中學(xué)生物實(shí)驗(yàn)技能實(shí)驗(yàn)報(bào)告——石蠟切片的制作PAGE3東北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院中學(xué)生物實(shí)驗(yàn)技能實(shí)驗(yàn)報(bào)告名稱：石蠟切片的制作姓名：路路學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)：生物科學(xué)（師范）年級(jí)：10級(jí)學(xué)號(hào)：1241410044【實(shí)驗(yàn)名稱】石蠟切片的制作【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹苛私馐炃衅挠猛?，并掌握其制作過(guò)程和方法。石蠟切片（paraffinsection），組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中最為廣泛應(yīng)用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，也是病理學(xué)和法醫(yī)學(xué)等學(xué)科用以研究、觀察及判斷細(xì)胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也已相當(dāng)廣泛地用于其他許多學(xué)科領(lǐng)域的研究中。例如在醫(yī)學(xué)上，常常用石蠟切片做病例分析和診斷?！緦?shí)驗(yàn)步驟及原理】石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標(biāo)本需要數(shù)日，但標(biāo)本可以長(zhǎng)期保存使用，為永久性顯微玻片標(biāo)本。以下即為石蠟標(biāo)本制作的流程圖：固定取材固定取材固定即是用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)藥液浸漬切成小塊的新鮮材料，使其迅速凝固或沉淀細(xì)胞核組織中的物質(zhì)成分、終止細(xì)胞的一切代謝過(guò)程，防止細(xì)胞自溶或組織變化，盡可能保持其活體時(shí)的結(jié)構(gòu)。固定能使組織硬化，有利于切片的進(jìn)行，而且有媒浸作用，有助于組織著色。固定液可以分為單一固定液以及混合固定液。前者有甲醛、酒精、醋酸以及升汞等，混合固定液一般有Bouin氏液、Carnoy氏液等，可以互補(bǔ)不足。10%福爾馬林（4%甲醛）或者10%磷酸緩沖福爾馬林是病理切片常規(guī)使用的固定液。固定時(shí)間根據(jù)材料快的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，一般為數(shù)小時(shí)至24小時(shí)。水洗脫水透明浸蠟包埋根據(jù)要求選取材料的來(lái)源和部位，取材時(shí)要求快速，定位準(zhǔn)確，注意保持結(jié)構(gòu)的完整性。酒精是常用的脫水劑，能與水和透明劑相混。為了減少組織材料的急劇收縮，應(yīng)使用從低濃度到高濃度遞增的順序（50%—100%）逐步進(jìn)行。材料塊在透明劑中浸漬的過(guò)程即為透明，常用的透明劑有二甲苯、苯、氯仿等。透明時(shí)間依據(jù)組織材料塊的大小以及屬于囊腔或者實(shí)質(zhì)器官而定，時(shí)間過(guò)短則透明不夠徹底，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則組織硬化變脆，就不易切出完整切片。用石蠟代替透明劑，使石蠟浸入組織起支持作用。通常先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液中浸漬1~2小時(shí)，再移入純石蠟中浸漬3小時(shí)左右。一般使用的石蠟為了增加其粘度，常將石蠟與蜂蠟以9:1的比例混合。切片包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的四棱臺(tái)，固定在小木塊上，夾在輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)的蠟塊鉗內(nèi)，使蠟塊面與切片刀刃平行。 貼片貼片脫蠟及水化染色脫水用粘附劑將展平的蠟片牢附于載玻片上，以免在以后的脫蠟、水化及染色等步驟中二者滑脫開。粘附劑一般是蛋白甘油。干燥后的切片需及時(shí)水化才能在水溶性染液中進(jìn)行染色。用二甲苯脫蠟，再移至經(jīng)純酒精及梯度酒精直至蒸餾水。如果染料配制于酒精中，則將切片移至與酒精近似濃度時(shí)，即可染色。染色的目的是使細(xì)胞組織內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)不同的顏色以便于觀察，未經(jīng)染色的細(xì)胞組織其折光率相似，不易辨認(rèn)。經(jīng)染色可顯示細(xì)胞內(nèi)不同的細(xì)胞器及內(nèi)容物以及不同類型的細(xì)胞組織。根據(jù)不同觀察需要和研究?jī)?nèi)容可以采用不同的染色劑和染色方法，還要注意選用適宜的固定劑才能取得滿意的結(jié)果。經(jīng)典的蘇木精和伊紅染色法是組織學(xué)標(biāo)本及病理切片標(biāo)本的常規(guī)染色，簡(jiǎn)稱HE染色。經(jīng)HE染色后，細(xì)胞核被蘇木精染成紫藍(lán)色。其染色原理是：多數(shù)細(xì)胞質(zhì)及非細(xì)胞成分被伊紅染成粉紅色。由于蘇木精是帶陽(yáng)離子的染料，染液呈堿性，核內(nèi)染色質(zhì)及胞質(zhì)內(nèi)核糖體等物質(zhì)對(duì)這種染料有親和性，呈嗜堿性；而帶陰離子的染料伊紅配制的染液呈酸性，對(duì)這種染料有親和性，稱嗜酸性。染色的步驟一般是：蘇木精染色—水洗浮色—蘭化（用自來(lái)水或者氨水，使藍(lán)紫色更加清晰）—水洗—脫水—伊紅染色。染色后的切片尚且不能在顯微鏡下觀察，需要經(jīng)梯度酒精脫水，在95%及純酒精中的時(shí)間可適當(dāng)加長(zhǎng)以保證脫水徹底；如染