一、引言嵌合抗原受體T（CAR-T）細(xì)胞是一種經(jīng)基因工程化的T細(xì)胞，通常表達(dá)能識(shí)別特定腫瘤抗原的嵌合抗原受體（chimericantigenreceptor，CAR），進(jìn)而激活免疫系統(tǒng)以消滅腫瘤。CAR通常包含三個(gè)結(jié)構(gòu)域：識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原的胞外域（如scFv）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域（如CD3ζ）和一個(gè)或多個(gè)胞內(nèi)共刺激結(jié)構(gòu)域（如可源自CD28、4-1BB、OX40等）。CAR-T細(xì)胞免疫療法通常是從采集的患者血液中分離出T細(xì)胞，然后在GMP生產(chǎn)車間對(duì)其進(jìn)行基因改造，通過逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體、轉(zhuǎn)座系統(tǒng)（如SB轉(zhuǎn)座系統(tǒng)）或直接將mRNA轉(zhuǎn)導(dǎo)到T細(xì)胞內(nèi)，使T細(xì)胞表面表達(dá)CAR。在生產(chǎn)車間對(duì)這些T細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增后將其回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，這種經(jīng)過修飾的T細(xì)胞能夠特異、高效地識(shí)別和殺死腫瘤細(xì)胞，從而達(dá)到在治療腫瘤的同時(shí)又避免對(duì)正常組織的損傷。在靶向CD19分子治療B細(xì)胞惡性腫瘤（急性B淋巴細(xì)胞白血病及B細(xì)胞淋巴瘤等）的臨床試驗(yàn)中，CAR-T細(xì)胞顯示出令人振奮的療效及較少的副作用。2017年8月31日，諾華（Novartis）公司宣布，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FoodandDrugAdministration，F(xiàn)DA）已批準(zhǔn)其開發(fā)的靶向CD19的CAR-T產(chǎn)品Tisagenlecleucel（曾用名為CTL019，商品名為Kymriah）上市，用于治療B細(xì)胞前體急性淋巴性白血?。╝cutelymphoblasticleukemia，ALL）。不到兩個(gè)月后，F(xiàn)DA又批準(zhǔn)了第二個(gè)CAR-T藥物上市，商品名為Yescarta（axicabtageneciloleucel），是KitePharma公司開發(fā)的同樣靶向CD19的CAR-T療法，用于治療某些類型的大B細(xì)胞淋巴瘤的成年患者。針對(duì)其他惡性腫瘤的CAR-T細(xì)胞治療也在不斷進(jìn)展。目前已有500多項(xiàng)關(guān)于CAR-T的臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行。對(duì)于惡性血液病，需要繼續(xù)開展臨床試驗(yàn)，以確定新靶點(diǎn)和新組合。對(duì)于實(shí)體腫瘤，需要研究更好的靶點(diǎn)，或優(yōu)化不完善的靶點(diǎn)，以及克服腫瘤微環(huán)境中阻礙T細(xì)胞功能的障礙。中國(guó)是除了美國(guó)之外的第二大進(jìn)行CAR-T臨床研究的國(guó)家。截至2018年6月，中國(guó)進(jìn)行的CAR-T臨床試驗(yàn)占據(jù)了全球的30%左右。從目前臨床研究的涉及范圍與研究程度來看，CAR-T已經(jīng)成為了一種不可替代的全新的免疫治療療法，未來CAR-T將會(huì)成為腫瘤治療中一塊重要的基石。隨著越來越多的CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品申請(qǐng)臨床試驗(yàn)和上市，由此帶來的這類新產(chǎn)品的質(zhì)量控制、有效性和安全性研究以及相關(guān)管理問題亟待解決。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于細(xì)胞治療和基因治療產(chǎn)品的技術(shù)指導(dǎo)原則中對(duì)此有一些基本的敘述，但這些指導(dǎo)原則較為宏觀，沒有具體針對(duì)CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的技術(shù)要求和規(guī)范。本文在這些指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上，結(jié)合CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的特點(diǎn)，進(jìn)一步探討其質(zhì)量控制和非臨床研究的一般原則，以及其中的幾個(gè)關(guān)鍵問題。二、CAR-T細(xì)胞質(zhì)量控制和非臨床研究的一般原則圖1總結(jié)了CAR-T細(xì)胞質(zhì)量控制和非臨床研究的一般原則。圖1CAR-T細(xì)胞治療質(zhì)量控制與非臨床研究一般原則的結(jié)構(gòu)示意圖（一）質(zhì)量控制CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品目前還沒有統(tǒng)一的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，各個(gè)制造商在CAR設(shè)計(jì)、培養(yǎng)技術(shù)、基因?qū)氲姆椒ā⑵渌馨图?xì)胞的去除方法等方面各自不同，對(duì)CAR-T細(xì)胞的質(zhì)量控制需結(jié)合其具體的生產(chǎn)工藝情況和特點(diǎn)進(jìn)行考慮。CAR-T細(xì)胞的生產(chǎn)過程應(yīng)按照cGMP的要求進(jìn)行。cGMP的意圖是提供一個(gè)框架，以確保在受到良好控制的設(shè)施和設(shè)備中，由經(jīng)過良好的定期培訓(xùn)合格的工作人員進(jìn)行高質(zhì)量的生產(chǎn)，同時(shí)需要一個(gè)廣泛的系統(tǒng)來記錄操作的各個(gè)方面以證明持續(xù)的合規(guī)性。CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量控制內(nèi)容，須在參考國(guó)內(nèi)外相關(guān)指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上，從生物產(chǎn)品、細(xì)胞產(chǎn)品和基因治療產(chǎn)品不同層次綜合考慮其特性，進(jìn)行全面的產(chǎn)品質(zhì)量、安全性和有效性的檢驗(yàn)。