拿下來放在一邊嗎？______。應(yīng)如何做？____________________________________________________。為什么？____________________________________。（5）剛倒完平板，可以直接倒置嗎？____________________________________。（6）培養(yǎng)基冷凝后，為什么要將培養(yǎng)皿倒過來放置（倒置）？_______________________________________________________________________________________________。（4）接種和分離酵母菌驗注意事項①微生物接種中的平板劃線法接種是指__________________________________________的操作，將______________________________到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到____________。②連續(xù)劃線的目的：__________________________________________________________________。③平板劃線法過程中，接種環(huán)蘸了_____次菌液；若分五個區(qū)劃線，則接種環(huán)共需灼燒______次；灼燒次數(shù)＝劃線次數(shù)＋______。⑤灼燒后的接種環(huán)可以直接劃線嗎？______。應(yīng)如何操作？____________________________________。目的？____________________________________。⑥從第二次劃線開始，都應(yīng)__________________________________________劃線。⑦整個操作中灼燒接種環(huán)的不同目的：第一次灼燒（取菌種前）：______________________________________________________________________。以后每次劃線前灼燒：____________________________________________________________________________________________________________。劃線結(jié)束灼燒：__________________________________________________________________。⑧除第一次劃線外，每次劃線都從上一次劃線的末端開始，目的是什么？__________________________________________________________________________________________。⑨為什么劃線時要注意不能劃破培養(yǎng)基？a.________________________________________________；b.__________________________________________________________________________________________。=10\*GB3⑩用平板劃線法接種劃線某個平板培養(yǎng)后，第一區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落，其他環(huán)線有菌落。造成劃線無菌落的原因：a.________________________。b._______________________________________________________________________。如何確定所倒平板未被雜菌（主要是細(xì)菌）污染？_____________________________________________________________________________________________________________________________________。8.未接種的培養(yǎng)基直接培養(yǎng)起什么作用？__________________________________________________________________________________________________________________________________________________。9.若未接種的培養(yǎng)基表面出現(xiàn)菌落，說明了什么？________________________________________________。10.注意：（1）在實驗室中，切不可飲食，離開實驗室時一定要______，以________________________；（2）使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進行______處理，以免污染環(huán)境。11.下圖①～⑥為平板劃線法接種圖示，①操作是將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。②操作是在______冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的棉塞。③操作是________________________。④操作是在火焰附近用接種環(huán)蘸取____________。⑤操作是__________________，并塞上棉塞。⑥操作是：在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)______________________________，蓋上皿蓋。然后再______接種環(huán)，待其冷卻后，從__________________開始往____________內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線即可得到圖⑦培養(yǎng)皿。在重復(fù)劃線時，注意____________________________________。二、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)（一）選擇培養(yǎng)基1.實驗室篩選原理：人為提供有利于______生長的條件(包括__________________等)，同時____________其他微生物的生長。2.實例：水生棲熱菌能在_______℃的高溫條件下生存，而____________在此條件下不能生存。據(jù)此，科學(xué)家從美國黃石國家公園的熱泉中篩選出水生棲熱菌,進而從這種菌中提取出耐高溫的DNA聚合酶。這種酶目前已被廣泛用于__________________的____________(PCR)。3.選擇培養(yǎng)基定義：在微生物學(xué)中，將允許____________的微生物生長，同時____________其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。4.尋找耐高溫DNA聚合酶的思路是什么？____________________________________。5.從環(huán)境中獲得某種特定種類的微生物的原理：______________________________________________________________________________________________________________________________________________。（1）在被石油污染的土壤中可以篩選____________微生物。（2）在冰川凍土層可以篩選______微生物。（3）漆酶屬于木質(zhì)降解酶類，分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品是生活污水嗎？