整合訓(xùn)練(十七)基因工程和生物技術(shù)的安全性與倫理問(wèn)題全員必做題1.[2023·廣東湛江統(tǒng)考二模]紅細(xì)胞生成素(EPO)是人體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然EPO來(lái)源極為有限，某科研團(tuán)隊(duì)采用基因工程培育轉(zhuǎn)基因羊作為乳腺生物反應(yīng)器，使其能合成EPO。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)需將EPO基因插入乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子的上游B．一般情況下，該轉(zhuǎn)基因羊中的EPO基因只在羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)C．可用顯微注射技術(shù)將含有EPO基因的表達(dá)載體導(dǎo)入羊的受精卵中D．用PCR擴(kuò)增人EPO基因，需要一段已知的EPO基因核苷酸序列2．[2023·山東聊城統(tǒng)考三模]Cre-loxP系統(tǒng)能實(shí)現(xiàn)特定基因的敲除(如圖1)。把幾種熒光蛋白基因和Cre酶能識(shí)別并切割的序列(loxP1和loxP2)串在一起，構(gòu)建表達(dá)載體T(如圖2)。部分熒光蛋白基因會(huì)被Cre酶隨機(jī)“剪掉”，且兩個(gè)loxP1之間或兩個(gè)loxP2之間的基因，最多會(huì)被Cre酶敲除一次，剩下的部分得以表達(dá)，隨機(jī)呈現(xiàn)不同的顏色。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．構(gòu)建表達(dá)載體T時(shí)用到的工具酶包括限制酶、DNA連接酶B．若小鼠細(xì)胞含一個(gè)表達(dá)載體T(不含Cre酶)，其肌肉組織細(xì)胞呈無(wú)色C.若小鼠細(xì)胞含一個(gè)表達(dá)載體T(含Cre酶)，其腦組織細(xì)胞只能呈紅色或黃色D．若小鼠細(xì)胞含兩個(gè)表達(dá)載體T(含Cre酶)，其腦組織細(xì)胞可能出現(xiàn)兩種顏色3．[2023·山東青島統(tǒng)考一模]新型冠狀病毒(2019-nCoV)的檢測(cè)可以采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))的方法，RT-PCR的具體過(guò)程如圖，下列敘述正確的是()A．PCR體系中一定要添加從受體細(xì)胞中提取的DNA聚合酶B．過(guò)程Ⅱ擬對(duì)單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，理論上需要2n個(gè)引物BC．該技術(shù)用于對(duì)某些微量RNA病毒的檢測(cè)，可提高檢測(cè)的靈敏度D．PCR反應(yīng)中周期性的溫度設(shè)置是特定的，與擴(kuò)增的目的基因和引物無(wú)關(guān)4．[2023·山東青島統(tǒng)考一模](不定項(xiàng))大腸桿菌經(jīng)溶菌酶和洗滌劑處理后，擬核DNA就會(huì)纏繞在細(xì)胞壁碎片上，靜置一段時(shí)間，質(zhì)粒分布在上清液中，利用上述原理可初步獲得質(zhì)粒DNA。用三種限制酶處理提取的產(chǎn)物，電泳結(jié)果如圖所示。下列關(guān)于質(zhì)粒的粗提取和鑒定的敘述正確的是()A．提取DNA時(shí)可加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解B．將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后，可用二苯胺試劑進(jìn)行鑒定C．電泳鑒定DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理D．根據(jù)電泳結(jié)果，質(zhì)粒上一定沒(méi)有限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位點(diǎn)，而有限制酶Ⅲ的切割位點(diǎn)5．[2023·遼寧校聯(lián)考三模](不定項(xiàng))Fst基因可以表達(dá)卵泡抑素，降低皮脂率，提高瘦肉率。研究人員為得到轉(zhuǎn)Fst基因瘦肉型豬，從鴨的卵泡中提取RNA，通過(guò)RT—PCR擴(kuò)增獲得Fst基因，將其與運(yùn)載體PBR322結(jié)合，通過(guò)精子介導(dǎo)法將重組目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并成功獲得轉(zhuǎn)基因瘦肉型豬(如圖所示，AmpR為氨芐青霉素抗性基因)。下列敘述正確的是()A．②過(guò)程需要兩種引物，且引物中C、G堿基的含量基本相同B．③過(guò)程利用pvul和sspl雙酶切有利于目的基因與運(yùn)載體準(zhǔn)確連接C．