創(chuàng)新藥從研發(fā)到上市吳家虎我國新舊藥品注冊分類比較-舊版1.未在國內外上市銷售的藥品：（1）通過合成或者半合成的方法制得的原料藥及其制劑；（2）天然物質中提取或者通過發(fā)酵提取的新的有效單體及其制劑；（3）用拆分或者合成等方法制得的已知藥物中的光學異構體及其制劑；（4）由已上市銷售的多組份藥物制備為較少組份的藥物；（5）新的復方制劑；（6）已在國內上市銷售的制劑增加國內外均未批準的新適應癥。2.改變給藥途徑且尚未在國內外上市銷售的制劑。3.已在國外上市銷售但尚未在國內上市銷售的藥品：（1）已在國外上市銷售的制劑及其原料藥，和/或改變該制劑的劑型，但不改變給藥途徑的制劑；（2）已在國外上市銷售的復方制劑，和/或改變該制劑的劑型，但不改變給藥途徑的制劑（3）改變給藥途徑并已在國外上市銷售的制劑；（4）國內上市銷售的制劑增加已在國外批準的新適應癥。4.改變已上市銷售鹽類藥物的酸根、堿基（或者金屬元素），但不改變其藥理作用的原料藥及其制劑。5.改變國內已上市銷售藥品的劑型，但不改變給藥途徑的制劑。6.已有國家藥品標準的原料藥或者制劑—《藥品注冊管理辦法》（2007版）通常所說的創(chuàng)新藥就是1.1類新藥新舊藥品注冊分類比較-新版1類：境內外均未上市的創(chuàng)新藥。指含有新的結構明確的、具有藥理作用的化合物，且具有臨床價值的藥品。2類：境內外均未上市的改良型新藥。指在已知活性成份的基礎上，對其結構、劑型、處方工藝、給藥途徑、適應癥等進行優(yōu)化，且具有明顯臨床優(yōu)勢的藥品。3類：境內申請人仿制境外上市但境內未上市原研藥品的藥品。該類藥品應與原研藥品的質量和療效一致。原研藥品指境內外首個獲準上市，且具有完整和充分的安全性、有效性數據作為上市依據的藥品。4類：境內申請人仿制已在境內上市原研藥品的藥品。該類藥品應與原研藥品的質量和療效一致。5類：境外上市的藥品申請在境內上市—總局關于發(fā)布化學藥品注冊分類改革工作方案的公告（2016年第51號）對于創(chuàng)新藥，一是強調“創(chuàng)新性”，即應當具備“全球新”的物質結構，二是強調藥物具有臨床價值創(chuàng)新藥研發(fā)的流程藥物發(fā)現前研究Prediscovery藥物發(fā)現drugdiscovery臨床試驗注冊申報IND臨床前研究Preclinicaldevelopment新藥申請NDA上市銷售Marketlaunch臨床研究Clinicaldevelopment新藥研發(fā)流程-FDA藥物發(fā)現臨床前IND提交臨床試驗I期II期III期FDA審核NDA提交1個FDA審批藥物5Compounds*PhRMA2003研發(fā)費用；根據34名成員數據得出的平均值；不包括IV費用和“非分類”費用（$MM）20–100名志愿者100–500名志愿者1,000–5,000名志愿者$858.8MM10,000個化合物5年1.5年250個化合物5個化合物6年2年審批后承諾$323.5MM$414.7MM$120.6MM2年新藥研發(fā)的風險與不可預測性Thismodelprovidesamapforcreatinganopen,collaborative,andcoordinatedsystemfordrugdevelopmentinthe21stcentury.Collaborativeactivitiesincludebasicscienceandtherapeutictargetdiscovery(orangeandgreen),therapeuticdiscoveryandnonclinicalresearch(blue),regulatoryscience(purple),andclinicalresearch(pink)—allofwhichimpingeonasinglegoal:Patientaccesstomoderntherapeuticstrategies.Dottedlinesarework-aroundsoralternativepathways.—ScienceTranslationalMedicine5(171）

