2.0執(zhí)行摘要在此代表Charter〔CCM要求PCT〔LN〕〔6周〕后，Cell-Freeze?低溫凍存袋的物理完整性以及袋內(nèi)低溫保存的造血祖細(xì)胞〔HPC〕的質(zhì)量，仍可連續(xù)得以維持。依據(jù)VP-P008的A驗(yàn)證方案，在PCT公司的Hackensack設(shè)施內(nèi)開(kāi)展?fàn)幷?。在VP-P008方案的實(shí)施過(guò)程中，總共消滅6次過(guò)程偏離，其中包括DEV-0〔DEV-0；某些儲(chǔ)存袋的注射器接頭在充裝培育肉湯過(guò)程中折斷；〔DEV-0、DEV-0DEV-0，儲(chǔ)存袋LN保存中暴露氣溫時(shí)消滅溫度監(jiān)測(cè)偏差；以及DEV-0，因人為失誤〔即冷凍袋在溶化過(guò)程中從工作臺(tái)掉落至地板上〕所導(dǎo)致的1個(gè)儲(chǔ)存袋裂開(kāi)。這些偏離均可認(rèn)為對(duì)本爭(zhēng)論所得結(jié)論無(wú)影響。Cell-Freeze?低溫凍存袋的物理完整性CML-100LN凍存袋為整套Cell-Freeze?凍存袋之代表產(chǎn)品，這種凍存袋由CM公司生產(chǎn)并投放市場(chǎng)，用于低溫保存HPC。選擇該型號(hào)凍存袋為代表產(chǎn)品的依據(jù)為，它是全部?jī)龃娲O(shè)計(jì)之代表，其塑料膠膜的型號(hào)最大，密封線也最長(zhǎng)，進(jìn)而較更小的凍存袋更有可能會(huì)裂開(kāi)。這種凍存袋的充裝量為130ml。方案執(zhí)行過(guò)程中，承受了3個(gè)不同生產(chǎn)批次CML-100LN〔135個(gè)凍存袋10%DMSO的大豆胰蛋白酶肉湯〔TSCRLN的液相中低溫保存42每個(gè)凍存袋在溶化之前均經(jīng)過(guò)屢次氣溫暴露。全部的CML-100LN凍存袋均通過(guò)了所開(kāi)展的物理完整性測(cè)試，包括最初的加壓測(cè)試和肉眼檢查，以及隨后的微生物激發(fā)和染料浸泡測(cè)試?；趨⒖贾康模鼵ML-100LN25只BaxterCryocyteTMR4R9955凍存袋〔1個(gè)批次，充裝100ml〕CryocyteTM1只凍存袋在微生物激發(fā)測(cè)試中消滅細(xì)菌生長(zhǎng)。然而，所檢出的微生物為枯草芽孢桿菌，而非激發(fā)細(xì)菌〔缺陷短波單胞菌，提示該凍存袋未裂開(kāi)。該凍存袋的芽孢桿菌污染，很可能是操作者在充裝凍存袋時(shí)違反無(wú)菌操作程序的直接反映。Cell-Freeze?低溫凍存袋中凍存的HPC細(xì)胞的質(zhì)量：承受最小型號(hào)的Cell-Freeze?凍存袋，即CML-50LN凍存袋代表為整套Cell-Freeze?凍存袋。選擇袋體設(shè)計(jì)型號(hào)最小的凍存袋為代表的依據(jù)為，盡可能減小HPC產(chǎn)品的體積以完成所需的細(xì)胞質(zhì)量爭(zhēng)論。VP-P008方案執(zhí)行過(guò)程中，承受了3個(gè)批次的CML-50LN凍存袋〔25個(gè)凍存袋65ml10%DMSO的、稀釋后的HPC產(chǎn)品，每ml含有4.64106個(gè)有核細(xì)胞N。以CRF冷凍CML-50LN凍存袋，于LN4243胞法測(cè)定存活的單個(gè)核的細(xì)胞〔MNC〕以及CD34+細(xì)胞確實(shí)定數(shù)量，并以Methocult?培育基培育法促進(jìn)造血細(xì)胞系中集落生成單位〔CFU〕的生長(zhǎng)。