______。6.選擇培養(yǎng)基三種篩選方法：（1）利用____________進行選擇培養(yǎng)。某種營養(yǎng)缺陷的微生物不能正常生長（2）利用____________進行選擇培養(yǎng)。添加殺傷性物質(zhì)，有抗性的可以生長，無抗性的死亡（3）利用__________________進行選擇培養(yǎng)。調(diào)節(jié)溫度、pH等生長條件，只有適應(yīng)的可以生長8.選擇培養(yǎng)基的制備原理：__________________________________________________________________________________________________。（二）微生物的選擇培養(yǎng)（以培養(yǎng)土壤中分解尿素的細(xì)菌為例）1.__________________（活菌計數(shù)法），其基礎(chǔ)操作包括：__________________和____________。2.稀釋涂布平板法方法概述：由于土壤細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到特定微生物的純培養(yǎng)物，必須要對土壤進行____________，然后再將菌液______到制備好的____________上。3.平板劃線法的作用：__________________。稀釋涂布平板法的作用：________________________________________________。4.分離純化微生物具體含義：__________________________________________________________________。5．稀釋涂布平板法分離分解尿素的細(xì)菌操作過程如下：（1）系列稀釋操作：如下圖所示，在編號為1×102～1×107試管中分別盛有9mL______；將10g土樣加入盛有____________的錐形瓶中，___________；取1mL上清液加入盛有__________的試管中，依次__________。涂布平板操作：第1步：取菌液——取0.1mL菌液，滴加到______表面；第2步：涂布器消毒——將涂布器浸在盛有______的燒杯中；第3步：涂布器滅菌——將涂布器放在火焰上灼燒，待______________________________后，再進行涂布；第4步：涂布平板：用涂布器將______均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可____________，使涂布均勻。（3）培養(yǎng)：待__________________后，將平板______，放入____________中培養(yǎng)1～2d。在涂布有___________菌液的平板上就可以觀察到分離的______。6.注意：①在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多（0.1ml）的原因是_______________________________________________________________________。梯度稀釋原因：______________________________________________________；目的：_______________________________________________________。②梯度稀釋中，每次取樣前需用手指輕壓移液管橡皮頭，吹吸三次，目的是________________________。③涂布器浸在酒精中的主要目的是____________________________________；為保證菌液均勻分布，應(yīng)在涂布時____________。④將涂布器從酒精中取出時，要讓多余的酒精在燒杯中______，然后再放在火焰上灼燒。不要將過熱的涂布器放到盛有酒精的燒杯中，以免____________。⑤a.以上操作均在____________旁進行，防止____________。b.若要分離并統(tǒng)計活菌數(shù)，應(yīng)選用__________________。c.平板劃線法不能用于活菌計數(shù)的原因是__________________。7.③號試管稀釋倍數(shù)為______。（三）微生物的數(shù)量測定微生物的數(shù)量測定方法：間接計數(shù)法——________________________直接計數(shù)法——__________________法、______法。1.稀釋涂布平板法（1）原理：當(dāng)樣品的______足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個______，來源于樣品稀釋液中的____________。通過統(tǒng)計平板上的______，就能推測出樣品中大約含有多少______。（2）計數(shù)原則：一般選擇菌落數(shù)為______的平板進行計數(shù)。樣品的______將直接影響平板上的菌落數(shù)目，通常選用____________的樣品液進行培養(yǎng)。在同一稀釋度下，應(yīng)至少對______個平板進行重復(fù)計數(shù)，然后求出______。____________將直接影響平板上的菌落數(shù)目。（3）注意事項：用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目時，統(tǒng)計的______往往比______的實際數(shù)目少，這是因為當(dāng)______________________________時，平板上觀察到的只是______菌落。因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用______而不是用活菌數(shù)來表示。2.顯微鏡直接計數(shù)法：該方法利用特定的______計數(shù)板或______計數(shù)板，在______下觀察、計數(shù)，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量，統(tǒng)計的結(jié)果一般是____________的總和。3.稀釋涂布平板法結(jié)果分析：（1）統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目______；這是因為________________________________________________________________。（2）統(tǒng)計結(jié)果一般用______而不是用活菌數(shù)來表示。4.C代表某一稀釋度下平板上生長菌落數(shù)的平均值；V代表涂布平板時吸取的稀釋液體積數(shù)值(mL)；M代表稀釋倍數(shù)；則每g樣品中的細(xì)菌數(shù)=____________。5.將1ml水樣稀釋100倍，在三個平板上用涂布法分別接入0.1ml稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為______________________________。6.____________、____________是成功統(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵。7．顯微鏡直接計數(shù)法原理：利用特定的____________或____________在顯微鏡下觀察、計數(shù)，然后再計算____________的樣品中微生物的數(shù)量。8.顯微直接計數(shù)法優(yōu)點：____________。9.顯微直接計數(shù)法缺點：（1）統(tǒng)計結(jié)果一般是__________________。原因：__________________。（2）個體______的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察。