CAR-T細(xì)胞作為一種活的“藥物”，其制備流程復(fù)雜，質(zhì)量控制環(huán)節(jié)眾多，需要對(duì)其進(jìn)行全過程的質(zhì)量控制。CAR-T細(xì)胞的質(zhì)量控制包括對(duì)生產(chǎn)用材料的檢驗(yàn)、生產(chǎn)過程控制的過程檢驗(yàn)和成品的放行檢驗(yàn)，應(yīng)分別制定相應(yīng)的檢測(cè)指標(biāo)和可接受的標(biāo)準(zhǔn)范圍。另外，還應(yīng)對(duì)CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品進(jìn)行生產(chǎn)工藝驗(yàn)證及穩(wěn)定性研究等。1.生產(chǎn)用材料的控制CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)用材料是指用于制備該細(xì)胞治療產(chǎn)品的物質(zhì)或材料，包括細(xì)胞、基因修飾用載體物質(zhì)、培養(yǎng)基、細(xì)胞因子、各種添加成分、凍存液和輔料等。生產(chǎn)用材料直接關(guān)系到產(chǎn)品的質(zhì)量，因此研究者應(yīng)建立良好、規(guī)范的生產(chǎn)用材料的質(zhì)量管理體系，包括使用風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估、生產(chǎn)用材料供應(yīng)商的審計(jì)和質(zhì)量檢測(cè)等工作程序。如果由同種異體供者提供T細(xì)胞，供者細(xì)胞來源應(yīng)符合國(guó)家相關(guān)的法律法規(guī)和倫理的要求，供者細(xì)胞的獲取、運(yùn)輸、分選、檢驗(yàn)或保存等操作步驟應(yīng)經(jīng)過研究和驗(yàn)證，并在此基礎(chǔ)上制定明確的規(guī)范和要求，比如供者細(xì)胞的特征、培養(yǎng)情況、代次、生長(zhǎng)特性、保存狀態(tài)、保存條件以及檢驗(yàn)情況等。原則上，對(duì)于適合于建立細(xì)胞庫的供者細(xì)胞應(yīng)建立細(xì)胞庫進(jìn)行保存和生產(chǎn)。細(xì)胞庫的層級(jí)可根據(jù)細(xì)胞自身特性、生產(chǎn)情況和臨床應(yīng)用情況綜合考慮；并應(yīng)建立細(xì)胞庫的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，檢驗(yàn)應(yīng)滿足安全性、質(zhì)量可控性和（或）有效性的基本要求。自體捐獻(xiàn)者不需要資格確認(rèn)，其病原體篩查和檢測(cè)是建議性而非強(qiáng)制性的。對(duì)于生產(chǎn)過程細(xì)胞，如生產(chǎn)病毒載體所用細(xì)胞，應(yīng)符合來源和歷史培養(yǎng)情況清晰、安全性風(fēng)險(xiǎn)可控、質(zhì)量滿足生產(chǎn)工藝以及建立細(xì)胞庫管理等基本原則。目前用于CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)過程中基因修飾的載體主要是慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，以及采用mRNA電轉(zhuǎn)等方法轉(zhuǎn)染T細(xì)胞，使得T細(xì)胞表面表達(dá)CAR，從而特異性識(shí)別和結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的抗原并裂解腫瘤細(xì)胞?；蛐揎椨幂d體從生產(chǎn)流程上看是CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)過程的原材料，但其本質(zhì)是作為產(chǎn)品的組成部分進(jìn)入人體，關(guān)于其質(zhì)量控制的要求，將在后面的“3.關(guān)鍵問題”中做進(jìn)一步的敘述。在CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)過程中使用的培養(yǎng)基、血清、細(xì)胞因子、酶、抗體、抗生素和磁珠等每種物質(zhì)都應(yīng)予以明確規(guī)定，并評(píng)估其是否適合預(yù)期用途。應(yīng)通過檢驗(yàn)特性、純度、細(xì)菌內(nèi)毒素、無菌性、外源因子和生物活性，來證明其質(zhì)量。建議應(yīng)盡量避免使用含人或動(dòng)物來源的成分，使用成分盡可能簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基，并避免使用存在致敏可能性的試劑，如β-內(nèi)酰胺類抗生素。若使用商業(yè)來源培養(yǎng)基，應(yīng)當(dāng)選擇有資質(zhì)的生產(chǎn)商并由其提供培養(yǎng)基的組成成分資料及相關(guān)質(zhì)量合格證明。除特殊情況外，應(yīng)當(dāng)盡可能避免在T細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用人源或動(dòng)物源性血清，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動(dòng)物血清，應(yīng)當(dāng)確保其無特定動(dòng)物源性病毒污染。嚴(yán)禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。若培養(yǎng)基中含有人的血液成分，如白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和各種細(xì)胞因子等，應(yīng)明確其來源、批號(hào)、質(zhì)量檢定合格報(bào)告，并盡量采用監(jiān)管機(jī)構(gòu)已批準(zhǔn)的可臨床應(yīng)用的產(chǎn)品。細(xì)胞治療產(chǎn)品中使用的輔料應(yīng)符合藥品輔料相關(guān)的要求，宜優(yōu)選經(jīng)批準(zhǔn)可用于人體的輔料，否則需要開展全面的研究與評(píng)估。2.過程控制和過程檢驗(yàn)在CAR-T細(xì)胞的生產(chǎn)過程中應(yīng)進(jìn)行過程控制和過程檢驗(yàn)。過程控制是對(duì)生產(chǎn)工藝過程的監(jiān)控，包括生產(chǎn)工藝參數(shù)的監(jiān)測(cè)和過程控制指標(biāo)的達(dá)成等。