猴痘病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南為指導(dǎo)各級(jí)疾控部門和其他相關(guān)機(jī)構(gòu)規(guī)范開展猴痘病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作，快速、準(zhǔn)確識(shí)別猴痘確診病例，制定本指南。本指南主要介紹標(biāo)本采集以及猴痘病毒核酸熒光定量PCR檢測(cè)方法、生物安全要求等內(nèi)容。一、檢測(cè)對(duì)象（一）猴痘確診病例和疑似病例；（二）密切接觸者；（三）感染或疑似感染猴痘病毒的動(dòng)物；（四）環(huán)境或其它生物材料。二、技術(shù)人員基本要求（一）采樣人員。從事猴痘病毒核酸檢測(cè)標(biāo)本采集的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)經(jīng)過生物安全培訓(xùn)，培訓(xùn)合格后方可從事采樣工作。采樣人員應(yīng)熟悉采集標(biāo)本種類和采集方法，熟練掌握標(biāo)本采集操作流程及注意事項(xiàng)，做好標(biāo)本信息記錄，確保標(biāo)本質(zhì)量符合要求、標(biāo)本及相關(guān)信息可追溯。1.采樣人員個(gè)人防護(hù)裝備要求：KN95/N95及以上級(jí)別的口罩、防護(hù)面屏或護(hù)目鏡、一次性隔離衣、一次性乳膠手套（盡可能戴兩層）、靴套；如果接觸了病例血液、體液、分泌物或排泄物，應(yīng)及時(shí)更換手套。污水采樣人員可根據(jù)實(shí)際工作需要，適當(dāng)降低防護(hù)級(jí)別。2．住院病例的標(biāo)本由所在醫(yī)院醫(yī)護(hù)人員采集，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的需要，可結(jié)合病程多次采樣。3.密切接觸者標(biāo)本由當(dāng)?shù)丶部貦C(jī)構(gòu)或醫(yī)療機(jī)構(gòu)專業(yè)人員采集。4.感染或疑似感染猴痘病毒的動(dòng)物由當(dāng)?shù)丶部貦C(jī)構(gòu)協(xié)調(diào)動(dòng)物疫控部門專業(yè)采樣人員負(fù)責(zé)采集。5.環(huán)境或其它生物材料標(biāo)本由相關(guān)專業(yè)采樣人員負(fù)責(zé)采集。（二）檢測(cè)人員。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)人員應(yīng)具備相關(guān)專業(yè)大專以上學(xué)歷或具有中級(jí)及以上專業(yè)技術(shù)資格，并有2年以上實(shí)驗(yàn)室工作經(jīng)歷，接受過核酸檢測(cè)相關(guān)培訓(xùn)，培訓(xùn)合格后方可從事檢測(cè)工作。實(shí)驗(yàn)室配備的工作人員數(shù)量應(yīng)與所開展檢測(cè)項(xiàng)目及標(biāo)本量相適宜，確保能夠及時(shí)、熟練、準(zhǔn)確地開展實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和報(bào)告結(jié)果。三、標(biāo)本采集、保存和運(yùn)輸（一）標(biāo)本采集種類。1.首選標(biāo)本是皮膚（黏膜）病變部位標(biāo)本，包括病變表面拭子、痘皰液或痘皰滲出物拭子、痘痂或痘痂拭子等。2.呼吸道標(biāo)本，如口咽拭子，可用于病例急性期檢測(cè)，也是密切接觸者檢測(cè)最常用標(biāo)本。3.發(fā)病急性期可采集EDTA抗凝血標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)。4.采集發(fā)病后7天內(nèi)（急性期）、3-4周后（恢復(fù)期）雙份血清用于抗體檢測(cè)。5.直腸拭子、尿液、精液、唾液等其它標(biāo)本僅用于研究，根據(jù)工作需要采集。6.污水或其它環(huán)境生物材料標(biāo)本根據(jù)實(shí)際工作需要進(jìn)行采集。（二）標(biāo)本采集要求。