（四）土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)1.實驗原理：絕大多數(shù)微生物都能利用______，但是只有能合成______的微生物才能分解尿素，利用__________________的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出____________的細(xì)菌。2.實驗步驟：____________→____________→________________________→________________________。（1）土壤取樣：①取樣地點要求：酸堿度接近______的______土壤。原因：________________________。②取樣過程：取樣時一般要____________。原因：____________________________________。③注意事項：取土樣時用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要______。（2）制備培養(yǎng)基:①作對照：________________________。作用：__________________________________________。②實驗組：____________。特點：__________________。培養(yǎng)基中KH2PO4和Na2HPO4的作用：__________________。尿素作用：______。葡萄糖作用：______。（3）樣品的稀釋與涂布平板:①1g土的體積約為___ml，10g土加入到90ml無菌水，相當(dāng)于稀釋了______倍。假如104稀釋度下涂布的3個平板的菌落數(shù)分別為42、40和38，則1ml稀釋液中的菌株數(shù)為______，104稀釋度的試管中的菌株數(shù)為______，102稀釋度的試管中的菌株數(shù)為______，101稀釋度的錐形瓶中的菌株數(shù)為______。101稀釋度的錐形瓶中的菌株來自于10g土，所以1g土中的菌株數(shù)為______。②每個濃度至少設(shè)置____個平板。1.2.3平板是__________組，為______培養(yǎng)基，做3組的目的_________。4是______組，為____________培養(yǎng)基。③整個實驗還需要設(shè)置2個平板，是哪兩個？________________________________________________。目的：__________________________________________。④為獲得菌落數(shù)在____________之間適于計數(shù)的平板，測細(xì)菌時，一般選用____________倍稀釋的稀釋液進行平板培養(yǎng)。⑤在初次實驗中，對于稀釋的范圍沒有把握，怎樣才能保證能從中選擇出菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)？______________________________________________________。⑥本實驗使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前____________，例如，在標(biāo)記培養(yǎng)皿時應(yīng)該注明______、____________和平板上培養(yǎng)樣品的______等。⑦標(biāo)記時注意標(biāo)記在皿______，不能標(biāo)記在皿______。（3）微生物的培養(yǎng)與觀察（1）培養(yǎng)條件：細(xì)菌一般在____________的溫度下培養(yǎng)______。（2）觀察：每隔______統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目______時的記錄作為結(jié)果。（3）為什么選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果？__________________________________________。（4）一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出______的____________，如形狀、大小和顏色等。（4）結(jié)果分析①說出下列各組培養(yǎng)基的目的：3組接種的選擇培養(yǎng)基：____________________________________。1組接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：____________________________________。不接種的選擇培養(yǎng)基：__________________________________________。不接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：__________________________________________。②說出以下現(xiàn)象對應(yīng)的結(jié)果分析：現(xiàn)象分析未涂布培養(yǎng)基上無菌落生長未涂布培養(yǎng)基上有菌落生長牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目③樣品稀釋操作成功的標(biāo)志是什么？______________________________。④得到的菌落一定是分解尿素的細(xì)菌嗎？______________________________。注意：1.如何設(shè)計培養(yǎng)基篩選分解尿素的細(xì)菌？__________________________________________________________________________________________________。2.該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點和不同點？__________________________________________________________________________________________。3.在選擇培養(yǎng)基上生長的一定是所選擇的目的菌嗎？_____________________________________________________________________________________________。4.怎么證明一個選擇培養(yǎng)基具有選擇性？__________________________________________________________________________________________________________________________________________________。5.尿素可為尿素分解菌提供氮源的原因？尿素可為尿素分解菌提供碳源嗎？為什么？____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。（五）進一步探究——分解尿素細(xì)菌的進一步鑒定（自選）1.原理:分解尿素細(xì)菌合成的________將尿素分解為____________，NH3溶于水會電離出NH4+和OH-，使培養(yǎng)基的____________，pH升高，因此可以通過__________________來判斷是否發(fā)生了該化學(xué)反應(yīng)，進而判斷該菌是否為尿素分解細(xì)菌；2.方法:在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入____________，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑將______。