人乳頭瘤病毒在口腔潛在性癌性病損和口腔鱗狀細(xì)胞癌中的檢測(cè)

人類乳頭瘤（pv）的檢測(cè)率為0.85%。除了已知的飲酒、吸煙等危險(xiǎn)因素外,越來(lái)越多的證據(jù)表明HPV感染也與OSCC的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后有著密切的關(guān)系,其關(guān)系的闡明有助于推動(dòng)口腔癌診療思路的變革。本文將從HPV可能的致癌機(jī)制的最近進(jìn)展以及二者的臨床流行病學(xué)研究進(jìn)行綜述。1期區(qū)和晚期區(qū)HPV基因編碼區(qū)由8個(gè)開(kāi)放性閱讀框構(gòu)成,分為早期區(qū)(E區(qū))和晚期區(qū)(L區(qū))。E區(qū)編碼E1-7蛋白,其中高危型HPV(HR-HPV)編碼的E5-7蛋白具有致癌性,可以轉(zhuǎn)化、刺激細(xì)胞生長(zhǎng)。1.1維持細(xì)胞的繁殖能力1.2v誘導(dǎo)肺癌事件大多數(shù)HPV相關(guān)的惡性腫瘤呈現(xiàn)染色體雜合性喪失和染色體重排的特點(diǎn)。基因組的不穩(wěn)定性被認(rèn)為是HPV誘導(dǎo)癌癥的早期事件,發(fā)生在病毒DNA整合宿主基因組事件之前。高危型E6、E7可獨(dú)立誘導(dǎo)正常細(xì)胞基因組不穩(wěn)定。E7通過(guò)增加CDK2活動(dòng),以及和γ-微管蛋白作用,促使中心粒合成異常,誘導(dǎo)細(xì)胞多極有絲分裂。同時(shí),E6、E7還可誘導(dǎo)DNA損傷,激活A(yù)TM-ATR途徑增加基因組的不穩(wěn)定性。1.3抑制細(xì)胞死亡1.3.1fibuliin作用E6和黏著斑相關(guān)蛋白paxillin和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白fibulin作用阻止細(xì)胞失巢凋亡,允許在缺乏細(xì)胞外基質(zhì)附著的情況下細(xì)胞生長(zhǎng)。E7可以和p600作用阻止失巢凋亡,允許錨定非依賴性生長(zhǎng),促進(jìn)癌變。1.3.2fadd和caspase-8作用高危型E6蛋白可以通過(guò)和TNFR1(TNFreceptor1),FADD(FAS-associatedproteinwithdeathdomain),caspase-8作用,以及降解前凋亡蛋白BAX和BAK,抑制生長(zhǎng)抑制細(xì)胞因子所引發(fā)的凋亡信號(hào)。1.3.3防止干擾及活性E6可以通過(guò)和IRF3(IFNregulatoryfactor3)作用以及抑制p53活性,阻止干擾素應(yīng)答。E7還可以和IRF1(IFNregulatoryfactor1)和p48作用,使感染細(xì)胞免疫逃逸,持續(xù)感染。2同方法的檢測(cè)OSCC的發(fā)病是一個(gè)多因素、多步驟、多階段的復(fù)雜過(guò)程。有學(xué)者運(yùn)用不同方法對(duì)正?？谇火つ?、口腔潛在性癌性病損(OPMD),包括口腔白斑(oralleukoplakia,OL)和口腔扁平苔蘚(orallichenplanus,OLP)以及OSCC中的HPV進(jìn)行檢測(cè)。2.1典型個(gè)體測(cè)試明確正常人口腔黏膜的HPV感染率,對(duì)研究HPV與OSCC的關(guān)系有重要意義,但是以前沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)的大規(guī)模對(duì)正常人群的調(diào)查。2012年俄亥俄州立大學(xué)綜合腫瘤中心病毒腫瘤研究所MauraL.Gillison博士等人對(duì)此進(jìn)行了調(diào)查研究。作為美國(guó)全國(guó)健康和營(yíng)養(yǎng)調(diào)查(NHANES)研究的一部分,該分析納入了5579名14~69歲的受試者。他們首先接受30秒鐘口服灌洗劑漱口,從口腔脫落細(xì)胞中提取純化DNA,并進(jìn)行PCR擴(kuò)增以及特異化雜交實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)HPV亞型。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化采訪獲得受試者人口學(xué)和行為學(xué)數(shù)據(jù)。利用NHANES樣本比例估算美國(guó)人口中HPV的流行程度。