采集皮膚（黏膜）病變部位標(biāo)本時(shí)應(yīng)使用無菌聚酯纖維、尼龍或類似材質(zhì)拭子，避免使用棉拭子。采集疑似病例的標(biāo)本前應(yīng)避免使用75%乙醇等消毒劑清潔病變部位。每種類型的皮膚（黏膜）病變應(yīng)盡可能采集兩個(gè)以上拭子，每個(gè)病例應(yīng)同時(shí)采集身體不同部位或外觀不同的2-3種病變標(biāo)本。采集皮膚（黏膜）病變部位標(biāo)本時(shí)應(yīng)適當(dāng)用力。皮膚（黏膜）病變部位、痘痂或分泌物等不同拭子標(biāo)本應(yīng)放置于不同的采樣管中。進(jìn)行病毒分離時(shí)應(yīng)采集干拭子標(biāo)本（無采樣液）或以非滅活型病毒采樣液保存。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)資質(zhì)確定使用非滅活型或滅活型采樣液采集標(biāo)本。（三）標(biāo)本采集方法。1.斑疹、丘疹、水皰或膿皰等皮膚（黏膜）病變部位標(biāo)本：一手緊握采樣拭子尾部，手與拭子頭部保持一寸以上距離。采樣時(shí)適當(dāng)用力下壓拭子，在皮損表面來回擦拭至少2-3次，然后以拭子另一面再重復(fù)擦拭2-3次。如果在擦拭過程中痘皰破裂，要確保采集到痘皰液。采樣后將拭子放置于無菌采樣管中（可含病毒采樣液或不含液體），折斷拭子頭，去除拭子尾部，蓋上管蓋，以消毒紙巾擦拭消毒采樣管，以封口膜密封管蓋后將采樣管保存或送檢。2.痘痂或痘皰皮膚（黏膜）標(biāo)本：采樣前應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)室可檢測(cè)此類標(biāo)本。使用無菌鑷子或其他鈍頭器械夾取全部痘痂或面積至少4mm×4mm大?。ā瘢┑酿杵ぃ胖糜诟稍?、無菌的采樣管中，采樣完成后以創(chuàng)可貼覆蓋患處。3.口咽拭子標(biāo)本：被采集人員頭部微仰，嘴張大，露出兩側(cè)扁桃體，將拭子越過舌根，在被采集者兩側(cè)扁桃體稍微用力來回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次，將拭子頭浸入含2-3mL病毒保存液的管中或置于不含液體（干拭子）的無菌管中，尾部棄去，旋緊管蓋。4.血液標(biāo)本：盡量采集急性期（發(fā)病7天內(nèi)）的血液標(biāo)本，建議使用含EDTA抗凝劑的真空采血管采集5mL全血，可利用全血進(jìn)行檢測(cè)，或室溫靜置30分鐘后，1500-2000rpm離心10分鐘，收集血漿于無菌管中進(jìn)行檢測(cè)。5.血清標(biāo)本：用真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5mL，室溫靜置30分鐘，1500-2000rpm離心10分鐘，收集血清于無菌螺口塑料管中。第一份血清應(yīng)盡早（最好在發(fā)病后7天內(nèi)）釆集，第二份血清應(yīng)在發(fā)病后第3-4周采集，采集血液標(biāo)本5mL后室溫靜置30分鐘，1500-2000rpm離心10分鐘，收集血清于無菌螺口塑料管中，用于猴痘抗體檢測(cè)。6.其他標(biāo)本：依據(jù)設(shè)計(jì)需求規(guī)范采集。（四）標(biāo)本保存。標(biāo)本應(yīng)在收集后1小時(shí)內(nèi)冷藏（2-8℃）或冷凍（-20℃或以下），并盡快進(jìn)行檢測(cè)?？稍?周內(nèi)檢測(cè)的標(biāo)本可置于4℃環(huán)境中保存；1周內(nèi)無法檢測(cè)的標(biāo)本，短期可置于-20℃環(huán)境中保存，長(zhǎng)期應(yīng)置于-70℃或以下環(huán)境中保存。全血分離血漿前冷藏（2-8℃），分離出的血漿置于-20℃或以下環(huán)境中保存。應(yīng)設(shè)立專庫(kù)或?qū)９駟为?dú)保存標(biāo)本，避免反復(fù)凍融標(biāo)本。猴痘病毒及其相關(guān)標(biāo)本應(yīng)由專人管理，準(zhǔn)確記錄病毒及標(biāo)本的來源、編號(hào)、數(shù)量等信息，具體要求可參考《病原微生物菌（毒）種保藏?cái)?shù)據(jù)描述通則》（T/CPMA011-2020）。