液體培養(yǎng)基可以直接看液體的變色情況；固體培養(yǎng)基上可以觀察__________________；紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說明分解能力______。第3節(jié)發(fā)酵工程及其應(yīng)用一、發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié)1.發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié)：下圖為發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié)圖，圖中①～⑤處所填寫的內(nèi)容依次是：①__________；②______；③______；④______；⑤__________________。(1)選育菌種①選育菌種目的：__________________。②選育方法（菌種來源）：可以從__________中篩選出來，也可以通過__________或_______________獲得。③)菌種選育的重要性（意義）:優(yōu)良的菌種不僅具有_____，__________，其發(fā)酵產(chǎn)品的__________、__________等優(yōu)點，它往往還會賦予發(fā)酵產(chǎn)品_______________，因此_______________________________________________________________。（2）擴大培養(yǎng)：①目的：_________________________。②原因：____________________一般較大，因此，需要接入的_______________（數(shù)目_____）。③擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基：一般為_____培養(yǎng)基。（3）配制培養(yǎng)基的要求：①在_____確定之后，（結(jié)合菌種代謝特點）選擇原料制備培養(yǎng)基。②在生產(chǎn)實踐中，培養(yǎng)基的配方要經(jīng)過_______________才能確定。（即_______________）滅菌①目的：避免因雜菌污染而影響產(chǎn)品的_____和_____。②培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須經(jīng)過嚴(yán)格的滅菌原因：____________________________________________________________________________________。（4）接種：擴大培養(yǎng)的菌種和滅菌后的__________加入發(fā)酵罐中。大型發(fā)酵罐有計算機控制系統(tǒng)，能對發(fā)酵過程中的_____、_____、_____、_____、通氣量、攪拌、泡沫和_____等進行監(jiān)測和控制。（5）發(fā)酵罐內(nèi)_____下圖為發(fā)酵罐示意圖，圖中①～⑤處所填寫內(nèi)容依次為：①__________；②__________；③_____；④__________；⑤_____。①__________是發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)。②發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵嚴(yán)格控制發(fā)酵條件的原因：a.______________________________________________________________________；b.______________________________________________________________________。③發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵要求：在發(fā)酵過程中，要隨時檢測培養(yǎng)液中的__________、__________等，以了解發(fā)酵進程。還要及時添加必需的__________，要嚴(yán)格控制_____、_____和__________等發(fā)酵條件。④不同發(fā)酵條件的影響實例——谷氨酸發(fā)酵a.在_____和__________條件下會積累谷氨酸。b.在_____條件下則容易生成谷氨酰胺和N-乙酰谷胺酰胺。⑤現(xiàn)代發(fā)酵工程使用的發(fā)酵罐的優(yōu)點：均有_______________，能對發(fā)酵過程中的溫度、pH、溶氧量、罐壓、通氣量、攪拌、泡沫和營養(yǎng)等進行_____和_____，還可以進行__________，使發(fā)酵全過程處于__________。(6)產(chǎn)品的分離、提純①產(chǎn)品的分離、提純目的：__________。②產(chǎn)品的兩種形式：_______________、__________。③分離、提純產(chǎn)物采取手段：如果發(fā)酵產(chǎn)品是微生物細(xì)胞本身，可在發(fā)酵結(jié)束之后，采用_____、_____等方法將菌體_____和_____得到產(chǎn)品。如果產(chǎn)品是代謝物，可根據(jù)產(chǎn)物的性質(zhì)采取適當(dāng)?shù)腳____、_____和_____措施來獲得產(chǎn)品。2.微生物菌種資源豐富，選擇發(fā)酵工程用菌時，需要考慮哪些因素？（1）___________________________________。（2）___________________________________。（3）___________________________________。（4）___________________________________。3.怎樣對發(fā)酵條件進行調(diào)控以滿足微生物的生長需要？（1）_________________________________________；2）___________________________________________；（3）________________________________________；4）___________________________________________；（5）__________________________________________________________________________________________________________________________________。4與傳統(tǒng)的手工發(fā)酵相比，在啤酒的發(fā)酵生產(chǎn)過程中，能明顯提高啤酒的產(chǎn)量和質(zhì)量的工程手段有：______________________________________________________________________________等。5.在進行發(fā)酵生產(chǎn)時,排出的氣體和廢棄培養(yǎng)液等能直接排放到外界環(huán)境中嗎?為什么？_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。6.注意：（1）谷氨酸發(fā)酵常用菌種為_______________；（2）谷氨酸棒狀桿菌的代謝類型為_______________，其與有氧呼吸有關(guān)的酶主要存在于____________上；（3）C:N的數(shù)值也會影響谷氨酸發(fā)酵過程：C:N=4:1時，菌體大量繁殖，谷氨酸產(chǎn)生量較_____；C:N=3:1時，菌體繁殖受抑制，谷氨酸產(chǎn)生量較_____