研究者應(yīng)在對(duì)整體工藝的理解和對(duì)生產(chǎn)產(chǎn)品累積經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，明確過程控制中關(guān)鍵的生產(chǎn)步驟、制定敏感參數(shù)的限定范圍，以避免工藝發(fā)生偏移。過程檢驗(yàn)是對(duì)制備過程中的細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控，在關(guān)鍵步驟或中間產(chǎn)品的層面上對(duì)產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行相應(yīng)的檢驗(yàn)。通過建立這些過程檢驗(yàn)的檢測(cè)方法和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，與細(xì)胞放行檢驗(yàn)相互結(jié)合和互補(bǔ)，以達(dá)到對(duì)整體工藝和產(chǎn)品質(zhì)量的控制，保證生產(chǎn)過程的可重復(fù)性和最終產(chǎn)品批與批之間的一致性。3.放行檢驗(yàn)在CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品放行之前，必須進(jìn)行適當(dāng)?shù)臏y(cè)試，以確保產(chǎn)品符合明確的放行標(biāo)準(zhǔn)。放行標(biāo)準(zhǔn)的基本原則是提供足夠的測(cè)試，以確保產(chǎn)品的鑒別、純度、安全性和效力等符合要求。細(xì)胞產(chǎn)品的這些特性通過各種方法進(jìn)行測(cè)試，并通過頒發(fā)分析證書來放行產(chǎn)品，分析證書概括了所采用的測(cè)試方法和每個(gè)測(cè)試結(jié)果以及其可接受范圍。放行檢驗(yàn)用方法應(yīng)經(jīng)過研究與驗(yàn)證，特別是對(duì)于建立的新方法應(yīng)進(jìn)行全面的驗(yàn)證，對(duì)于藥典中收錄的方法應(yīng)進(jìn)行適用性的驗(yàn)證。當(dāng)產(chǎn)品的保質(zhì)期不允許進(jìn)行完整的質(zhì)控檢測(cè)程序用于放行時(shí)，可進(jìn)行簡(jiǎn)化的放行檢測(cè)程序。在這種情況下，應(yīng)明確地描述和說明簡(jiǎn)化的放行檢測(cè)程序的理由，同時(shí)更關(guān)鍵的是，在放行時(shí)缺少的信息需要通過合理的過程檢驗(yàn)和更廣泛的工藝驗(yàn)證進(jìn)行適當(dāng)?shù)膹浹a(bǔ)。CAR-T細(xì)胞的質(zhì)量控制檢測(cè)項(xiàng)目應(yīng)當(dāng)建立在產(chǎn)品質(zhì)量研究以及對(duì)生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)過程和臨床適應(yīng)癥充分理解的基礎(chǔ)之上，同時(shí)兼顧產(chǎn)品的特性和當(dāng)下的科學(xué)認(rèn)知與共識(shí)。隨著研究的不斷深入（如從臨床前階段進(jìn)行至臨床階段），工藝相關(guān)信息應(yīng)逐漸獲得累積，檢驗(yàn)方法應(yīng)逐步完善，以適應(yīng)各階段的質(zhì)量控制要求，建議確證性臨床試驗(yàn)用樣品的質(zhì)量控制與商業(yè)化生產(chǎn)時(shí)的質(zhì)量控制要求保持一致。質(zhì)量控制一般應(yīng)考慮產(chǎn)品鑒別、生物學(xué)效力、純度、雜質(zhì)、細(xì)胞數(shù)量（活細(xì)胞數(shù)、功能細(xì)胞數(shù)等）和一般檢測(cè)（如無菌、支原體、內(nèi)毒素、外觀等）。驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)的制定應(yīng)以臨床前研究批次、臨床研究批次和驗(yàn)證批次中檢測(cè)獲得的數(shù)據(jù)，以及其他相關(guān)數(shù)據(jù)（如穩(wěn)定性研究、文獻(xiàn)報(bào)道和經(jīng)驗(yàn)等）確定。4.生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)在對(duì)CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品制備的全過程進(jìn)行全面的工藝研究和進(jìn)行連續(xù)多個(gè)批次（至少3個(gè)批次）生產(chǎn)的工藝驗(yàn)證。在此基礎(chǔ)上，制定合適的工藝參數(shù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保對(duì)每一過程的有效控制。對(duì)于工藝驗(yàn)證時(shí)生產(chǎn)的幾個(gè)批次的產(chǎn)品，與常規(guī)生產(chǎn)的產(chǎn)品相比，應(yīng)對(duì)其中間產(chǎn)品和成品進(jìn)行更為廣泛的檢測(cè)、分析和鑒定，并為確定常規(guī)生產(chǎn)產(chǎn)品的過程檢驗(yàn)和放行檢驗(yàn)的檢測(cè)指標(biāo)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)置提供部分依據(jù)。5.穩(wěn)定性研究在CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)和使用過程中，嚴(yán)格管理的冷鏈運(yùn)輸以及低溫存儲(chǔ)對(duì)保證細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量，防止細(xì)菌及支原體污染等情況的發(fā)生具有重要作用。對(duì)于生產(chǎn)過程中需要臨時(shí)保存的樣品應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性研究，以支持其保存條件與存放期。CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品穩(wěn)定性研究的基本原則可參照一般生物產(chǎn)品穩(wěn)定性研究的要求，并根據(jù)產(chǎn)品自身的特點(diǎn)、臨床用藥的需求，以及保存、包裝和運(yùn)輸?shù)木唧w情況設(shè)計(jì)合理的研究方案。例如，對(duì)于冷凍儲(chǔ)存的細(xì)胞產(chǎn)品一般應(yīng)模擬使用情形（如細(xì)胞復(fù)蘇過程）開展必要的凍融研究?？疾祉?xiàng)目建議涵蓋細(xì)胞特性、生物學(xué)效力、細(xì)胞純度、活細(xì)胞數(shù)和比率、功能細(xì)胞數(shù)及與安全性相關(guān)的內(nèi)容等。