應(yīng)采取有效措施確保病毒及標(biāo)本安全，嚴(yán)防發(fā)生誤用、惡意使用、被盜、被搶、丟失、泄露等事件。（五）標(biāo)本送檢。標(biāo)本采集后應(yīng)盡快在低溫條件下（冰袋或干冰）送往實(shí)驗(yàn)室，如需長(zhǎng)途運(yùn)輸標(biāo)本，應(yīng)采用干冰冷凍運(yùn)輸方式進(jìn)行保藏。1.送檢標(biāo)本：病例標(biāo)本先由省級(jí)及以下疾控機(jī)構(gòu)進(jìn)行初步檢測(cè)，各省首例猴痘陽性標(biāo)本應(yīng)送中國(guó)疾控中心病毒病所復(fù)核。每個(gè)陽性病例至少采集一套標(biāo)本（皮膚或黏膜病變部位標(biāo)本、口咽拭子標(biāo)本及急性期、恢復(fù)期雙份血清標(biāo)本）送中國(guó)疾控中心病毒病所檢測(cè)。各省級(jí)疾控機(jī)構(gòu)根據(jù)實(shí)際情況制定省內(nèi)樣本送檢、復(fù)核流程。2.病原體及標(biāo)本運(yùn)輸：（1）國(guó)內(nèi)運(yùn)輸。猴痘病毒或其他潛在感染性生物材料的運(yùn)輸包裝分類屬于A類，對(duì)應(yīng)的聯(lián)合國(guó)編號(hào)為UN2814，包裝符合國(guó)際民航組織文件Doc9284《危險(xiǎn)品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》的PI602分類包裝要求，通過其他交通工具運(yùn)輸?shù)目蓞⒄找陨蠘?biāo)準(zhǔn)包裝。猴痘病毒或其他潛在感染性材料運(yùn)輸應(yīng)按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》（原衛(wèi)健委令第45號(hào)）辦理《準(zhǔn)運(yùn)證書》。污水等環(huán)境標(biāo)本暫按普通生物樣本運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。（2）國(guó)際運(yùn)輸。猴痘毒株或樣本在國(guó)際間運(yùn)輸?shù)模瑧?yīng)規(guī)范包裝，按照《出入境特殊物品衛(wèi)生檢疫管理規(guī)定》辦理相關(guān)手續(xù)，并滿足相關(guān)國(guó)家和國(guó)際相關(guān)要求。四、猴痘病毒核酸檢測(cè)要求及流程（一）實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)要求。開展猴痘病毒核酸檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)當(dāng)符合《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理辦法》（國(guó)務(wù)院令第424號(hào)）或《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)）有關(guān)規(guī)定，具備設(shè)區(qū)的市級(jí)衛(wèi)生健康部門備案的生物安全二級(jí)（BSL-2）實(shí)驗(yàn)室及以上實(shí)驗(yàn)室條件，并備案猴痘病毒相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。獨(dú)立設(shè)置的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)符合《醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本標(biāo)準(zhǔn)（試行）》《醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范（試行）》等要求。開展猴痘病毒分離、培養(yǎng)、中和等涉及病毒擴(kuò)增、使用等實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備國(guó)家衛(wèi)生健康委批準(zhǔn)的生物安全三級(jí)（BSL-3）實(shí)驗(yàn)室及以上實(shí)驗(yàn)室條件，且獲得猴痘病毒實(shí)驗(yàn)活動(dòng)批-43-準(zhǔn)。