基礎研究或藥物發(fā)現前研究發(fā)現臨床前臨床I期臨床II期臨床III期FDA批準上市<1%7%100%新藥研發(fā)不同階段成功的機率藥物發(fā)現前研究（Pre-discovery）疾病的選擇和認識(Understandingthedisease)生物靶標的識別(Targetidentification)生物靶標的驗證(Targetvalidation)疾病的選擇和認識（Understandingthedisease)在基礎研究中，科學家們努力尋找特定疾病中發(fā)生作用的細胞和基因，以及針對特定生物參數和功能的化學或生物物質，希望能夠發(fā)現其具有類似藥物的作用保守估計目前所有的藥物治療大概只覆蓋了約700個藥物靶標，在未來最少還有近10倍左右的藥物靶標未被發(fā)現。人類基因組研究將有助于更多藥物靶標的發(fā)現。生物靶標的識別(Targetidentification)這個階段也稱為靶標發(fā)現和靶標選擇。常用的方法是以靶標為基礎或以生理為基礎靶標可以是單個基因、蛋白質或與許多不同疾病相關的蛋白質相互作用的通路?？茖W家通過各種方法來分離和識別特定的靶標，從而更好地理解靶標的功能以及與疾病之間的關系。然后設計或分離出與靶標相互作用的化合物。人類基因組測序是基于靶標方法的主要驅動力。用細胞測試和動物模型觀察與疾病有關的生理反應，如血液測試或心臟功能。化合物的測試和評價也是基于這些生理反應。如果化合物能夠影響或改變生理反應，則繼續(xù)研究下去。靶標和作用機制的鑒別會在先導化合物（leadcompound)研究到一定階段后再進行。實際應用中兩種方法會結合運用生物靶標的驗證（Targetvalidation)靶標驗證就是證明靶標與疾病相關。通過某類藥物改變靶標或與靶標結合，觀察是否導致疾病中一些預期的變化是否發(fā)生。通常在體外用細胞模型或生化測試來進行。如果測試成功則用動物模型進行體內試驗,通常用嚙齒類動物。試驗結果有助于預測化合物用于病人時的情況，同時幫助確認化合物物是否有效并值得繼續(xù)開發(fā)。轉基因動物（transgenicanimals)在靶標驗證和藥物發(fā)現過程中起著非常重要的作用。將動物基因進行修飾，使其具有某種疾病，可以用于研究藥物引發(fā)或抑制靶標的功能后的效果。雖然動物倫理方面有一些問題，但是在避免藥物用于人體試驗時出現風險起著非常重要的作用。藥物發(fā)現過程（DrugDiscoveryProcess)先導化合物的發(fā)現(LeadIdentification)早期安全性評價(EarlySafetyEvaluation)先導化合物優(yōu)化(LeadOptimization)臨床前候選化合物提名(PreclinicalCandidateCompoundNominate)先導化合物的發(fā)現（leadIdentification)先導化合物（leadcompound)，是指新發(fā)現的對某種靶標或生物模型呈現藥理活性的化合物。由于其活性不強,選擇性低,吸收性差,或毒性較大等缺點,通常不能直接藥用。但作為新的結構類型和線索物質,對先導物進行結構變換和修飾,可得到具有優(yōu)良藥理作用的藥物。獲得先導化合物可有多種途徑：在自然界生物中分離得到活性物質；基于受體蛋白的三維結構設計先導物；用組合化學方法制備化合物庫經高通量篩選；隨機篩選和虛擬篩選等方法獲得。先導化合物（leadcompound)在藥物設計時，分子的多樣性、互補性和相似性構成了設計方法的策略基礎分子的多樣性分子的互補性分子的相似性天然生物活性物質組合化學組合生物合成和組合生物催化基于臨床副作用觀察產生先導物虛擬篩選分子的多樣性（diversity）是先導物發(fā)現的物質基礎先導化合物（leadcompound)在藥物設計時，分子的多樣性、互補性和相似性構成了設計方法的策略基礎分子的多樣性分子的互補性分子的相似性基于生物大分子結構和作用機理的藥物分子設計反義寡核苷酸分子的互補性（complementarity）是分子識別和受體-配體結合的基礎和推動力先導化合物（leadcompound)在藥物設計時，分子的多樣性、互補