出口活魚(yú)克林霉素檢測(cè)技術(shù)規(guī)范4.2高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。4.3天平：感量0.01g,0.0001g。4.4搗肉機(jī)。4.5氮?dú)鉂饪s儀。4.6具塞聚丙婚離心管：50mL。4.8振蕩器。5抽樣與樣品制備5.1檢測(cè)批和抽樣數(shù)量按出口活魚(yú)同一養(yǎng)殖池塘、同一規(guī)格活魚(yú)為一檢測(cè)批。每檢驗(yàn)批隨即抽取樣品時(shí)，至少取活魚(yú)兩條以上，且保證總重量大于1.0kg,標(biāo)明標(biāo)記并及時(shí)送實(shí)驗(yàn)室。5.2樣品制備送實(shí)驗(yàn)室待測(cè)活魚(yú)，將其室息后，開(kāi)膛，去除內(nèi)臟，取可食部分用搗肉機(jī)搗碎成漿狀，然后按四分法分樣，均分成2份，裝入潔凈容器中密封，并標(biāo)明標(biāo)記。5.3試樣的保存將試樣于一18℃冷凍保存。在抽樣及樣品制備的操作過(guò)程中，應(yīng)防止樣品受到污染。6測(cè)定步驟稱(chēng)取5g均勻試樣(精確到0,01g)于50ml.離心管中，加入15ml.乙腈，渦旋混勻1min,振蕩10min.在4℃下以8000r/min轉(zhuǎn)速離心5min.取上清液于另一離心管中，殘?jiān)?0mL.乙腈洗滌，渦旋30s后以8000r/min離心5min,合并上清液。加人15mL乙腈飽和正己烷，振蕩10min,離心分離后棄去正已烷，合并乙腈層，40℃下氮?dú)獯蹈?，?ml.20%甲醇水溶液溶解。上述溶解液過(guò)OasisHLB柱.依次用3mL水，3mL20%甲醇水溶波淋洗，再用5mL甲醇洗脫，洗脫液于40℃氮?dú)獯蹈?。?mL乙腈水(1+1,體積比)溶解殘?jiān)?，過(guò)0.22gm濾膜，供高效液相色譜或高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)諧測(cè)定。6.3.1液相色譜法6.3.1.1液相色譜條件液相色譜條件如下：a)色譜柱：C柱，150mm×2.1mm(內(nèi)徑),5gm或相當(dāng)者；e)流動(dòng)相：乙腈-0.1mol/按照液相色譜條件對(duì)樣液及標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，如果待測(cè)樣品溶液中被測(cè)物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測(cè)物的保留時(shí)間偏差在土2.5%之內(nèi)，在6.3,1.1色譜條件下，克林霉素的參考保留時(shí)間為6.1min.標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖參見(jiàn)附錄A (1)本方法克林霉素的回收率為：82.9%~94.5%,不同活魚(yú)基質(zhì)的淤加回收及精密度參見(jiàn)附錄B中表B.1.03578本方法克林霉素的檢測(cè)限為5pg/kg。本方法克林霉素回收率為：81.1%～98.4%,不同活魚(yú)基質(zhì)的添加回收及精密度參見(jiàn)表B.2。(資料性附錄)克林霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的液相色譜圖圖A.1克林霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的液相色譜圖(0.25μg/mL)123456白鰱魚(yú)15.0rag/kg時(shí)2356白鰱魚(yú)(資料性附錄)質(zhì)譜/質(zhì)譜儀參考質(zhì)譜條件!”參考質(zhì)譜條件：a)毛細(xì)管電壓：4000V;b)霧化氣壓力：35