定義：PCR技術又稱聚合酶鏈式反響〔polymerasechainreaction)，是通過模擬體內(nèi)DNA復制的方式，在體外選擇性地將DNA某個特殊區(qū)域擴增出來的技術。PCR技術:PCR技術的根本原理在微量離心管中,參加適量的緩沖液,微量的模板DNA,四種脫氧單核苷酸,耐熱性多聚酶,一對合成DNA的引物,通過高溫變性、低溫退火和中溫延伸三個階段為一個循環(huán)的反響過程,每一次循環(huán)使特異區(qū)段的基因拷貝數(shù)放大一倍,一般樣品是經(jīng)過30次循環(huán),最終使基因放大了數(shù)百萬倍;擴增了特異區(qū)段的DNA帶。①模板：單鏈或雙鏈DNA②引物：16-30bp合成的寡核苷酸③DNA聚合酶：耐熱的DNA聚合酶④底物：四種脫氧三磷酸核苷〔dNTP:dATP、dTTP、dCTP、dGTP)⑤Mg2+：DNA聚合酶的激活劑

PCR根本要素◆菌種活化與擴大培養(yǎng)是指將保存的處于休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面培養(yǎng)活化后，再經(jīng)過茄子瓶或搖瓶及種子罐逐級擴大培養(yǎng)而獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過程。這些純種培養(yǎng)物又稱為種子?！臬@得優(yōu)質(zhì)種子必須具備條件①有一種能使保存的菌種轉(zhuǎn)移到能到達最大的復活培養(yǎng)基上的方法②有一個不引起種子染菌的接種場所③具有定量判斷種子質(zhì)量標準的方法④具有定量測定菌種一系列生理狀態(tài)變化的方法⑤選擇能滿足種子擴大培養(yǎng)的容器和其他環(huán)境條件◆酶的提取與純化工業(yè)用酶純度要求不一樣皮革工業(yè)用蛋白酶紡織工業(yè)用淀粉酶純度不需要高食品、醫(yī)藥、分析測試等用途的酶要有高純度酶的提取是指在一定條件下，用適當?shù)娜軇┨幚砗冈?，使酶充分溶解到溶劑中的過程，也稱作酶的抽提，酶的初步純化在酶的別離純化前期，將經(jīng)過處理或破壞的細胞置于一定溶液中，使被提取的目的酶與其它物質(zhì)別離的過程，包括酶與細胞固體殘渣的別離、酶與其他物質(zhì)的別離。酶的提取在酶制備中最常用的幾種沉淀方法：1.鹽析法

2.有機溶劑沉淀3.等電點沉淀4.復合物沉淀二、根據(jù)酶分子大小、形狀不同的純化方法

1.離心別離技術2.透析與超過濾技術3.過濾4.凝膠層析技術常用凝膠交聯(lián)葡聚糖凝膠〔Sephadex〕交聯(lián)瓊脂糖凝膠(Sepharose)

聚丙烯酰胺凝膠〔Biogel)二、酶的穩(wěn)定性與保存保存酶制劑時應注意：1.酶制劑應該放置在低溫，枯燥，避光，避氧的環(huán)境下，并盡量以固體的形式保存。2.酶制劑處于液體狀態(tài)時，緩沖液的濃度、pH值、溫度、活性穩(wěn)定劑等因素都會對酶的活力造成影響。3.酶濃度越高，越穩(wěn)定，不能保存酶的稀溶液。4.將酶固定化也會提高酶的穩(wěn)定性。D.E=淀粉水解物中的還原糖（以葡萄糖計）全體固形物成分×100在工業(yè)中分解淀粉時以dextrose(右旋糖，葡萄糖〕的當量〔equivalent)D.E來表示。DP(degreeofpolymerization)重合度、聚合度直連淀粉分子內(nèi)的α-葡萄糖的數(shù)量微生物原生質(zhì)體融合：原生質(zhì)體融合：通過酶解作用將兩個親株的細胞壁去除，在高滲條件下釋放出只有原生質(zhì)膜包被著的球狀原生質(zhì)體。然后將兩個親株的原生質(zhì)體在高滲條件下混合，參加融合促進劑聚乙二醇，仙臺病毒〔生物〕或電融合等助融，使它們相互凝集。通過細胞質(zhì)融合，促使兩套基因組之間的接觸，交換，遺傳重組，在適宜條件下使細胞再生，在再生的細胞中獲得重組體。生物芯片〔bio-chip〕：是指將生物分子〔寡聚核苷酸、cDNA、基因組DNA、多肽、抗原、抗體等〕以陣列形式固定于支持物的外表，然后與已標記的待測生物樣品靶分子進行雜交或相互作用后，通過特定的儀器對反響信號的強度進行檢測分析，從而判斷樣品中靶分子的種類與數(shù)量。將大量生物識別分子按預先設置的排列固定于一種載體〔如硅片、玻片及高聚物載體等〕外表，利用生物分子的特意性親和反響，如核酸雜交反響，抗原抗體反響等來分子各種生物分子存在的量的一種技術.根據(jù)用途還可以把生物芯片分為兩類：信息生物芯片〔information-biochip〕功能生物芯片〔function-biochip〕基因芯片、蛋白芯片、組織芯片、細胞芯片微流體芯片和芯片實驗室疾病診斷和治療、藥物篩選、農(nóng)作物的優(yōu)育優(yōu)選、司法鑒定、食品衛(wèi)生監(jiān)督、環(huán)境檢測、國防、航天等領域。應用領域：1.食源性致病微生物檢測方面的應用許多常見微生物如水產(chǎn)品中的霍亂弧菌、副溶血弧菌，奶制品、禽肉及其制品中的單增李斯特菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌O157，炭疽桿菌、綠膿桿菌、結(jié)核桿菌、SARS病毒、禽流感病毒等均可污染食品而導致多種疾病的爆發(fā)與流行，嚴重威脅著人類的健康。食源性病毒檢測方法傳統(tǒng)方法〔病毒別離培養(yǎng)和電鏡觀察〕免疫檢測方法PCR為主的核酸檢測方法很難滿足目前食源性病毒檢測的要求◆病毒大多無法通過培養(yǎng)的方法進行鑒定◆電鏡觀察的靈敏度低◆而免疫檢測方法受到抗體和檢測方法的限制◆不能對多種型分別同時檢測※很難對病毒進行準確的檢定，容易造成漏檢，同時，目前方法的靈敏度不能檢測出食品中的微量病毒污。是目前病毒檢測的主要方法以PCR為主的病毒核酸檢測技術基因芯片技術可以對多指標并行檢測，同時檢測多種病毒以及病毒的多種亞型，是目前病毒檢測的熱點研究方法實時定量PCR技術以其靈敏、快速和定量檢測的優(yōu)勢，已經(jīng)成為目前病毒檢測方法的主流很難滿足多亞型或多病毒的同時檢測的要求，且該技術存在易污染、假陽性高的缺點2.生物芯片技術在獸藥殘留檢測方面的應用近20年來，獸藥在畜牧業(yè)中的應用日益廣泛，但獸藥殘留對人體及環(huán)境會造成各種危害〔包括慢性、遠期和蓄積性等〕，如致癌、發(fā)育毒性、體內(nèi)蓄積、免疫抑制、致敏和誘導耐藥菌株等。獸藥殘留常規(guī)的檢測方法：儀器方法如高效液相色譜分析法（HPLC）和氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用