性和相似性構成了設計方法的策略基礎分子的多樣性分子的互補性分子的相似性基于內源性配體分子的藥物設計過渡態(tài)類似物肽模擬物生物電子等排置換類似物變換藥物合成的中間體基于代謝轉化分子的相似性（similarity）在不同的層次上有不同的含義高通量篩選（High-throughputScreening，HTS)篩選平臺分子生物學細胞生物學基因組學蛋白組學生物信息學結構生物學計算機輔助藥物設計藥物化學高通量技術生物芯片天然產物化學合成組合化學化合物庫篩選模型結構優(yōu)化藥物候選化合物篩選虛擬篩選高通量篩選（High-throughputScreening，HTS)高通量篩選指以分子水平和細胞水平的實驗方法為基礎，以微板形式作為實驗工具載體，以自動化操作系統(tǒng)執(zhí)行試驗過程，以靈敏快速的檢測儀器采集實驗結果數據，以計算機分析處理實驗數據，在同一時間檢測數以千萬的樣品，并以得到的相應數據庫支持運轉的技術體系，它具有微量、快速、靈敏和準確等特點。簡言之就是可以通過一次實驗獲得大量的信息，并從中找到有價值的信息。藥物高通量篩選模型的實驗方法，根據其生物學特點，可分為以下幾類：受體結合分析法；酶活性測定法；細胞分子測定法；細胞活性測定法；代謝物質測定法；基因產物測定法。HTS基本步驟第一步是選擇分子靶標。選擇的依據是來源于國際醫(yī)學生物學的新成果。目前國際常用的分子靶標有以下幾類：A、細胞膜受體；B、離子通道蛋白；C、酶蛋白；D、細胞核受體；E、轉運蛋白。第二步是建立穩(wěn)定表達分子靶標的生物體系。靶標是蛋白---克隆相對應的蛋白，在大腸桿菌中表達和提純靶標是細胞受體---克隆出的基因轉化到載體細胞中，建立穩(wěn)定的細胞株。HTS基本步驟第三步建立簡便快速的大規(guī)模的生物檢測方法。根據靶標的不同分為兩類：1、以蛋白等分子為基礎；2、以細胞為基礎酶蛋白---測定酶活性的變化；細胞膜受體---測定配體-受體的結合；細胞核受體---測定蛋白的表達。在建立大規(guī)模生物檢測方法的同時，要用組合化合物的方法合成大量不同結構的化合物庫相配套。HTS藥物篩選靶點與檢測方法分子靶標篩選模型---細胞信號通路篩選系統(tǒng)外界信號從細胞表面?zhèn)鬟f到細胞內，或者直接穿過細胞膜進入到細胞質和細胞核，最終影響某些基因的轉錄。在這個傳遞過程中，某些特殊的細胞或一些病理狀況下，可能是其中的一條或幾條通路起作用，藥物可以根據需要對這些通路進行阻斷。使用信號通路篩選系統(tǒng)，可直接對藥物作用的分子機制有所了解。HTS藥物篩選靶點與檢測方法細胞膜表面受體篩選模型a.G蛋白耦聯受體：受體與GTP結合的調節(jié)蛋白的耦聯，在細胞內產生cAMP，從而將外界信號跨膜傳遞到細胞內。如趨化因子受體、β-受體阻斷劑等。b.催化受體：為單跨膜受體，分為胞外區(qū)，跨膜區(qū)和胞內區(qū)。當細胞因子與胞外區(qū)結合后，引起多個受體單體的聚合，每個聚合體的受體單體可以是同一類型，也可以不同。如EPO、G-CSF、GH受體2個同樣的單體；IL-1，GM-CSF，IL-6受體是2個不同的單體；TNF-α是3個同樣的單體；IL-2是3個不同的受體。c.離子通道耦聯受體：細胞表面一些神經遞質的受體，自身是一些離子通道，或者與離子通道相耦聯。當與配體結合時，受體構象改變，通道開放，離子進出細胞，引起電興奮。早期安全性評價（EarlySafetyEvaluation)早期安全性評價可以幫助科學家們更早了解先導化合物，有時也是先導化合物優(yōu)化的一部分。通過細胞，動物和計算模型來獲得新化合物的相關信息，了解該新化合物在動物模型中的效果，并預測其在人體中的行為。早期安全性評價主要包括兩部分：藥物（代謝）動力學（pharmacokinetics)和毒理學(toxicology)Absorptionintotheblood,吸收Distributiontothesiteofactioninthebody,分布Metabolismorhowitisbrokendowninthebody,代謝Excretionoutofthebody,排泄藥物動力學