除1只凍存袋的袋體在內(nèi)容物測(cè)試前因人為失誤〔參見(jiàn)DEV-0〕，從而無(wú)法進(jìn)展完整性測(cè)試之外，全部的凍存袋均通過(guò)了加壓測(cè)試和泄漏檢查。全部的凍存袋均符合VP-P008方案中所規(guī)MNC以及CD34+細(xì)胞的回收率均大于等2MNC及范圍71至97。就CFU而言，全部的凍存袋均可產(chǎn)生CF1CFU的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，其平均回收率為78〔SD=27，范圍37至140。作為參考，還對(duì)25只BaxterCryocytTMR4R9955凍存袋〔1個(gè)批次，充裝量70ml〕進(jìn)展了與CML-50LN凍存袋的并行測(cè)試。全部的CryocyteTM凍存MNCD3細(xì)胞和CFU的平均回收率分別為范圍72至91、83SD=7，范圍70至96〕和80SD=16，范圍44至114。Cell-Freeze?低溫凍存袋滿足VP-P008驗(yàn)證方案所規(guī)定的物理完整性和細(xì)胞質(zhì)量保持性方面的全部驗(yàn)收要求。3.0目的3.1PCTCharter醫(yī)學(xué)公司〔CM〕Cell-Freeze?低2023年應(yīng)CM公司要求所開(kāi)展之爭(zhēng)論〔PROJ1078號(hào)試驗(yàn)方案〕之補(bǔ)充，旨在論證Cell-Freeze?凍存袋的物理完整性，以及經(jīng)過(guò)液氮冷藏箱〔LNF〕中的液相長(zhǎng)期低溫凍存〔名義保存期至少為6周〕后其袋內(nèi)冷凍保存HPC的質(zhì)量。4.0范圍4.1爭(zhēng)論的背景、爭(zhēng)論打算以及具體的試驗(yàn)方案，參見(jiàn)VP-P008的A驗(yàn)證方案所述，其Charter醫(yī)學(xué)公司Cell-Freez低溫凍存容器的驗(yàn)證〔爭(zhēng)論Ⅱ4.2本爭(zhēng)論依據(jù)VP-P008中所述的試驗(yàn)方案實(shí)施。4.3爭(zhēng)論過(guò)程以及得出的測(cè)試結(jié)果均記錄于批次處理記錄表〔VP-P008F12A&B：Cell-Freeze?低溫凍存袋的驗(yàn)證，第Ⅰ局部和第Ⅱ局部〕中。4.4本報(bào)告呈述了本爭(zhēng)論所得出的結(jié)果及其數(shù)據(jù)分析狀況。4.5過(guò)程偏離狀況記錄于“方案偏離表VP-P008-F”中，并在本報(bào)告中予以總結(jié)與爭(zhēng)論。5.0驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方案〔VP-P008〕中規(guī)定的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：凍存袋的完整性：5.1.1.1

凍存和溶化之后泄漏和微生物激發(fā)測(cè)試的故障率：≤1.7%細(xì)胞質(zhì)量：凍存和溶化之后活性MNC的回收率≥70%；凍存和溶化之后活性CD34+細(xì)胞的回收率≥70%；凍存和溶化之后集落產(chǎn)生祖細(xì)胞的存在率〔：100。CryocyteTM凍存袋的測(cè)試數(shù)據(jù)將僅供參考，將不作為Cell-Freeze?凍存袋驗(yàn)收檢測(cè)的比照。程序偏離依據(jù)VP-P008驗(yàn)證方案，實(shí)施測(cè)試過(guò)程?！