試驗(yàn)四

食品中大腸菌群測(cè)定食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第1頁(yè)一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)掌握大腸菌群原理及其檢驗(yàn)方法，以判別食品衛(wèi)生質(zhì)量了解MPN測(cè)定法在食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中意義食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第2頁(yè)二、試驗(yàn)原理大腸菌群是指一群在一定培養(yǎng)條件下可發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。該菌主要起源自人畜糞便，作為糞便污染指標(biāo)評(píng)價(jià)食品衛(wèi)生情況，推斷食品中腸道致病菌污染可能。食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第3頁(yè)最近似數(shù)測(cè)定法（MPN）是指對(duì)未知樣品做連續(xù)10倍稀釋，選擇3個(gè)連續(xù)10倍稀釋液，每種稀釋液接種3管裝有培養(yǎng)基試管中培養(yǎng)，依據(jù)LST初發(fā)酵試驗(yàn)以及BGLB發(fā)酵證實(shí)試驗(yàn)，證實(shí)大腸菌群陽(yáng)性管數(shù)，查MPN檢索表，匯報(bào)每g（mL）樣品中大腸菌群最可能數(shù)。食品中大腸菌群數(shù)以每g（mL）樣品中大腸菌群最可能數(shù)來(lái)表示，即為大腸菌群MPN值。食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第4頁(yè)三、試驗(yàn)器材（一）培養(yǎng)基月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯（LST）培養(yǎng)基煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）培養(yǎng)基（二）試驗(yàn)材料市售飲料（三）其它三角瓶，試管，培養(yǎng)皿，移液管（四）儀器超凈工作臺(tái)，電子天平，高壓蒸汽滅菌鍋食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第5頁(yè)四、試驗(yàn)準(zhǔn)備（一）配制培養(yǎng)基和試劑（以中央臺(tái)為單位）

1、配制生理鹽水：1000mL

NaCl8.5g水1000mL

分裝：3個(gè)三角瓶（含玻珠）中，225mL/個(gè)9支試管，3支/組，9mL/支

滅菌：121~126℃滅菌20min食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第6頁(yè)2、月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯（LST）培養(yǎng)基：300mL分裝到27個(gè)已裝有杜氏小管試管中，10mL/個(gè)包扎（3支一捆），112~115℃滅菌30min胰蛋白胨

6g

NaCl

1.5g乳糖

1.5gK2HPO40.825gKH2PO40.825g

十二烷基硫酸鈉

0.03g水

300mLpH6.8食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第7頁(yè)3、煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）培養(yǎng)基：150mL分裝到12個(gè)已裝有杜氏小管試管中，10mL/個(gè)包扎，112~115℃滅菌30min蛋白胨

1.5g乳糖

1.5g牛膽粉溶液30mL

0.1%煌綠水溶液

2mL

水

150mLpH7.2牛膽粉溶液制法：將3g牛膽粉溶于30mL水中，調(diào)pH至7.0~7.5BGLB制法：先將蛋白胨、乳糖溶于約100ml水中，加入牛膽粉溶液30mL，調(diào)整pH，再加入0.1%煌綠水溶液，最終用水補(bǔ)足到150ml，用紗布過(guò)濾后，再分裝到試管中。食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第8頁(yè)（二）其它器具（每個(gè)組準(zhǔn)備）移液管10mL1支/組1mL

10支/組食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第9頁(yè)五、試驗(yàn)步驟1、樣品處理：

以無(wú)菌操作，先用酒精棉球擦拭樣品表面，用無(wú)菌剪刀將包裝剪破，量取檢樣25mL放入225mL滅菌生理鹽水當(dāng)中，充分振蕩，混合均勻，制成10-1稀釋度樣品2、梯度稀釋法依次稀釋樣品到10-4食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第10頁(yè)3、選擇10-2、10-3、10-4三個(gè)稀釋度樣品均液，用無(wú)菌移液管分別吸收1mL到LST發(fā)酵液試管中，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行（共9管）。4、37℃培養(yǎng)48h5、觀察LST管中小倒管里是否有氣泡。如有氣泡，則繼續(xù)按照下述要求試驗(yàn)；如無(wú)氣泡，則是大腸陰性管（-）食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第11頁(yè)6、如LST小倒管中有氣泡，則按照無(wú)菌操作要求，用接種環(huán)將產(chǎn)氣LST發(fā)酵液接種到BGLB試管中，一只產(chǎn)氣LST發(fā)酵液對(duì)應(yīng)一只BGLB試管。7、37℃培養(yǎng)48h8、觀察BGLB小倒管中是否有氣泡，如有氣泡，則記為大腸陽(yáng)性管（+）；如無(wú)氣泡，則記為大腸陰性管（-）。食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第12頁(yè)大腸菌群計(jì)數(shù)檢驗(yàn)流程0將產(chǎn)氣試管內(nèi)樣品接種到BGLB肉湯LST不產(chǎn)氣（-）

小導(dǎo)管里無(wú)氣泡

LST產(chǎn)氣（+）食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第13頁(yè)9、依據(jù)經(jīng)確證后對(duì)應(yīng)濃度陽(yáng)性管數(shù)查MPN表，匯報(bào)樣品中大腸菌群MPN值。陽(yáng)性管數(shù)MPN95%可信限0.100.010.001下限上限000<3.0-9.50013.00.159.61003.60.1718333>1100420-食品中大腸菌群的測(cè)定專家講座第14頁(yè)五、試驗(yàn)結(jié)果與分析經(jīng)查MPN表，樣品中大腸菌群數(shù)為

MPN/g（mL）陽(yáng)性管數(shù)0.010.0010.0001LST發(fā)酵管BGLB證實(shí)管分析食品中大腸菌群的測(cè)