（ADME）毒理學研究和測定特定劑量下，藥物對動物的毒性和副作用早期安全性評價-ADME該階段主要用嚙齒類動物（小鼠、大鼠）進行研究，在特定情況下會考慮用大動物，如犬、豬或猴子等。一般在后期研究中才會用到大動物。藥動學參數ParameterDefinitionBioavailability(F)生物利用度thepercentageofdrugthatisdetectedinthesystemic

circulationafteritsadministration.藥物給藥后進入體內血液的百分比Stabilityandhalflife(t1/2)半衰期halflife:thetimeittakesforonehalfoftheoriginal

doseofamedicationtoleavethebody.一半量的藥物進入體內到離開體內的時間Maximumserumconcentration(Cmax)最大血藥濃度themaximumconcentrationofadruginthebodyafter

dosing.Totalexposureorareaunder

thecurve(AUC)暴露量或曲線下面積amathematicalcalculationtoevaluatethebody'stotal

exposureovertimetoagivendrug計算給藥后一段時間內體內藥物的暴露量Clearance(Cl)清除率thevolumeofplasmathatiscompletelyclearedofdrug

perunittime.單位時間內多少體積血漿中藥物被清除干凈Volumeofdistribution(Vd)分布容積ameasurethatrelatestheamountofdruginthebodyto

theconcentrationintheblood.體內藥物總量和血藥濃度的比值Drug-druginteractions藥物相互作用achangeinthewayadrugactsinthebodywhentaken

withcertainotherdrugs;druginteractionsmaycause

thedrugtobemoreorlesseffective,orcauseeffectson

thebodythatarenotexpected.Onsetofdrugaction藥物作用起效thelengthoftimeittakesforamedicinetostartto

work.藥物起效的時間早期安全性評價-毒性研究毒性研究包括兩類：急性毒性和長期毒性急性毒性是指機體（動物）一次性或短時間內（24小時）多次接觸外源性化合物后短期內所產生的毒性效應。長期毒性是指機體長期連續(xù)或反復接觸外源性化合物后所產生的毒性效應。長期毒性一般包括一周或兩周，更長時間包括4周，8周甚至數年。早期安全性評價只做一周或兩周的動物試驗。長毒試驗通過劑量爬坡獲得動物對該藥物的最大耐受劑量（maximumtolerateddose,MTD)。毒性試驗主要觀察給藥后動物的體重、攝食攝水量、癥狀、死亡、血液生化、肝活性、尿液以及動物出現死亡時進行組織病理切片。藥物化學家根據早期安全性評價的結果，確定是否進一步優(yōu)化先導化合物先導化合物的優(yōu)化在該階段，生物學家和藥物化學家一起努力使先導化合物更安全更有效。這是基于各步驟知識復雜和反復的過程。通常一個或多個先導化合物進行安全評價，合成和篩選。這就是所謂的類似物。類似物測試，其結果是與化合物結構變化相關的生物活性和藥理數據。這些用于建立結構-活性關系（SAR）。新類似物將反饋到系統(tǒng)的下一個優(yōu)化步驟中。最終得到優(yōu)化的先導化合物，進入到臨床前研究。進入臨床前研究的化合物稱為臨床前候選化合物。后期的主要研究工作將由醫(yī)藥公司來主導。臨床前研究臨床前研究的主要目標是決定藥物是否可以相對安全地用于人體的臨床研究，以及藥物分子是否顯示藥理效應而值得進一步的商品化發(fā)展。臨床前研究是保證首次試用于人類的第一道安全防線一般說來，大約有80%以上的候選藥物分子在臨床前研究階段中被淘汰。在臨床前研究進行的同時，主辦者還應該考慮人體臨床飾演的計劃方案和準備IND的申請資料。設計合理、嚴密的臨床前研究設計師全部藥品研發(fā)活動中提高效率不可忽視的關鍵因素。它可以減少臨床試驗失敗的機率，大大縮短研發(fā)時間和減少開支。臨床前研究的主要內容合成、生產和控制（Chemical、Manufacture&Control)制劑（Pharmaceutics)藥理學(Pharmacology)藥效動力學（Pharmacodynamics)藥代動力學（Pharmacokinetics)毒理學(Toxicology)急性毒性試驗（acutetoxicitytesting)重復給藥毒性試驗（repeatdosetoxicitytesting)長期毒性試驗（longtermtoxicitytesting致癌性試驗（carcinogenicitytoxicitytesting)生殖毒性和致畸性(reproductivetoxicity)基因毒性試驗/致誘變性（genotoxicity/mutagenicity)毒代動力學（toxicokinetics)其他合成、生產和控制（CMC)確定合理價格的起始物料優(yōu)化合成工藝以及純化工藝晶型/鹽型研究結構確證中間體批量放大、最終化合物從毫克級放大到克級、公斤級，產品純度符合要求申報工藝的確認質量研究分析方法開發(fā)/驗證影響因素試驗長期/加速穩(wěn)定性試驗——化合物的生產是影響研發(fā)進度的關鍵因素制劑-處方前研究(preformulation)PropertyDescriptionpKa電離常數MeasureofacidityofafunctionalgroupintheAPIchemicalstructure;applicableforcompoundswithionizablefunctionalgroups.Important