精子介導(dǎo)法是利用精子將重組目的基因直接導(dǎo)入受精卵的過(guò)程D．欲篩選導(dǎo)入PBR322—Fst的大腸桿菌可在培養(yǎng)基中添加氨芐青霉素6．[2023·山東濟(jì)南統(tǒng)考一模]研究發(fā)現(xiàn)，大部分白血病患者細(xì)胞中存在異常的融合基因UBA2—WTIP，可作為檢測(cè)白血病的特異性分子標(biāo)志物。科研人員通過(guò)RT—PCR方法克隆得到融合基因UBA2—WTIP，為了研究該基因的作用和致病機(jī)制，需要構(gòu)建重組載體并把目的基因和FLAG標(biāo)簽基因序列連接起來(lái)，分別獲得帶有FLAG肽鏈的UBA2—WTIP融合蛋白和WTIP蛋白。FLAG肽鏈由8個(gè)氨基酸殘基組成，可作為基因工程中蛋白質(zhì)是否表達(dá)的標(biāo)記。(1)科研人員以提取的某白血病人外周血細(xì)胞總RNA為模板，經(jīng)過(guò)____________過(guò)程合成cDNA，設(shè)計(jì)________種引物，經(jīng)RT—PCR擴(kuò)增出融合基因UBA2—WTIP。對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，推測(cè)融合基因UBA2—WTIP是在UBA2基因的第16外顯子與WTIP基因的第2外顯子處拼接而成，如圖1所示。為了驗(yàn)證該融合基因的產(chǎn)生是基因組DNA融合而不是不同的RNA剪接后逆轉(zhuǎn)錄所產(chǎn)生的，可通過(guò)PCR驗(yàn)證，其實(shí)驗(yàn)思路和預(yù)期結(jié)果為_(kāi)_______________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)為了構(gòu)建重組載體，科研人員設(shè)計(jì)了以下2種引物，如圖2所示：上游引物F2為：5′TATGGTACCATG①GCACTGTCGCGGGGG3′，GGTACC為KpnⅠ酶切位點(diǎn)；下游引物R2為：5′TAT②TCA③GAGCTCAGTGACGTG3′；FLAG標(biāo)簽基因編碼鏈序列eq\a\vs4\al(（5′GATTACAAGGATGACGACGATAAG3′）)可以插入目的基因編碼區(qū)的首端或者末端。已知引物中ATG對(duì)應(yīng)起始密碼，若UBA2—WTIP融合基因編碼的蛋白質(zhì)前端有一段信號(hào)肽，則FLAG標(biāo)簽基因序列一般不能插入①位置，原因是____________________________________________________________；若在下游引物R2②③處插入FLAG標(biāo)簽基因序列和EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，已知引物中TCA對(duì)應(yīng)終止密碼，位置③處序列為5′__________________3′。(3)制備的重組載體體外轉(zhuǎn)染人類白血病細(xì)胞株KG—la細(xì)胞，提取各細(xì)胞總蛋白，用FLAG單克隆抗體檢測(cè)蛋白表達(dá)情況，并分別測(cè)定轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對(duì)照細(xì)胞、轉(zhuǎn)錄UBA2—WTIP融合基因及轉(zhuǎn)錄WTIP基因的KG－la細(xì)胞增殖情況，結(jié)果分別如圖3所示。檢測(cè)相關(guān)蛋白質(zhì)是否表達(dá)的方法是______________________________；上述生長(zhǎng)曲線結(jié)果說(shuō)明________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。重點(diǎn)選做題7.[2023·山東青島統(tǒng)考一模]原位PCR技術(shù)是利用原位PCR儀，在組織或細(xì)胞中靶DNA所在的位置上進(jìn)行的PCR循環(huán)擴(kuò)增，通過(guò)摻入標(biāo)記基團(tuán)直接顯色或結(jié)合原位雜交進(jìn)行檢測(cè)的方法。進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)體系中的反應(yīng)成分需滲透到組織或細(xì)胞的靶DNA處才能進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系中需要添加一定濃度的Mg2＋，而組織細(xì)胞間的物質(zhì)會(huì)吸附Mg2＋，使進(jìn)入細(xì)胞的Mg2＋減少。下列說(shuō)法正確的是()A．原位PCR技術(shù)可用于人類β—地中海貧血致病基因的檢測(cè)B．原位PCR反應(yīng)體系中使用的Mg2＋濃度要比常規(guī)PCR低C．