（二）非臨床研究細(xì)胞治療產(chǎn)品的非臨床研究主要包括體外和體內(nèi)（動(dòng)物）藥效學(xué)研究（抗腫瘤活性）、藥代動(dòng)力學(xué)研究（CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)的增殖、分布和存續(xù)時(shí)間）及動(dòng)物體內(nèi)的安全性研究。CAR-T細(xì)胞的體外抗腫瘤活性與其效力/生物學(xué)活性研究密切相關(guān)，因此請(qǐng)參考“3.3.效力試驗(yàn)”相關(guān)論述。本部分只討論涉及動(dòng)物的非臨床研究。1.GLP符合性CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品的藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)研究不需要在《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》（goodlaboratorypractice，GLP）條件下進(jìn)行。而非臨床安全性評(píng)價(jià)研究應(yīng)符合GLP要求，其中對(duì)某些可伴隨在藥效學(xué)研究中進(jìn)行的特殊指標(biāo)的檢測(cè)也可以在非GLP條件下開展，但應(yīng)保證試驗(yàn)結(jié)果的可靠性、完整性，并評(píng)估其對(duì)產(chǎn)品總體安全性評(píng)價(jià)的影響。2.受試物來源用于非臨床研究的CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品一般不必要使用患者的血液進(jìn)行制備，可以來源于健康志愿者的捐贈(zèng)。采用動(dòng)物來源替代產(chǎn)品進(jìn)行一些概念驗(yàn)證性研究（proof-of-concept）也具有重要的支持作用。3.受試物分析鑒于CAR-T產(chǎn)品制備過程的特殊性，應(yīng)提供受試物完整的質(zhì)量分析報(bào)告，并應(yīng)提供覆蓋所有給藥濃度以及模擬所有運(yùn)輸過程、處理操作，直至動(dòng)物給藥前過程的受試物穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)。如果在給藥前需要經(jīng)過復(fù)蘇、重懸等處理操作，至少還要在動(dòng)物給藥前對(duì)細(xì)胞形態(tài)、活細(xì)胞總數(shù)、細(xì)胞活率、顏色及除細(xì)胞之外的其他外源性異物等進(jìn)行觀察或檢測(cè)。4.體內(nèi)藥效學(xué)研究目前常用免疫缺陷鼠的移植瘤小鼠模型研究CAR-T細(xì)胞對(duì)腫瘤的抑制作用。對(duì)于治療淋巴細(xì)胞白血病或淋巴瘤的CAR-T細(xì)胞，可采用人源細(xì)胞，如Raji、Daudi、Nalm-6、Jeko-1等細(xì)胞株，或者通過基因工程導(dǎo)入特異靶標(biāo)的特殊穩(wěn)定細(xì)胞株（如CD19-K562、CD20-K562等）在免疫缺陷嚙齒類動(dòng)物建立移植淋巴瘤模型。也可采用鼠源細(xì)胞（如A20等）建立鼠源模型評(píng)價(jià)鼠源CAR-T細(xì)胞。由于未轉(zhuǎn)染CAR的T細(xì)胞也會(huì)有非特異性的腫瘤細(xì)胞殺傷作用，除了溶媒對(duì)照外，最好設(shè)置T細(xì)胞對(duì)照組（未轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR的T細(xì)胞、模擬轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞或者半抗原特異性CAR-T細(xì)胞）。CAR-T細(xì)胞藥效研究的最直觀的方法通常采用生物發(fā)光成像（bioluminescentimaging，BLI）技術(shù)，檢測(cè)表達(dá)熒光素酶的腫瘤細(xì)胞。其他檢測(cè)方法包括：①流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量；②流式細(xì)胞術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linkedimmunosorbentassays，ELISA）、MSD（mesoscalediscovery）等免疫學(xué)方法檢測(cè)血清中與腫瘤相關(guān)的細(xì)胞因子的變化，間接反映藥效學(xué)結(jié)果。5.藥代動(dòng)力學(xué)研究在非臨床研究中，還應(yīng)該闡明細(xì)胞的體內(nèi)過程，這對(duì)研究細(xì)胞的活性和安全性至關(guān)重要。由于免疫排斥問題，人源CAR-T細(xì)胞通常采用免疫缺陷動(dòng)物進(jìn)行研究。一般情況下，CAR-T細(xì)胞進(jìn)入體內(nèi)后在腫瘤細(xì)胞的存在下會(huì)大量增殖并發(fā)揮生物學(xué)作用，因此，目前CAR-T細(xì)胞最常用的藥代檢測(cè)模型多為移植瘤模型。非荷瘤模型的分布研究可以進(jìn)行分布差異的對(duì)比。CAR-T細(xì)胞的藥代研究主要關(guān)注目標(biāo)細(xì)胞在體內(nèi)增殖、分布和存續(xù)時(shí)間，可選擇的技術(shù)方法有成像技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、免疫組化技術(shù)、定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction，PCR）技術(shù)等，不同的方法適用于不同的檢測(cè)樣本和檢測(cè)目的。成像法可以直觀檢測(cè)CAR-T細(xì)胞的體內(nèi)分布，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行各種標(biāo)記，如放射性同位素標(biāo)記、遺傳修飾（如表達(dá)綠色熒光蛋白、熒光素酶）標(biāo)記、納米粒子標(biāo)記（如鐵-葡聚糖納米粒子）等；流式細(xì)胞術(shù)可以檢測(cè)動(dòng)物血液、骨髓和脾臟中的CAR-T細(xì)胞；免疫組化的方法可以檢測(cè)脾臟或其他臟器中CD3+