forstabilityandpossiblesaltformationstudies.Solubility溶解度Amountdissolvedinwaterorotherrelevantmedia.Temperaturesused

includeroomtemperature(around22°C)andbodytemperature

(around37°C).pHsolubilityprofile不同pH溶液中的溶解度Amountdissolvedatdifferentacidic(lowpH)andbasic(highpH)

conditions.PhysiologicalpHrangesfrom1.2to7.4,butothervalues

mayalsobetested.Temperaturesusedincluderoomtemperature

(around22°C)andbodytemperature(around37°C).Intrinsicdissolutionrate固有溶出度Rateatwhichthematerialdissolvesinarelevantmedia,suchaswater,simulatedgastricfluid(SGF),orsimulatedintestinal(SIF).Temperaturesusedincluderoomtemperature(around22°C)andbodytemperature(around37°C)Partitioncoefficient(logP)油水分配系數Measureofhowwellasubstancepartitionsbetweenlipidsandwater,whichcanhelppredicthowwellacompoundwillpassthroughcellmembranes.Permeability滲透性Evaluatethedrug’spotentialfortransport(permeation)throughtheintestinalwall.制劑-處方前研究(preformulation)PropertyDescriptionCrystallinity結晶度Determineifmaterialiscrystallineoramorphous.Crystalform晶型DeterminethestructureofacrystallinematerialMeltingpoint熔點Determinethetemperaturewherethedrugsubstancemelts.Solventcontent水分/溶劑含量AmountofwaterorsolventscontainedinthedrugsubstanceWateruptake

(hygroscopicity)引濕性Amountofwatersorbedatoverawiderangeofrelativehumiditiesto

determineanyspecialhandlingpropertiesthatmaybeneeded.Stabilitystudies穩(wěn)定性研究Determinechemicalandphysicalstabilityatelevatedtemperatureandhumidityconditions.Excipientscompatibilitystudy原輔料相容性investigateanyinteractionsbetweenthedrugsubstanceandexcipientsthatmayleadtochanges,suchaschemicalreactionsleadingtodecompositionproductsorformchangesthatcouldchangethesolubility.

晶型研究決策樹很多時候，候選化合物物理性質不是很理想，需要通過晶型/鹽型研究，獲得比較理想的固體晶型。制劑處方/工藝研究臨床前制劑處方研究主要獲得用于I期臨床研究用的簡單處方。有時候由于各種原因在這個階段需要更廣泛的處方研究。簡單的處方包括將藥物放到瓶中（臨床試驗時，將溶液加到瓶中給病人服用）或藥物粉末裝到膠囊中（需要的話會加一個或兩個輔料）體內體外相關性的研究。體外藥物溶出度檢測，如片劑或膠囊。制藥公司一般使用人工胃液和人工腸液模擬藥物在胃中和小腸中的溶出。通過對溶出度考察，預測藥物在體內的溶出情況。制劑給動物服用后考察在體內的藥動學參數，了解藥物的口服生物利用度。制劑的質量研究：含量、水分、晶型、雜質、含量均勻度