實(shí)驗(yàn)主要指標(biāo)為口腔HPV感染率。分析顯示:在14~69歲的男性和女性中,口腔中HPV的感染率為6.9%,其中HPV16型感染率為1.0%?？谇恢蠬PV感染率隨年齡變化呈雙峰模式,在30~34歲及60~64歲時(shí)達(dá)峰值,分別為7.3%和11.4%。對(duì)任何口腔HPV感染而言,男性的感染率均顯著高于女性(10.1%對(duì)3.5%)。與沒(méi)有性接觸史的受試者相比,有性接觸史的受試者的口腔HPV感染較多見(jiàn)(7.5%對(duì)0.9%),并隨性伴侶數(shù)及每日吸煙量的增加而增高。在多變量模型中,年齡、性別、性伴侶數(shù)及當(dāng)前的每日吸煙量均與口腔中HPV感染獨(dú)立相關(guān)。2.2hpv與opmd、非標(biāo)準(zhǔn)病毒的關(guān)系近年Szarka研究報(bào)道了HPV在口腔扁平苔蘚、口腔白斑、口腔鱗狀細(xì)胞癌的檢出率分別為:32.8%、40.9%、47.7%;并且發(fā)現(xiàn)口腔潛在性癌性病損的惡變潛能隨著HPV檢出率的增加而增加。這一結(jié)果和Miller的meta分析結(jié)果是一致的。最近Syrjanen等通過(guò)對(duì)1121篇中符合納入標(biāo)準(zhǔn)的39篇中956例OPMD和其對(duì)照的675例進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)HPV和OPMD(OR=3.86)密切相關(guān);并且在OPMD的亞組分析中,HPV和口腔白斑(OR=4.03),口腔扁平苔蘚(OR=5.12),上皮異常增生(OR=5.10)也一定的相關(guān)性,指出HPV和OPMD之間有很強(qiáng)的因果聯(lián)系。同年Jayaprakash等對(duì)1985-2010年間報(bào)道的口腔和口咽異常增生上皮HPV16/18感染率的22篇文獻(xiàn)分析得出,HPV16/18在口腔病損的陽(yáng)性率是25.3%;HPV16/18在上皮異常增生(OR=3.29)和侵襲性癌(OR=3.43)的陽(yáng)性率是正常組織的3倍;然而,HPV16/18陽(yáng)性率在異常增生病損和癌性病損之間,在輕度、中度、重度異常增生病損之間卻沒(méi)有顯著差別;他們認(rèn)為HPV16/18感染發(fā)生在口腔和口咽癌變過(guò)程的早期階段。2.3hp和口腔細(xì)胞癌osc2.3.1hp檢出率的綜合分析2.3.2pv陽(yáng)性的oscc患者的臨床預(yù)后近年Chen等應(yīng)用原位雜交(ISH)和免疫組化檢測(cè)p16、p53表達(dá)的分子技術(shù),對(duì)65例OSCC-TMA(tissuemicro-arrays)檢測(cè),發(fā)現(xiàn)HPV和OSCC的大小以及OSCC的階段關(guān)系顯著;同時(shí)Kaplan-Meierplot分析顯示HPV陽(yáng)性的OSCC有較好的預(yù)后;并指出HPV陽(yáng)性的OSCC具有獨(dú)特的臨床和病理學(xué)特點(diǎn),其發(fā)生可能不同于其他的癌變機(jī)制。最近另一篇研究中,Lee等調(diào)查跟蹤了2004-2006年間的173名接受根治手術(shù)和輔助治療的晚期OSCC患者,發(fā)現(xiàn)HPV感染在晚期OSCC患者并不少見(jiàn)(22%)同時(shí)二者具有臨床相關(guān)性,單一HPV16陽(yáng)性患者的生存率較差,其轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)是HPV陰性患者的3倍。雖然HPV陽(yáng)性O(shè)SCC患者預(yù)后的研究結(jié)果不盡相同,但可以肯定HPV和部分OSCC患者的臨床預(yù)后密切相關(guān)。根據(jù)這些研究報(bào)道可以相信,HPV感染與部分OSCC發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Lingen最新的研究估計(jì)這部分病例約占OSCC的5.9%。3pv與oscc的關(guān)系HPV證實(shí)至少與45%-90%的口咽癌發(fā)病密切相關(guān),但HPV在OSCC發(fā)生發(fā)展的具體作用還不是很清楚,即:HPV僅僅參與了OSCC的始發(fā)階段,還是全程參與了OSCC的發(fā)生發(fā)展;亦或是HPV沒(méi)有參與始發(fā)階段,而是二次感染了OSCC,以類似子宮頸癌中的機(jī)制,參與了OSCC的發(fā)展。