細(xì)胞或CAR+細(xì)胞的分布，以指示人T細(xì)胞在臟器中的分布和累積；定量PCR方法可以檢測(cè)所有類型樣本中代表人源CAR-T細(xì)胞的DNA或者RNA水平。目前，一些新的技術(shù)（如原位雜交等方法）也被開發(fā)用來檢測(cè)CAR-T細(xì)胞的組織分布。6.非臨床安全性研究根據(jù)已經(jīng)進(jìn)行的CAR-T細(xì)胞的臨床研究結(jié)果，該類產(chǎn)品的安全性風(fēng)險(xiǎn)主要包括：細(xì)胞因子釋放綜合征、神經(jīng)毒性、B細(xì)胞減少等。另外，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的成瘤性/致瘤性問題也需要重點(diǎn)考慮。上述不良反應(yīng)需要在非臨床動(dòng)物研究中進(jìn)行何種程度的預(yù)測(cè)國(guó)內(nèi)外尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)動(dòng)物毒理學(xué)研究也存在著動(dòng)物模型、種屬特異性等具有挑戰(zhàn)性的難題。動(dòng)物安全性研究除了常規(guī)毒理學(xué)指標(biāo)（臨床癥狀、體重、攝食量、血清生化、血液學(xué)、大體病理和組織病理學(xué)）外，還包括免疫毒性指標(biāo)，如移植物抗宿主反應(yīng)（graft-versus-hostreaction,GVHR）、外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)及表型分析、血清細(xì)胞因子水平（如IL-2、IL-6、INF-γ、TNF-α等）等的檢測(cè)。另外，如果可能，也可以結(jié)合或者單獨(dú)進(jìn)行安全藥理學(xué)、局部耐受性等研究。一般不進(jìn)行常規(guī)遺傳毒性組合研究和生殖毒性的研究。致瘤性研究也需要進(jìn)行特殊考慮。三、關(guān)鍵問題圖2總結(jié)了Car-T細(xì)胞質(zhì)量控制和非臨床研究的關(guān)鍵問題。圖2CAR-T細(xì)胞治療質(zhì)量控制與非臨床研究關(guān)鍵問題的結(jié)構(gòu)示意圖（一）基因修飾用載體的質(zhì)量控制CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品是基因治療與細(xì)胞治療技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物。載體作為基因治療的工具，可能帶來插入突變、復(fù)制型病毒、外源因子污染等風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)其攜帶的遺傳物質(zhì)是CAR-T細(xì)胞的重要組成部分，是使T細(xì)胞具有強(qiáng)大的識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞活性的重要基礎(chǔ)。因此，載體的質(zhì)量至關(guān)重要，與生產(chǎn)中所用的其他原材料特性完全不同，應(yīng)作為產(chǎn)品的組成部分進(jìn)行管理?；蛐揎椨幂d體的生產(chǎn)和質(zhì)量控制應(yīng)符合已頒布的基因治療產(chǎn)品相關(guān)指導(dǎo)原則的要求。同時(shí)，由于對(duì)基因治療產(chǎn)品多年的研究，其質(zhì)量控制在中國(guó)和國(guó)外已有許多的經(jīng)驗(yàn)和文獻(xiàn)可供參考?；蛐揎椨幂d體應(yīng)是在cGMP條件下生產(chǎn)的，具有高品質(zhì)并已經(jīng)過全面質(zhì)量檢測(cè)的臨床級(jí)產(chǎn)品。載體的生產(chǎn)工藝須經(jīng)過驗(yàn)證，證明它可以用控制的工藝流程重復(fù)生產(chǎn)出安全有效的、質(zhì)量一致的載體。載體生產(chǎn)通常需要的關(guān)鍵原材料是細(xì)胞、培養(yǎng)基和血清以及質(zhì)粒。其中每一項(xiàng)都必須來自經(jīng)批準(zhǔn)的供應(yīng)商，并且應(yīng)該經(jīng)過嚴(yán)格的測(cè)試程序，以降低將外源因子引入生產(chǎn)過程的風(fēng)險(xiǎn)。包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞需要建立細(xì)胞庫體系，而瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的慢病毒載體制備系統(tǒng)需要建立菌種庫及細(xì)胞庫體系，各自需要按照相應(yīng)要求進(jìn)行管理和檢測(cè)。建立的細(xì)胞庫、毒種庫和菌種庫以及源自動(dòng)物的培養(yǎng)基成分同樣需要進(jìn)行廣泛的檢測(cè)。生產(chǎn)過程中收獲的載體應(yīng)進(jìn)行純化，并在適宜的制劑配方下保存，同時(shí)應(yīng)開展穩(wěn)定性研究保證載體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。對(duì)于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、慢病毒載體以及轉(zhuǎn)座子質(zhì)粒系統(tǒng)，載體終產(chǎn)品的質(zhì)量控制通常的檢測(cè)項(xiàng)目見表1。應(yīng)根據(jù)不同載體的本身特點(diǎn)及生產(chǎn)工藝情況，建立其質(zhì)量控制項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)。另外，由于CAR-T細(xì)胞的基因修飾用載體不是直接進(jìn)入患者體內(nèi)，而是隨細(xì)胞的工藝過程經(jīng)過稀釋和洗滌等步驟，因此需要按照工藝驗(yàn)證和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的情況制定合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。表1CAR-T細(xì)胞基因修飾用載體的常規(guī)質(zhì)控項(xiàng)目

RT-PCR:reversetranscription-polymerasechainreaction;ELISA:enzyme-linkedimmunosorbentassay;BSA:bovineserumalbumin;HPLC:highperformanceliquidchromatography;RCR:replication-competentretrovirus;RCL:replication-competentlentivirus.（二）微生物安全性CAR-T細(xì)胞可能產(chǎn)生的微生物安全性問題包括細(xì)菌、真菌、支原體、外源病毒因子的污染以及產(chǎn)生載體來源的復(fù)制型病毒等。對(duì)微生物安全性問題需要極其關(guān)注和高度重視，因?yàn)槲⑸镂廴驹贑AR-T細(xì)胞的生產(chǎn)制備過程中容易發(fā)生，并且細(xì)胞終產(chǎn)品無法去污染處理?？刂艭AR-T細(xì)胞的微生物安全性主要是對(duì)生產(chǎn)用材料的嚴(yán)格檢測(cè)、生產(chǎn)過程按照cGMP要求的嚴(yán)格控制，以及對(duì)產(chǎn)品的微生物檢驗(yàn)。