確保制劑質量的一致性制劑處方/工藝研究長期/加速穩(wěn)定性研究。在輔料相容性研究中，藥物和輔料的相互作用有時候不是很明顯。制劑進行高溫高濕試驗，有助于了解藥物在制劑中的穩(wěn)定性。穩(wěn)定性研究必須考慮到臨床研究的時間。如果臨床研究進行6個月，則需要6個月或更長時間的穩(wěn)定性數據。要確保制劑質量在臨床研究期間包括運輸和貯藏的時間沒有明顯變化。雖然一些化合物可能I期臨床不通過，但是制劑研究人員不僅要考慮制劑用于I期臨床，還要考慮用于II期臨床和III期臨床研究。針對一些特殊疾病，需要開發(fā)特殊制劑比如貼片、速溶片、鼻噴劑、多劑量吸入劑、注射劑、速釋惑緩釋片劑或膠囊。臨床制劑的包裝系統(tǒng)的研究，包裝材料相容性研究。包裝方式和包裝材料要確保在運輸、貯藏和使用時制劑的穩(wěn)定性。臨床用原料藥和制劑的生產要在符合GMP條件下進行，確保產品的質量、安全性和有效性。符合藥品藥事法規(guī)。在臨床申報時，FDA或CFDA會進行現場核查，如果核查不通過，則進入IND審評。

藥理學研究研究藥物與機體相互作用及其規(guī)律和作用機制的一門學科。藥理學的學科任務是要為闡明藥物作用機制、改善藥物質量、提高藥物療效、開發(fā)新藥、發(fā)現藥物新用途并為探索細胞生理生化及病理過程提供實驗資料。藥物效應動力學（pharmacodynamics）:簡稱藥效學。研究藥物對機體的作用，包括藥物的作用和效應、作用機制及臨床應用等。藥物代謝動力學（pharmacokinetics）:簡稱藥動學。研究藥物在機體的作用下所發(fā)生的變化及其規(guī)律，包括藥物在體內的吸收、分布、代謝和排泄過程，特別是血藥濃度隨時間變化的規(guī)律、影響藥物療效的因素等。藥理學研究主要藥效學：一般要求有兩種動物、兩種方法以上、兩個途徑（至少一種是臨床給藥途徑）、三個劑量、空白對照、陽性對照和模型對照等；一般藥理學：一般要求2~3個有效劑量、臨床給藥途徑、至少觀察對神經系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響；藥代動力學:一般要求3個劑量，提供常規(guī)藥動學參數、模室類型和分布排泄試驗。臨床前毒理學研究

涉及全身毒性和局部毒性研究，是為新藥臨床用藥的安全性提供試驗依據，并為臨床毒副反應檢測提供重要信息。毒理學評價總的要求：找出毒性劑量ToxicDosage確定安全劑量范圍Safetymargin毒性反應Toxicreaction:性質、程度、量毒關系、產生時間，達峰時間,持續(xù)時間及反復產生毒性反應時間、遲發(fā)性、蓄積性、耐受性尋找毒性反應靶器官TargetOrgan毒性反應是否可逆Reversibility解毒或解救措施Antidote

確保臨床用藥安全臨床前毒理學研究的意義通過動物實驗以確立：出現毒性反應的癥狀、程度、劑量、時間、靶器官以及損傷的可逆性；安全劑量及安全范圍通過上述資料的獲得，達到預測人類臨床用藥的可能性，并制定防治措施；同時推算臨床研究的安全參考劑量和安全范圍的目的。臨床前評價局限性種屬差異：假陽性或假陰性試驗動物數量有限健康狀態(tài)不同研究方法的局限急性毒性試驗最大耐受量試驗最大給藥量試驗限量試驗LD50試驗最大耐受性試驗多用于毒性較小的藥物研究動物：小鼠、大鼠、犬等動物數：小動物10~20只；大動物4~6只