反應(yīng)體系中引物的G、C堿基含量越高，其結(jié)合的特異性越強(qiáng)D．反應(yīng)體系中NTP作為擴(kuò)增的原料，會(huì)依次連接到子鏈的5′端8．[2023·廣東統(tǒng)考二模]T-2毒素是一種常見(jiàn)的霉菌毒素，可通過(guò)污染飼料引起畜禽中毒。CYP3A是豬體內(nèi)降解T-2毒素的關(guān)鍵酶，T-2毒素可誘導(dǎo)其表達(dá)水平升高。CCAATbox和GCbox是CYP3A基因啟動(dòng)子的兩個(gè)調(diào)控序列。研究者將不同調(diào)控序列分別和CYP3A基因啟動(dòng)子及LUC基因(熒光素酶基因)連接構(gòu)建表達(dá)載體，導(dǎo)入豬肝細(xì)胞，在培養(yǎng)基中加入T-2毒素，24h后計(jì)算啟動(dòng)子活性相對(duì)值，結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是()A．④為對(duì)照組，把僅含LUC基因的表達(dá)載體導(dǎo)入細(xì)胞B．與④組相比，①組中加入T-2毒素的含量大大增加C．可通過(guò)檢測(cè)熒光素酶的活性來(lái)計(jì)算啟動(dòng)子活性相對(duì)值D．調(diào)控序列的缺失使T-2毒素不能誘導(dǎo)CYP3A基因表達(dá)9．[2023·遼寧校聯(lián)考三模]血凝素基因(HA)編碼的血凝素是構(gòu)成流感病毒包膜纖突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2兩個(gè)亞單位，其中HA1含有病毒與受體相互作用的位點(diǎn)。人IgG抗體中的一段小肽，常作為融合蛋白標(biāo)簽，由IgGFc基因的片段(長(zhǎng)度為717bp)編碼。蛋白質(zhì)分泌依賴于信號(hào)肽的引導(dǎo)，本研究中用信號(hào)肽IL－2SS代替HA自身信號(hào)肽，科研人員嘗試構(gòu)建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達(dá)載體，并導(dǎo)入大腸桿菌表達(dá)和分泌。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)流感病毒包膜主要由__________組成，包膜上血凝素的合成場(chǎng)所在________________。(2)本實(shí)驗(yàn)用信號(hào)肽IL-2SS代替HA自身信號(hào)肽有利于融合蛋白分泌到大腸桿菌細(xì)胞外，PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)應(yīng)該選擇圖中引物________。設(shè)計(jì)引物時(shí)，不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列，原因是__________________________________。(3)應(yīng)選擇限制酶________來(lái)切割質(zhì)粒A，然后直接將PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒A混合，同時(shí)加入________DNA連接酶，使得目的基因與質(zhì)粒A相連。若目的基因與質(zhì)粒A正向連接，用BamHⅠ和SacⅠ同時(shí)切割重組質(zhì)粒，完全酶切后的產(chǎn)物中短片段的長(zhǎng)度約為_(kāi)_______bp。(4)有時(shí)為了滿足應(yīng)用需要，會(huì)在載體中人工構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，當(dāng)誘導(dǎo)物存在時(shí)，可以______________________________。(5)圖示中的限制酶有的來(lái)自于大腸桿菌，但限制酶不能切割大腸桿菌本身的DNA分子，原因是__________________________。10．[2023·河南校聯(lián)考三模]研究者將某基因改造并插入質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入大腸桿菌中獲得表達(dá)產(chǎn)物。將獲得的突變基因?qū)肫胀ù竽c桿菌之前，先構(gòu)建基因表達(dá)載體。下圖1為所用載體示意圖，表為限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)。下圖2為通過(guò)PCR定點(diǎn)誘變改造基因的流程圖。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，為使目的基因與載體正確連接，在擴(kuò)增目的基因時(shí)，應(yīng)在其一對(duì)引物的5′端分別引入____________兩種不同限制酶的識(shí)別序列。