分離的猴痘病毒應(yīng)送國(guó)家病原微生物保藏中心/國(guó)家病原微生物資源庫(kù)病毒分庫(kù)保藏。（二）實(shí)驗(yàn)室生物安全要求。根據(jù)2006年公布實(shí)施的《人間傳染的病原微生物名錄》（簡(jiǎn)稱《名錄》），猴痘病毒生物危害分類為第一類，是一種高致病性病毒。按照《名錄》要求，猴痘病毒的分離、培養(yǎng)等涉及病毒擴(kuò)增及使用的實(shí)驗(yàn)操作需在BSL-3及以上實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行；非滅活采樣液采集的猴痘病例樣本的滅活在BSL-3實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行；樣本滅活后猴痘病毒DNA提取、檢測(cè)可在BSL-2及以上實(shí)驗(yàn)室或PCR檢測(cè)的專門區(qū)域或房間進(jìn)行。如《名錄》更新，開展猴痘病毒操作的實(shí)驗(yàn)室生物安全要求應(yīng)按最新《名錄》執(zhí)行。污水樣本的滅活參照普通生物樣本。（三）實(shí)驗(yàn)室分區(qū)要求。原則上開展猴痘病毒核酸檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)。三個(gè)區(qū)域在物理空間上應(yīng)完全相互獨(dú)立，空氣應(yīng)定向流通。各區(qū)功能分別是：1.試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的制備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。2.標(biāo)本制備區(qū)：轉(zhuǎn)運(yùn)桶開啟、標(biāo)本滅活，核酸提取及加入至擴(kuò)增反應(yīng)管等。3.擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)：核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。如采用標(biāo)本處理、核酸提取及擴(kuò)增檢測(cè)為一體的自動(dòng)化分析儀，標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)可合并。（四）主要儀器設(shè)備。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)配備與開展檢驗(yàn)項(xiàng)目相適宜的儀器設(shè)備，包括：二級(jí)生物安全柜、高速臺(tái)式離心機(jī)、干浴恒溫器、熒光定量PCR儀、計(jì)時(shí)器、移液器。（五）實(shí)驗(yàn)室猴痘病毒核酸檢測(cè)流程。實(shí)驗(yàn)室接到標(biāo)本后，按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本前處理、核酸提取、核酸擴(kuò)增、結(jié)果分析及報(bào)告。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)建立可疑標(biāo)本和陽性標(biāo)本復(fù)檢流程。1.試劑與材料。（1）標(biāo)本：包括病變表面拭子、痘皰液或痘皰滲出液拭子、痘痂或痘痂拭子、咽拭子、全血或血漿等標(biāo)本。（2）核酸提取試劑盒（基因組DNA提取試劑盒）：組織基因組DNA提取試劑盒或血液/細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒。（3）核酸檢測(cè)試劑：①試劑：DNA聚合酶或預(yù)混的PCR反應(yīng)試劑（PCRMasterMix）。②猴痘病毒檢測(cè)引物、探針:名稱簡(jiǎn)稱濃度序列Primer-FF3L-F10μM5′-CTCATTGATTTTTCGCGGGATA-3′Primer-RF3L-R10μM5′-GACGATACTCCTCCTCGTTGGT-3′ProbeF3L-P10μM5′FAM-CATCAGAATCTGTAGGCCGT-MGB3′③陽性對(duì)照：涵蓋檢測(cè)靶標(biāo)序列的質(zhì)粒。