下面主要對(duì)微生物檢驗(yàn)中的無菌檢查、支原體檢查、復(fù)制型病毒檢測(cè)以及微生物快速檢測(cè)方法進(jìn)行介紹。1.無菌檢查無菌檢查的經(jīng)典方法是藥典上所述的14天培養(yǎng)的方法，但由于CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品常常需要在生產(chǎn)后短時(shí)間內(nèi)及時(shí)輸注給患者，因此需要采用革蘭染色或丫啶橙染色等快速的替代方法進(jìn)行中間過程控制和放行檢測(cè)方法，在快速方法得到充分驗(yàn)證前需要兩種方法平行進(jìn)行。每批培養(yǎng)的CAR-T細(xì)胞在患者輸注前均應(yīng)進(jìn)行無菌檢查的監(jiān)測(cè)，建議在培養(yǎng)開始后3～4天起每間隔一定時(shí)間取培養(yǎng)液樣品進(jìn)行，并包括放行前48~72h的檢測(cè)。如果在細(xì)胞制備的早期發(fā)現(xiàn)有污染的情況，應(yīng)終止該批細(xì)胞產(chǎn)品的繼續(xù)制備。產(chǎn)品的放行可僅根據(jù)快速檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行決定，但需要同時(shí)跟蹤14天培養(yǎng)檢測(cè)的情況和監(jiān)測(cè)患者的情況。必須制定計(jì)劃，說明快速放行檢測(cè)的結(jié)果和給藥后取得的結(jié)果沖突時(shí)的解決辦法。通常要求有正式的程序通知受試者的醫(yī)生，識(shí)別發(fā)生感染的組織器官，并測(cè)定抗生素的敏感性，進(jìn)行及時(shí)有效的治療。如果發(fā)生無菌檢查出現(xiàn)陽性結(jié)果的情況，應(yīng)及時(shí)對(duì)生產(chǎn)過程進(jìn)行檢查，提出相應(yīng)的糾正/預(yù)防措施。2.支原體檢查支原體污染可能有幾種不同來源，其中可能的主要來源是培養(yǎng)中使用的動(dòng)物血清產(chǎn)品和細(xì)胞培養(yǎng)的設(shè)施環(huán)境（特別在采用開放的培養(yǎng)系統(tǒng)時(shí)）。建議在高風(fēng)險(xiǎn)的生產(chǎn)階段對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行支原體檢查，例如，在收獲的培養(yǎng)物富集后細(xì)胞洗滌前這個(gè)階段，對(duì)細(xì)胞和培養(yǎng)物上清液進(jìn)行檢測(cè)。由于CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品常常需要在短時(shí)間內(nèi)制造并回輸給患者，采用培養(yǎng)法檢測(cè)支原體通常在時(shí)間上不可行，因此需要同時(shí)采用以PCR為基礎(chǔ)的支原體分析方法或其他快速的替代檢測(cè)方法，需要對(duì)這些方法進(jìn)行驗(yàn)證，證明其具有適當(dāng)?shù)撵`敏度和特異性。3.復(fù)制型病毒的檢測(cè)雖然逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體被設(shè)計(jì)為復(fù)制缺陷型，但在細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)期間或輸入患者后體內(nèi)仍有可能發(fā)生重組，導(dǎo)致產(chǎn)生新型的可復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒（replicationcompetentretrovirus/lentivirus，RCR/L）。美國(guó)FDA發(fā)布的有關(guān)細(xì)胞產(chǎn)品和患者中RCR/L檢測(cè)的指導(dǎo)原則建議在相應(yīng)的病毒載體、細(xì)胞產(chǎn)品和輸注后的患者中用合適的生物學(xué)和（或）分子檢測(cè)方法監(jiān)測(cè)RCR/L。用于篩查載體產(chǎn)品的RCR通常使用生物測(cè)定法，而基因轉(zhuǎn)移后患者的監(jiān)測(cè)依賴于分子或血清學(xué)測(cè)試。分子和血清學(xué)檢測(cè)比生物檢測(cè)快，耗費(fèi)資源少，但容易出現(xiàn)假陽性。最常用的RCR生物測(cè)定法是擴(kuò)展的S+/L?測(cè)定法和標(biāo)記物拯救測(cè)定法。RCL的生物檢測(cè)法最常見的是用一個(gè)處于在擴(kuò)增階段的細(xì)胞系將潛在的復(fù)制型病毒擴(kuò)增至較高滴度，隨后使用ELISA或分子測(cè)定法檢測(cè)。迄今為止，文獻(xiàn)報(bào)道中的相關(guān)產(chǎn)品均沒有在相應(yīng)的病毒載體、轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞產(chǎn)物或受試患者中檢測(cè)到陽性RCR/L結(jié)果，有研究者提出是時(shí)候修改FDA指導(dǎo)原則中關(guān)于RCR/L監(jiān)測(cè)的要求。4.微生物的快速檢測(cè)方法大多數(shù)基于CAR-T細(xì)胞的療法具有有限的保存期限。在一些情況下，轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞可以被冷凍，從而在產(chǎn)品放行之前完成檢測(cè)。然而，多數(shù)情況下CAR-T細(xì)胞療法不可能在給藥之前對(duì)產(chǎn)品完成傳統(tǒng)的無菌檢查、支原體檢查、RCL和外源病毒因子檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)操作。因此亟待研究開發(fā)相應(yīng)的快速檢測(cè)方法。目前市場(chǎng)上有多種快速微生物檢測(cè)儀器被應(yīng)用于臨床血液培養(yǎng)檢測(cè)、食品衛(wèi)生及其他行業(yè)。這些儀器通?；诙趸紓鞲衅?、三磷酸腺苷（adenosinetriphosphate，ATP）生物發(fā)光、熒光標(biāo)記生物的流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)，可用于替代目前的無菌檢測(cè)。對(duì)于支原體檢查和RCL檢測(cè)，目前有核酸檢測(cè)（nucleicacidtesting，NAT）的方法用于替代傳統(tǒng)的方法。對(duì)于外源病毒因子的檢測(cè)，大規(guī)模平行測(cè)序或深度測(cè)序可用于檢測(cè)來自不同病毒的多個(gè)DNA序列，可能用于替代傳統(tǒng)方法。