在目的基因和載體連接時(shí)，可選用____________(填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”)。(2)構(gòu)建的基因表達(dá)載體中需要使用大腸桿菌蛋白基因的啟動(dòng)子tac，原因是____________________________。將受體菌置于含有____________的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選培養(yǎng)，以獲得能表達(dá)基因產(chǎn)物的細(xì)菌。(3)利用大引物PCR進(jìn)行定點(diǎn)誘變需要進(jìn)行兩輪PCR，PCR過(guò)程中需要____________________酶。在第一次PCR中，至少需要________個(gè)循環(huán)才能獲得相應(yīng)的大引物模板。利用所獲得的大引物模板和其他引物進(jìn)行第二次PCR過(guò)程，要獲得帶有誘變點(diǎn)的改良基因，引物應(yīng)選用大引物兩條鏈中的________(填“①”或“②”)。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是__________________。整合訓(xùn)練（十七）1．解析：?jiǎn)?dòng)子是一段特殊序列結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的上游，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，故構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)需將EPO基因（目的基因）插入乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子的下游，A錯(cuò)誤；結(jié)合題干“某科研團(tuán)隊(duì)采用基因工程培育轉(zhuǎn)基因羊作為乳腺生物反應(yīng)器，使其能合成EPO”可知該轉(zhuǎn)基因羊中的EPO基因只在羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)，到合適時(shí)期收集羊的乳汁進(jìn)行相關(guān)產(chǎn)物的檢測(cè)與鑒定，B正確；將目的基因?qū)雱?dòng)物受精卵最常用的方法是利用顯微注射將目的基因注入動(dòng)物的受精卵（全能性高）中，整個(gè)受精卵發(fā)育成為具有新性狀的動(dòng)物，C正確；用PCR擴(kuò)增人EPO基因，前提是需要一段已知的EPO基因核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物，D正確。答案：A2．解析：基因表達(dá)載體構(gòu)建過(guò)程中需要限制酶和DNA連接酶兩種工具酶處理，A正確；據(jù)圖可知，小鼠有編碼紅、黃、藍(lán)熒光蛋白的基因，前端有腦組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子，肌肉細(xì)胞不會(huì)表達(dá)顏色基因，故若小鼠細(xì)胞含一個(gè)表達(dá)載體T（不含Cre酶），其肌肉組織細(xì)胞呈無(wú)色，B正確；1oxP1、1oxP2位置如圖2黑白三角符號(hào)所示，兩個(gè)loxP1和兩個(gè)loxP2之間的基因最多會(huì)被Cre酶敲除一次，將含Cre酶的病毒注入小鼠體內(nèi)，Cre酶表達(dá)情況不同，識(shí)別的loxP不同，則有可能未敲除熒光蛋白基因，此時(shí)為紅色（同不含Cre酶時(shí)），也有可能敲除兩個(gè)loxP1之間的紅色熒光蛋白基因，此時(shí)為黃色，也有可能敲除兩個(gè)1oxP2之間的紅色和黃色熒光蛋白基因，此時(shí)為藍(lán)色，因而不同腦細(xì)胞會(huì)差異表達(dá)紅色、黃色或藍(lán)色熒光蛋白基因，C錯(cuò)誤；小鼠腦組織細(xì)胞內(nèi)有2個(gè)相同表達(dá)載體T（含Cre酶），Cre酶對(duì)每個(gè)DNA片段隨機(jī)剪切，因而細(xì)胞的顏色由細(xì)胞內(nèi)兩種熒光蛋白的顏色疊加而成，故其腦組織細(xì)胞可能出現(xiàn)兩種顏色，D正確。答案：C3．解析：PCR體系中需要的是耐高溫的DNA聚合酶，不是從受體細(xì)胞中提取的DNA聚合酶，A錯(cuò)誤；過(guò)程Ⅱ擬對(duì)單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，根據(jù)DNA分子半保留復(fù)制特點(diǎn)可知，該過(guò)程理論上至少需要2n－1個(gè)引物B，B錯(cuò)誤；利用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)對(duì)某些微量RNA病毒進(jìn)行檢測(cè)時(shí)可提高檢測(cè)的靈敏度，是因?yàn)樵黾恿舜郎y(cè)RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測(cè)，C正確；PCR反應(yīng)中溫度呈現(xiàn)周期性變化，其中加熱到90～95℃的目的是使雙鏈DNA解聚為單鏈，然后冷卻到55～60℃使引物與互補(bǔ)DNA鏈結(jié)合，繼續(xù)加熱到70～75℃，目的是在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸。所以PCR反應(yīng)中周期性的溫度可在一定范圍內(nèi)設(shè)置，不是特定的，D錯(cuò)誤。答案：C4．解析：DNA在冷酒精中溶解度很低，提取DNA時(shí)可加入酒精，是為了讓DNA析出，蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解，A正確；將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后，可用二苯胺試劑在沸水浴條件下進(jìn)行鑒定，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，B正確；DNA帶負(fù)電，電泳鑒定DNA利用了DNA在電場(chǎng)中會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)的原理，C正確；因?yàn)橘|(zhì)粒的本質(zhì)是環(huán)狀的DNA，限制酶Ⅰ和Ⅱ處理后電泳只有一條條帶，可能是該質(zhì)粒上有一個(gè)切割位點(diǎn)，也可能沒(méi)有切割位點(diǎn)，D錯(cuò)誤。答案：ABC5．解析：②過(guò)程需要兩種引物，引物中C、G堿基的含量一般不相同，A錯(cuò)誤；為了使目的基因與質(zhì)粒正確連接，③過(guò)程利用pvul和sspl雙酶切目的基因與運(yùn)載體，B正確；精子介導(dǎo)法是利用精子將重組目的基因直接導(dǎo)入卵細(xì)胞的過(guò)程，C錯(cuò)誤；重組質(zhì)粒中含有氨芐青霉素抗性基因，所以篩選導(dǎo)入PBR322—Fst的大腸桿菌可在培養(yǎng)基中添加氨芐青霉素，D正確。答案：BD6．解析：（1）科研人員以提取的某白血病人外周血細(xì)胞總RNA為模板，經(jīng)過(guò)逆（反）轉(zhuǎn)錄過(guò)程合成cDNA。DNA分子是雙鏈，PCR時(shí)以每一條為模板，合成子代DNA，因此需要兩種引物。據(jù)圖可知，如果融合基因UBA2—WTIP是在UBA2基因的第16外顯子與WTIP基因的第2外顯子處拼接而成，那么該基因長(zhǎng)度為239bp，能以F1和R1引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，因此如果提取該病人的DNA，使用圖中F1和R1引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若出現(xiàn)239bp擴(kuò)增片段，該融合基因的融合方式是基因組水平融合。（2）PCR時(shí)，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3′端開(kāi)始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5′端向3′端延伸的，①位置前面為ATG，是翻譯的起始位置，若FLAG標(biāo)簽基因序列插入①位置，UBA2—WTIP融合基因編碼的蛋白質(zhì)前端有一段信號(hào)肽，蛋白質(zhì)前端的信號(hào)肽一般會(huì)在蛋白質(zhì)成熟時(shí)被切割掉，不能得到帶有FLAG肽鏈的蛋白質(zhì)，因此一般不能插入①位置。標(biāo)簽基因序列本身含有啟動(dòng)子和終止子序列，不需要插在目的基因中的啟動(dòng)子和終止子之間，因此若在下游引物R2②③處插入FLAG標(biāo)簽基因序列和EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，引物中TCA對(duì)應(yīng)終止密碼，則③位置為FLAG標(biāo)簽基因序列，F(xiàn)LAG標(biāo)簽基因編碼鏈序列（5′GATTACAAGGATGACGACGATAAG3′），③處序列與此互補(bǔ)，為5′CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC3′。（3）檢測(cè)相關(guān)蛋白質(zhì)是否表達(dá)的方法是抗原—抗體雜交。據(jù)圖2結(jié)果可知，與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對(duì)照細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)錄WTIP基因的KG－la細(xì)胞增殖較少，轉(zhuǎn)錄UBA2—WTIP融合基因的KG－la細(xì)胞增殖較多，據(jù)此可知，UBA2—WTIP融合基因能在體外促進(jìn)白血病細(xì)胞增殖，WTIP基因能抑制白血病細(xì)胞的增殖。