（4）滅菌去離子水、無水乙醇（5）消毒液①75%乙醇：用于手部和物體表面常規(guī)消毒，開啟后有效期為1周。②含氯消毒液：現(xiàn)用現(xiàn)配，含有效氯1000mg/L的消毒液用于物體表面常規(guī)消毒，含有效氯5000mg/L的消毒液用于感染性材料溢灑時(shí)的應(yīng)急處理。（6）耗材：包括帶濾芯的吸頭、螺旋口的離心管、非螺旋口的離心管、含鋯珠的粉碎管、PCR反應(yīng)板和透明封膜或PCR反應(yīng)管和透明蓋。（7）BSL-2個(gè)人防護(hù)用品：包括KN95/N95口罩及以上級(jí)別的口罩、一次性隔離衣、防護(hù)眼罩或面屏、一次性帽子、鞋套、靴套和手套。2.實(shí)驗(yàn)前的標(biāo)本接收。（1）核對(duì)被檢標(biāo)本編號(hào)、姓名、性別、年齡及檢測(cè)項(xiàng)目；（2）待檢標(biāo)本的狀態(tài)如有異常，需注明；（3）待檢標(biāo)本長(zhǎng)期存放在-70℃，短期存放可在-20℃，避免反復(fù)凍融。3.核酸檢測(cè)操作步驟及注意事項(xiàng)。（1）病毒核酸（DNA）的制備操作方法按DNA提取試劑盒相應(yīng)說明書進(jìn)行操作，具體如下：①提取試劑準(zhǔn)備：第一次開啟試劑盒，在使用前先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積參照瓶上標(biāo)簽。所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫；所有離心步驟應(yīng)在室溫下進(jìn)行。②處理樣本：A.痘皰液：干拭子標(biāo)本需以適當(dāng)體積的含PS的PBS或DMEM重懸后檢測(cè)。取100μL樣本，加入80μL緩沖液，總量為180μL；標(biāo)本體積不足100μL時(shí)用緩沖液補(bǔ)足總體積至180μL；B.病變皮疹或痘痂：取1塊痂皮按質(zhì)量/體積（1mg/50μL）加入相應(yīng)體積含PS的PBS，研磨或勻漿處理，取80μL，然后加入100μL緩沖液；C.咽拭子、其它拭子：從采樣液中取200μL標(biāo)本，干拭子標(biāo)本可用3mL含PS的PBS或DMEM重懸，混勻后取200μL；D.全血或血清：直接取200μL標(biāo)本。③加入20μL蛋白酶K溶液，混勻，溶液會(huì)變清亮。若樣本為病變皮疹或其它組織時(shí)，加入蛋白酶K混勻后，在56℃放置，直至組織溶解，再進(jìn)行下一步驟。④加入200μL裂解緩沖液，充分混勻，70℃放置10分鐘，或至溶液變清亮，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。需注意：加入裂解緩沖液后可能會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀，在70℃放置后會(huì)消失。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少或提取出的DNA不純。⑤加200μL無水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。⑥將上一步驟所得溶液和絮狀沉淀均加至吸附柱中（吸附柱放入廢液收集管中），8000rpm離心1分鐘，棄廢液。⑦加入500μL漂洗緩沖液1（使用前先檢查是否已加入無水乙醇），8000rpm離心1分鐘，棄廢液。⑧加入500μL漂洗緩沖液2（使用前先檢查是否已加入無水乙醇），最大轉(zhuǎn)速13000rpm離心3min，棄廢液。⑨將吸附柱放回廢液收集管中，最大轉(zhuǎn)速13000rpm離心1分鐘，盡量去除漂洗液。⑩將吸附柱轉(zhuǎn)入一根干凈的離心管中（需自行準(zhǔn)備，試劑盒中未提供），加入50μL洗脫緩沖液或滅菌去離子水，室溫放置2-5分鐘，8000rpm離心1分鐘。收集濾出液，做好標(biāo)記，4℃或-20℃（短期）保存?zhèn)溆茫?70℃長(zhǎng)期保存。