但這些方法均需要進(jìn)行廣泛、深入的優(yōu)化開發(fā)和驗(yàn)證，并證明其與標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法具有可比性或優(yōu)越性，從而獲得相關(guān)國(guó)家監(jiān)管機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。（三）效力試驗(yàn)效力試驗(yàn)用來檢測(cè)CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品是否具有目標(biāo)治療能力，這與產(chǎn)品的療效密切相關(guān)。效力試驗(yàn)對(duì)產(chǎn)品的相關(guān)生物功能提供定量測(cè)定，以保證批次放行產(chǎn)品的質(zhì)量和一致性，并為穩(wěn)定性評(píng)價(jià)以及工藝變更后的可比性評(píng)價(jià)等提供重要的基礎(chǔ)?？赡苡绊慍AR-T細(xì)胞效力/活性的因素有許多，包括轉(zhuǎn)染效率、CAR結(jié)構(gòu)、基因載體、培養(yǎng)條件、細(xì)胞類型及其比例等。通常檢測(cè)的項(xiàng)目包括轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞的數(shù)量、抗原特異性T細(xì)胞功能（如IFN-γ的產(chǎn)生和細(xì)胞毒性刺激）。細(xì)胞表面上CAR的表達(dá)是了解CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品活性的關(guān)鍵特征，CAR+細(xì)胞比例數(shù)量是重要的活性指標(biāo)，可通過流式細(xì)胞術(shù)和PCR檢測(cè)CAR-T細(xì)胞。在成品中應(yīng)設(shè)置相應(yīng)的放行標(biāo)準(zhǔn)保證含有足夠多的CAR

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T細(xì)胞來保證療效。只要可能，應(yīng)該建立具有效力賦值的參考批細(xì)胞并用于校準(zhǔn)后面的檢測(cè)?？乖禺愋訲細(xì)胞功能常采用體外細(xì)胞毒試驗(yàn)（invitrocytotoxicassay）的方法，檢測(cè)CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品對(duì)帶有靶抗原腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，經(jīng)典的方法是采用51Cr釋放試驗(yàn)，由于其放射性則需要研發(fā)其他替代方法，如熒光染料雙（乙酰氧基甲基）2,2′:6′,2′′-三聯(lián)吡啶-6,6′′-二羧酸酯[bis(acetoxymethyl)-2,2′:6′,2′′-terpyri-dine-6,6′′-dicar-boxylate，BATDA]或羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯（carboxyfluoresceindiacetatesuccinimidylester，CFSE）標(biāo)記等。由于CAR-T產(chǎn)品的復(fù)雜性質(zhì)，單獨(dú)的效力試驗(yàn)往往難以反映產(chǎn)品的有效性，因此建議在產(chǎn)品研發(fā)的早期階段開發(fā)多種檢測(cè)方法，以便隨著經(jīng)驗(yàn)的積累，可以更靈活地選擇最具指示效力的檢測(cè)方法。CAR-T細(xì)胞療法的作用機(jī)制是多方面和復(fù)雜的，并且尚不完全明確。目前常采用IFN-γ和細(xì)胞毒性測(cè)定的效力試驗(yàn)還不能很好預(yù)測(cè)產(chǎn)品的臨床療效和安全性。因此，有必要對(duì)CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品進(jìn)行全面的分析，深入了解不同T細(xì)胞亞型所起的多種作用，分析CAR-T細(xì)胞與腫瘤微環(huán)境的相互作用機(jī)制，進(jìn)一步研究更好或更多種效力試驗(yàn)測(cè)定方法，以更準(zhǔn)確地反映CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品功效的完整情況。此外，由于CAR-T在體內(nèi)擴(kuò)增，有必要評(píng)估CAR+T細(xì)胞占總T細(xì)胞的比率、CAR拷貝數(shù)和效力之間的相互聯(lián)系。而在最近的文獻(xiàn)中，通過定量F-肌動(dòng)蛋白、腫瘤抗原簇集、裂解顆粒（lyticgranule，LG）的極化和關(guān)鍵信號(hào)分子在免疫突觸（immunologicalsynapse，IS）內(nèi)的分布來評(píng)估CAR-T介導(dǎo)的免疫突觸的質(zhì)量，從而較好地預(yù)測(cè)CAR-T修飾細(xì)胞的有效性。（四）產(chǎn)品質(zhì)量的一致性CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量依賴于完善的質(zhì)量控制（qualitycontrol，QC）系統(tǒng)來保證不同生產(chǎn)批次間的一致性。在生產(chǎn)過程中應(yīng)對(duì)起始材料、中間產(chǎn)品和最終產(chǎn)品進(jìn)行嚴(yán)格測(cè)試并確保符合設(shè)置的可接受標(biāo)準(zhǔn)。CAR-T細(xì)胞的起始材料目前主要是患者來源的T細(xì)胞和基因修飾用載體。細(xì)胞材料來源的一致性通常因?yàn)楣w的巨大差異而難以進(jìn)行準(zhǔn)確的限定，從而給保證終產(chǎn)品的一致性帶來很大的困難。供體的控制內(nèi)容不僅包括對(duì)供體身體狀況的要求，如腫瘤類別及分期、采集初始樣本前與當(dāng)下治療方案的間隔、與治療相關(guān)的常規(guī)身體檢查指標(biāo)外，還包括外周血細(xì)胞的數(shù)量或某種表型細(xì)胞的數(shù)量、病原體篩查要求等。基因修飾用載體由于可在GMP條件下規(guī)?；a(chǎn)，其質(zhì)量的一致性對(duì)于保證轉(zhuǎn)染效率的穩(wěn)定性和最終CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的一致性顯得尤為重要。