HPV是OSCC發(fā)生發(fā)展的潛在的危險(xiǎn)因素,但肯定不是最重要的危險(xiǎn)因素,可能隨著傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素(吸煙、飲酒)的減弱,HPV感染會(huì)相應(yīng)變得重要,HPV相關(guān)的OSCC比例可能會(huì)相應(yīng)上升。HPV是否是OSCC的病原體仍有爭(zhēng)議。如果預(yù)防性HPV疫苗的使用能夠消除OSCC或顯著降低OSCC發(fā)生率,則可以肯定HPV是OSCC的病原體。由于HPV分型的多樣性及OSCC發(fā)生發(fā)展的復(fù)雜性,HPV與OSCC關(guān)系的闡明有賴于更多的相關(guān)的分子機(jī)制和臨床流行病學(xué)研究。Rb家族蛋白通過(guò)調(diào)控E2F家族轉(zhuǎn)錄因子控制G1/S期轉(zhuǎn)換。高危型E7蛋白可以和Rb結(jié)合,破壞Rb-E2F復(fù)合體,組成性表達(dá)E2F應(yīng)答基因(cyclinA和cyclinE),促使感染細(xì)胞進(jìn)入S期,促進(jìn)DNA合成。E7也可以直接和E2F因子和組蛋白去乙酰化酶(HDACs)作用影響S期基因表達(dá)。E7通過(guò)泛素依賴途徑降解Rb家族,使低水平E7也能阻止Rb、p107、p103和E2F家族作用,廢止Rb的其他作用(DNA修復(fù),維持基因組完整性)。CDK2可通過(guò)和cyclinE和cyclinA作用控制G1/S期轉(zhuǎn)換。高危型E7蛋白羧基端和CDK抑制因子p21、p27結(jié)合,中和其抑制效應(yīng),使CDK2維持較高的活性。同時(shí),高危型E7也可以通過(guò)RB、p107、p130間接和cyclinE/A-CDK2復(fù)合體結(jié)合,使CDK2持續(xù)發(fā)揮作用。高危型E7和Rb-E2F及其他細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子作用,使p53水平升高,增加了表達(dá)E7細(xì)胞的凋亡易感性。而高危型E6蛋白可通過(guò)E6-E6AP-p53三聚復(fù)合體降解p53,以及和組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶p300、CREB結(jié)合蛋白(CBP)、ADA3作用阻止p53乙?；?抑制p53應(yīng)答基因轉(zhuǎn)錄,阻止E7引發(fā)的p53依賴性凋亡。高危型E6蛋白可以通過(guò)E6AP激活端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT)和端粒酶,抑制持續(xù)增殖所導(dǎo)致的端?？s短,促進(jìn)細(xì)胞永生化。而E7激活的ALT(alternativelengtheningoftelomeres)途徑在癌癥早期則參與了端粒長(zhǎng)度的維持。1.4提升mdhci蛋白的活性E5蛋白對(duì)高危型E6、E7蛋白相關(guān)的致癌過(guò)程起促進(jìn)作用。高危型E5通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號(hào)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn),以及和BAP31,液泡H+-ATP酶作用促進(jìn)E6和E7的癌化作用。E5表達(dá)可增強(qiáng)表皮生長(zhǎng)因子受體(EG-FR)信號(hào),激活MAPK途徑,增強(qiáng)E6和E7癌化作用。E5還可以可以和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白BAP31作用,下調(diào)MHCI分子水平,阻止免疫清除感染細(xì)胞。Syrjanen等對(duì)1885例OSCC和其對(duì)照的2248例進(jìn)行分析指出,HPV在OSCC的檢出率(OR=3.98)是正常黏膜對(duì)照組的4倍。最近Katinka等發(fā)表了一篇對(duì)527篇相關(guān)文獻(xiàn)的meta分析報(bào)道:大約1/3的OSCC的基因組中含有高危型HPV16/18;HPV16,HPV18的檢出率分別是25.4%,18.1%。同期Zhu等發(fā)表