胺桨钙x表”中所記錄的過(guò)程偏離狀況總結(jié)如下：DEV-01：在爭(zhēng)論的第Ⅰ局部和第Ⅱ局部變更樣品冷凍時(shí)的控速冷凍程序〔VP-P008-F8DEV-01〕試驗(yàn)方案〔VP-P008〕中所述的控速冷凍程序，為一臺(tái)CBS的控速冷藏箱〔CRF，型號(hào)2100〕而設(shè)置。但是，在爭(zhēng)論實(shí)施時(shí)CBS生產(chǎn)的CRF卻無(wú)法運(yùn)行。爭(zhēng)論的第Ⅰ局部和第Ⅱ局部中所得到的全部樣品均承受 ThermoCRYOMED冷藏〔7452型進(jìn)展控速冷凍其控速程序?yàn)樵揅RF所專設(shè)。精準(zhǔn)地說(shuō)，該CRYOMEDCRF在熱溶化補(bǔ)償恢復(fù)階段無(wú)法依據(jù)CBS儀器的要求以2℃分鐘的速率加溫〔下述6.2.1.2段落的順次4。下表列出本項(xiàng)驗(yàn)證爭(zhēng)論所使用的實(shí)際冷凍程序。最初程序與本爭(zhēng)論實(shí)際使用程序之間的唯一差異為程序的第425℃/分鐘變更為15℃/分鐘。預(yù)期這一變更對(duì)凍存袋的完整性和/或細(xì)胞質(zhì)量未造成顯著性影響，尤其是這種條件同時(shí)應(yīng)用于受試凍存袋〔 Cell-Freeze?〕和參比凍存袋〔CryocyteTM〕的狀況下。*25。DEV-02：凍存袋中充裝TSB/DMSO及排出空氣時(shí)發(fā)生注射器接頭斷裂〔爭(zhēng)論的第Ⅰ局部，VP-P008-F8DEV-02〕在依據(jù)試驗(yàn)方案第10.1.6段裝填TSB/DMSO8〔見(jiàn)第6.2.2.1.1節(jié)所列〕的接頭凹部塑料件在裝填/排氣操作過(guò)程中斷裂，導(dǎo)致TSB/DMSO2下的TSB/DMSOTSB/DMSO。受損的、爭(zhēng)論所用的凍存袋如下：此項(xiàng)偏離對(duì)爭(zhēng)論無(wú)影響。將第2個(gè)接頭凹部與凍存袋相連接，試驗(yàn)操作得以連續(xù)。DEV-03、DEV-04、DEV-05：冷凍保存樣品的多重氣溫暴露時(shí)的溫度監(jiān)控偏離〔爭(zhēng)論10.1.9節(jié)〕VP-P008-F8DEV-03J批次冷凍袋的OMEGAETTE?HH306A溫度監(jiān)控器設(shè)置為時(shí)間模式，而非連續(xù)記錄模式。故此，依據(jù)此種方式記錄溫度的兩個(gè)凍存袋的溫度軌跡打印輸出結(jié)果僅顯示該過(guò)程的最初7分鐘的溫度檢測(cè)值。但是，其監(jiān)視者觀看到該操作者確實(shí)完成了該批次凍存袋的整個(gè)溫度暴露過(guò)程，盡管因記錄錯(cuò)誤不適當(dāng)?shù)赜涗浟吮卷?xiàng)操作活動(dòng)。VP-P008-F8DEV-04：N4次暴露氣溫過(guò)程中，2個(gè)熱電偶中的1個(gè)〔N2〕與凍存袋分別。如同溫度軌跡打印輸出結(jié)果所示，溫度在較短0℃，反映出熱電偶在重固定于凍存袋之前曾暴露于氣溫下。VP-P008-F8DEV-0T批次凍存袋自液氮冷藏LN〕5次氣溫暴露時(shí)，關(guān)閉了溫度監(jiān)控器。因此，這兩個(gè)溫度軌跡打印輸出結(jié)果僅采集到凍存袋第4次氣溫暴露之前的溫度變化狀況其監(jiān)視者確實(shí)觀看到操作者按要求完成了整個(gè)操作，盡管因人為失誤未適當(dāng)?shù)仫@示記錄完成了此項(xiàng)操作活動(dòng)。