答案：（1）逆（反）轉(zhuǎn)錄兩提取該病人的DNA，使用圖中F1和R1引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若出現(xiàn)239bp擴(kuò)增片段，該融合基因的融合方式是基因組水平融合（2）蛋白質(zhì)前端的信號(hào)肽一般會(huì)在蛋白質(zhì)成熟時(shí)被切割掉，所以不能得到帶有FLAG肽鏈的蛋白質(zhì)CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC（3）抗原—抗體雜交UBA2—WTIP融合基因能在體外促進(jìn)白血病細(xì)胞增殖，WTIP基因能抑制白血病細(xì)胞的增殖7．解析：分析題干可知，原位PCR技術(shù)是通過(guò)摻入標(biāo)記基團(tuán)直接顯色或結(jié)合原位雜交進(jìn)行檢測(cè)的方法，故推測(cè)原位PCR技術(shù)可用于人類β－地中海貧血致病基因的檢測(cè)，A正確；因?yàn)榻M織細(xì)胞間的物質(zhì)會(huì)吸附Mg2＋，故原位PCR反應(yīng)體系中使用的Mg2＋濃度要比常規(guī)PCR高，B錯(cuò)誤；在一定范圍內(nèi)，反應(yīng)體系中引物的G、C堿基含量越高，其結(jié)合的特異性越強(qiáng)，但G、C過(guò)高，不利于退火，從而阻礙目標(biāo)DNA的擴(kuò)增，C錯(cuò)誤；dNTP作為擴(kuò)增的原料會(huì)依次連接到子鏈的3′端，D錯(cuò)誤。答案：A8．解析：④為對(duì)照組，把含CYP3A基因啟動(dòng)子及LUC基因的表達(dá)載體導(dǎo)入細(xì)胞，A錯(cuò)誤；T-2毒素是無(wú)關(guān)變量，每組加入的含量要相同，因此與④組相比，①組中加入T-2毒素的含量相同，B錯(cuò)誤；實(shí)驗(yàn)的因變量是熒光素酶的活性，可通過(guò)檢測(cè)熒光素酶的活性來(lái)計(jì)算啟動(dòng)子活性相對(duì)值，熒光素酶的活性越大，啟動(dòng)子活性相對(duì)值就越大，C正確；由圖可知，②③④這三組的啟動(dòng)子活性相對(duì)值都大于0，說(shuō)明調(diào)控序列的缺失使T-2毒素可以誘導(dǎo)CYP3A基因表達(dá)，D錯(cuò)誤。答案：C9．解析：（1）流感病毒包膜來(lái)源于宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜，主要由蛋白質(zhì)和磷脂組成，病毒沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，包膜上血凝素的合成場(chǎng)所在宿主細(xì)胞的核糖體。（2）由圖可知，引物b、c可與HA1兩端的堿基序列結(jié)合，故PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)應(yīng)選擇圖中引物b和c。若設(shè)計(jì)引物時(shí)含有HA1的終止密碼子的編碼序列，則IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達(dá)載體轉(zhuǎn)錄后形成mRNA，核糖體讀到終止密碼子時(shí)就停止翻譯，導(dǎo)致HA1基因之后的IgGFc基因的mRNA序列不能正常翻譯，產(chǎn)生的HA1上不含IgGFc標(biāo)簽，因此設(shè)計(jì)引物時(shí)，不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列。（3）由圖可知，限制酶EcoRⅤ切割可產(chǎn)生平末端，其識(shí)別切割位點(diǎn)恰巧處于IL-2SS和IgGFc中間，可選擇該酶對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割，然后直接將PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒A混合，同時(shí)加入T4DNA連接酶（將DNA片段連接起來(lái)），使得目的基因與質(zhì)粒A相連。由圖可知HA1基因片段長(zhǎng)度為1038－51＝987bp，重組質(zhì)粒長(zhǎng)度為5554＋1038－51＝6541bp，IgGFc基因片段長(zhǎng)度為717bp，二者正向相連時(shí)BamHⅠ作用于HA1中，SacⅠ酶作用于IgGFc末端，完全酶切后的產(chǎn)物的長(zhǎng)度約為717＋1038－694＝1061bp、5554＋1038－51－1061＝5480bp。（4）載體中人工構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動(dòng)子可激活或者抑制目的基因的表達(dá)