（2）核酸檢測(cè)：實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）方法檢測(cè)猴痘病毒核酸（PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行）。①反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：每孔20μL，加入5μL樣本DNA，共計(jì)25μL；每次PCR反應(yīng)，除檢測(cè)標(biāo)本外，應(yīng)加無DNA對(duì)照（用水代替DNA）、陽性對(duì)照；所有樣本，包括對(duì)照，應(yīng)設(shè)復(fù)孔。試劑體積（μL）終濃度滅菌去離子水6——2×Mixmaster12.51×正向/反向引物（5μM）10.4μM探針（10μM）0.50.2μMDNA模板5——合計(jì)25——②加樣:每根反應(yīng)管中加入核酸或?qū)φ崭?uL，蓋緊管蓋或封好透明膜，置于熒光定量PCR檢測(cè)儀上。③擴(kuò)增條件設(shè)定：循環(huán)類型溫度（℃）時(shí)間（分:秒）循環(huán)數(shù)預(yù)變性955:001擴(kuò)增變性950:1540退火/延伸600:40④儀器檢測(cè)通道選擇:使用熒光定量PCR檢測(cè)儀，選擇Fam熒光信號(hào)檢測(cè)通道，收集設(shè)在60℃。具體設(shè)置方法參照各儀器使用說明書。⑤結(jié)果分析閾值設(shè)定:使用熒光定量PCR檢測(cè)儀進(jìn)行結(jié)果分析時(shí)，基線取3-10或6-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)，閾值設(shè)定原則為閾值線剛好超過正常陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線最高點(diǎn)，也可根據(jù)儀器噪音情況調(diào)整閾值。（3）核酸檢測(cè)結(jié)果判斷①Real-timePCR反應(yīng)系統(tǒng)的質(zhì)量控制:反應(yīng)結(jié)果應(yīng)同時(shí)符合以下2個(gè)條件，否則試驗(yàn)結(jié)果無效，應(yīng)重新開展檢測(cè)。陰性對(duì)照無擴(kuò)增，為陰性。陽性對(duì)照未出現(xiàn)陰性結(jié)果。②結(jié)果判定：A.陰性：雙孔Ct值＞37，或無Ct值；B.灰區(qū)：一孔Ct值＞37；C.陽性：雙孔Ct值＜37。所有陽性和處于灰區(qū)的標(biāo)本應(yīng)重復(fù)檢測(cè)或經(jīng)序列分析進(jìn)行確診。需注意：當(dāng)標(biāo)本僅為咽拭子或血清、血漿，且檢測(cè)結(jié)果為陰性時(shí)，應(yīng)結(jié)合臨床癥狀，慎重做出陰性診斷。（4）表格記錄做好熒光定量實(shí)時(shí)PCR方法檢測(cè)猴痘病毒核酸原始記錄。五、猴痘病毒全基因組測(cè)序1.測(cè)序標(biāo)本選取原則。本土疫情中的首發(fā)或早期病例、與早期病例有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)的關(guān)鍵病例、感染來源不明的本土病例、境外輸入病例陽性標(biāo)本等。以上標(biāo)本在核酸熒光定量PCR檢測(cè)Ct值≤32時(shí)進(jìn)行測(cè)序（關(guān)鍵樣本除外）。2.測(cè)序要求。以省為單位確定開展猴痘病毒全基因組測(cè)序的機(jī)構(gòu)。建議使用擴(kuò)增子技術(shù)進(jìn)行猴痘病毒全基因組測(cè)序。測(cè)序數(shù)據(jù)經(jīng)質(zhì)控合格后方可用于后續(xù)生物信息分析。二代測(cè)序平臺(tái)覆蓋深度應(yīng)不低于10×，三代測(cè)序平臺(tái)覆蓋深度應(yīng)不低于50×，全基因組測(cè)序覆蓋度應(yīng)不低于98%。數(shù)據(jù)比對(duì)分析推薦參考猴痘基因組NC_063383.1。各省應(yīng)建立本省輸入、本土病例猴痘病毒基因組數(shù)據(jù)庫(kù)，應(yīng)具備序列對(duì)比分析能力。具備測(cè)序條件