根據(jù)諾華制藥公司使用牛津生物醫(yī)學(xué)公司（OxfordBioMedica，OXB）生產(chǎn)的慢病毒載體的經(jīng)驗(yàn)，他們發(fā)現(xiàn)一致的載體質(zhì)量可以在隨后的CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)過程中最大限度地減少不同生產(chǎn)場(chǎng)地間的差異（sitetositevariation）。另外，鑒于CAR-T細(xì)胞在體外生產(chǎn)過程的復(fù)雜性，良好的過程控制和過程檢驗(yàn)?zāi)軐?duì)生產(chǎn)過程中直接或間接影響產(chǎn)品質(zhì)量的各種因素進(jìn)行有效控制，以確保獲得的產(chǎn)品滿足預(yù)期的要求，從而保證產(chǎn)品的一致性。目前一些先進(jìn)的過程分析技術(shù)，包括各種生物傳感器、圖像分析技術(shù)、自動(dòng)流式細(xì)胞術(shù)、代謝通量分析等在CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)過程中的應(yīng)用有待于進(jìn)一步研究，以最終提高CAR-T細(xì)胞的生產(chǎn)過程質(zhì)量控制水平，達(dá)到和重組單抗藥等生物產(chǎn)品一樣能采用質(zhì)量源于設(shè)計(jì)（quality-by-design，QbD）的策略。另外，自動(dòng)化生產(chǎn)技術(shù)的整合將會(huì)更好地實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)的一致性。在整個(gè)制造過程和終產(chǎn)品中控制CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、表達(dá)載體的拷貝數(shù)、CAR表達(dá)的水平、CAR-T細(xì)胞的表型和成熟以及功能能力，如細(xì)胞因子釋放、靶細(xì)胞殺傷等，是確保獲得一致性產(chǎn)品的基本要求。而通過進(jìn)行工藝驗(yàn)證，可以提供能夠持續(xù)生產(chǎn)質(zhì)量一致性產(chǎn)品的科學(xué)證據(jù)。（五）質(zhì)量控制的其他問題在CAR-T細(xì)胞以及基因修飾用載體的檢測(cè)中，如流式細(xì)胞法檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物、CAR-T細(xì)胞效力試驗(yàn)、病毒滴度等，需要使用參考物質(zhì)用于分析方法的開發(fā)、驗(yàn)證和檢測(cè)。通常采用已充分表征的產(chǎn)品作為測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)來評(píng)估不同制造商、不同批次的產(chǎn)品，這對(duì)于確保產(chǎn)品的質(zhì)量和生產(chǎn)的一致性以及建立適當(dāng)?shù)呐R床劑量等必不可少。目前缺乏相應(yīng)的被認(rèn)可的參考物質(zhì)，特別是對(duì)于如何建立細(xì)胞類產(chǎn)品的參考物質(zhì)還缺乏成熟的經(jīng)驗(yàn)，需要不同標(biāo)準(zhǔn)制定機(jī)構(gòu)、制造商和學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)之間的積極合作，建立不同級(jí)別如國(guó)際、區(qū)域以及國(guó)家的參考物質(zhì)。另外，在CAR-T的生產(chǎn)成本中，分析質(zhì)控占到了很大比例，因此需要在效率和成本效益方面大力優(yōu)化和改進(jìn)，從而建立簡(jiǎn)便、有效以及合理的質(zhì)量控制檢測(cè)體系，對(duì)于促進(jìn)CAR-T細(xì)胞療法惠及更多患者具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。（六）非臨床研究中動(dòng)物的選擇CAR-T細(xì)胞作為一種個(gè)體化的人源細(xì)胞產(chǎn)品，其非臨床研究首先要選擇相關(guān)的動(dòng)物種屬。人源CAR-T細(xì)胞給予免疫功能正常的動(dòng)物時(shí)會(huì)出現(xiàn)異種物種間排斥，導(dǎo)致人源細(xì)胞被清除或者出現(xiàn)移植物抗宿主反應(yīng)（GVHR），可考慮采用遺傳性免疫缺陷動(dòng)物進(jìn)行研究；給予正常動(dòng)物免疫抑制劑也可能解決異源細(xì)胞帶來的免疫反應(yīng)問題，但是由于對(duì)藥效或者毒理作用的評(píng)價(jià)有一定干擾，需要對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果進(jìn)行慎重評(píng)估。在免疫缺陷小鼠植入人的造血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞或者組織而具有部分人免疫功能的免疫系統(tǒng)人源化小鼠在CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的評(píng)價(jià)中初步得到應(yīng)用。然而由于當(dāng)前的人源化小鼠模型仍不完善，基于該模型的應(yīng)用仍以探索為主，尚不能全面應(yīng)用到非臨床研究中。也可以考慮采用動(dòng)物源性的CAR-T代替人源細(xì)胞在動(dòng)物上進(jìn)行驗(yàn)證性研究。目前常用免疫缺陷鼠的移植瘤小鼠模型研究CAR-T細(xì)胞對(duì)腫瘤的抑制作用。也有報(bào)道采用同源小鼠模型和轉(zhuǎn)導(dǎo)人腫瘤相關(guān)抗原基因的小鼠模型研究小鼠CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的抑瘤作用，這兩種小鼠具有完整免疫系統(tǒng)，可在一定程度上反映宿主對(duì)CAR-T細(xì)胞的免疫反應(yīng)，是一種概念驗(yàn)證性研究。對(duì)于治療淋巴細(xì)胞白血病或淋巴瘤的CAR-T細(xì)胞，可采用人源細(xì)胞，如Raji、Daudi、Nalm-6、Jeko-1等細(xì)胞株，或者通過基因工程導(dǎo)入特異靶標(biāo)的特殊穩(wěn)定細(xì)胞株（如CD19-K562，CD20-K562等）在免疫缺陷嚙齒類動(dòng)物建立移植淋巴瘤模型。也可采用鼠源細(xì)胞如A20等建立鼠源模型評(píng)價(jià)鼠源CAR-T細(xì)胞。目前用于CAR-T細(xì)胞非臨床安全性研究的動(dòng)物模型各有優(yōu)缺點(diǎn)。同源小鼠模型和表達(dá)人腫瘤相關(guān)抗原（TAA）的轉(zhuǎn)基因小鼠具有完整的免疫系統(tǒng)，但是，其局限性在于受試的CAR-T細(xì)胞需要的是鼠來源的細(xì)胞。移植瘤小鼠模型作為疾病動(dòng)物模型可以模擬CAR-T的作用過程，其缺點(diǎn)是沒有宿主免疫系統(tǒng)，不能完全模擬人