雌、雄各半?！辖y(tǒng)計要求給藥途徑：臨床給藥途徑試驗對照：觀察時間：7~14天大體解剖

如有改變—病理結果與評價:描述動物單次大劑量給藥或在24小時內接受多次大劑量給藥后，在短期內出現的與藥物相關的毒性反應，發(fā)生、發(fā)展過程。提供不引起動物死亡的最大劑量。最大給藥量試驗多用于中藥和毒性較小的其他藥物研究具體要求可參照最大耐受量試驗評價藥物以最高濃度和最大容積給藥的劑量限量試驗低毒藥物，口服給藥：5g(或ml)/kg

動物數一般≥5只，大鼠禁食一夜，小鼠禁食4-6小時，觀察14天，如無死亡，不必進行更高劑量。

如果動物在5g/kg出現死亡，可選擇較低劑量LD50試驗動物：小鼠、大鼠等

一般5組；每組10只

雌、雄各半。試驗前禁食給藥途徑：臨床給藥途徑試驗對照:觀察時間：14天，大體解剖

如有改變—病理檢查結果與評價：描述動物出現與藥物相關的毒性反應、發(fā)生發(fā)展過程。列表計算LD50值，提供統(tǒng)計方法。提供動物單次給藥后引起50%動物死亡的劑量長期毒性研究超過有效（臨床）劑量數倍或數十倍、臨床周期

3-4倍以上的劑量設法發(fā)現毒性反應的劑量、劑量與毒性關系、中

毒表現和程度、主要毒性靶器官或組織及可

逆程度等

預測臨床研究階段可能的安全范圍和毒性，預先

制定防治措施或避免某些有特殊疾病患者的

使用，減少臨床可能的風險提供臨床試驗初始劑量和指標等重要參數

長期毒性研究動物

大鼠、犬或敏感動物（如猴）

創(chuàng)新藥2種以上

根據周期長短確定每組動物數

大鼠雌雄各10-30只；犬、猴各3-4只

恢復期：一定數量

注意：

試驗結束：小動物每組應滿足統(tǒng)計學要求

大動物應滿足毒理學評價要求

長期毒性研究給藥時間與頻率臨床給藥周期的3-4倍

反復、長期或植入按嚙齒6月；非嚙齒9月連續(xù)給藥、周期短-每天給藥

>1個月-6天/周給藥

每天給藥時間一致摻食給藥-證明穩(wěn)定、均一

給藥途經

擬訂臨床給藥途徑

替代途徑說明

長期毒性研究給藥劑量與容積給藥劑量-根據不同毒性的藥物

-根據動物體重增長調整

給藥容積按要求給藥劑量

一般3組原則：

高劑量-出現毒性和個別死亡（<20%）

低劑量-等于或略高于有效劑量，無毒性

中劑量-介于以上兩者之間，輕微毒性

長期毒性研究對照組-與給藥組動物數基本相等

-按試驗目的

陰性對照組、溶媒對照組等觀察時間與指標觀察周期、依據

指標全面、針對特點

體重和進食量每周測1-2次

周期>3月的，1/3動物檢查中期主要指標

如發(fā)現異?？蛇m當增加檢查次數

長期毒性研究觀察指標常規(guī)指標（一般癥狀、體重、攝食量）

血液學和血液生化指標

血壓、呼吸、心電圖檢查（非嚙齒類）

尿液生化指標（非嚙齒類）

臟器重量和臟器/體重系數

重要組織與器官的大體、組織病理學檢查及照片

死亡情況

恢復期觀察結果

實測數據、數據處理、統(tǒng)計方法及統(tǒng)計結果

毒代動力學（Toxicitykinetics）考慮要點毒代動力學是藥代研究在毒理學研究的延伸結合于長毒試驗評價藥物全身暴露（Exposure）狀態(tài)、測定AUC、Cmax

和Ct通過了解藥物暴露與毒性劑量和時間的關系

評價毒理學的發(fā)現和這些發(fā)現與臨床安全相關性

結合毒性發(fā)現，為進一步的毒性設計提供信息

有助于解釋動物種類、劑量和性別間的毒性差異

過敏性、溶血性、刺激性試驗不同劑型、途徑

-過敏試驗

-刺激性試驗

-溶血試驗

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