DEV-06：第Ⅱ局部爭(zhēng)論的溶化過(guò)程中，凍存袋消滅裂開(kāi)〔VP-P008-F8DEV-06〕B-HPC--1-CML64-4之前〔10.2.26.3.1-2節(jié)落后，該凍存袋底部的兩個(gè)取樣口的密封線隨即裂開(kāi)。用1個(gè)塑料袋單獨(dú)外包裝該凍存袋，其后再于37℃水浴中溶化；并將其保持于直立位，以防溶化過(guò)程中袋體液體內(nèi)容物漏出。因此，該凍存袋無(wú)法進(jìn)展加壓泄漏測(cè)試。承受與鈍頭注射針相連接的60ml注射器，經(jīng)裂開(kāi)縫隙開(kāi)口取出該凍存袋中的細(xì)1CFUCD34+細(xì)胞計(jì)數(shù)試驗(yàn)采樣之前，混合細(xì)胞懸浮液。該樣品的CFU培育中未發(fā)生污染。結(jié)果第Ⅰ局部：Cell-Freeze?凍存袋的物理質(zhì)量130mlCML-100LNCell-Freeze?凍存袋的代表產(chǎn)品，100ml的CryocyteTMR4R9955VP-P008試驗(yàn)方案所述，僅作為參考。共對(duì)3個(gè)批次的CML-100LN凍存袋〔、和，每批次45個(gè)凍存袋，以及1個(gè)批次的CryocyteTM凍存袋〔H08A230825個(gè)凍存袋〕進(jìn)展了測(cè)試。全部的凍存袋均裝填所需體積的、含10%DMSOTSB42天。在溶化冷凍保存袋之前，按試驗(yàn)方案第10.2.95次。1TSB/DMSO6周以及溶化前屢次暴露氣溫之后的完整性測(cè)試結(jié)果。SB/DMSO的CML-100LN凍存袋和CryocyteTM凍存袋均通過(guò)了加壓測(cè)試和泄漏檢查——依據(jù)試驗(yàn)方案第10.1.11節(jié)所述，將溶化的凍存袋放置于兩個(gè)吸水紙之間加壓，未檢出泄漏。全部的CML-100LN凍存袋還均通過(guò)了微生物激發(fā)測(cè)試——依據(jù)試驗(yàn)方案第10.1.126小時(shí)，再于30℃至3514天，未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)。1只CryocyteTM參比凍存袋〔K-TSB--CRY28-7〕經(jīng)微生物激發(fā)后，呈微生而非缺陷短波單胞菌，說(shuō)明凍存袋的物理完整性并未受損。該凍存袋的芽孢桿菌污染，很可能是由于操作者在充裝肉湯過(guò)程中未較好地保持無(wú)菌操作之故。包括微生物檢測(cè)陽(yáng)性的 CryocyteTM凍存袋〔K-TSB--CRY28-7〕在內(nèi)，全部的CML-100LN凍存袋和CryocyteTM凍存袋均通過(guò)了隨后的亞甲基藍(lán)測(cè)試——凍存袋在含有亞甲基藍(lán)染料的水浴中過(guò)夜浸泡之后，凍存袋內(nèi)未覺(jué)察藍(lán)色物質(zhì)。缺陷短波單胞菌激發(fā)后的泄漏測(cè)試和亞甲基藍(lán)染料的浸泡測(cè)試Gibraltar試驗(yàn)室實(shí)施。本爭(zhēng)論中由Gibraltar試驗(yàn)室撰寫(xiě)的具體報(bào)告，參見(jiàn)附件〔附件1。吸水紙是否有變濕的跡象，進(jìn)而說(shuō)明是否存在塑料件、接縫、接口或封口的泄漏。30356303514天，以證明是否存在細(xì)菌生長(zhǎng)。陽(yáng)性比照凍存袋〔4只130mlTSB/DMSOCML-100LN模擬凍存袋失效時(shí)的情景。陰性比照凍存袋〔4只130mlTSB/DMSOCML-100LN菌的水浴中。支持生長(zhǎng)的凍存袋4只130mlTSB/DMSOCML-100LN1ml單胞菌稀釋?xiě)腋∫?，之后扎牢注射孔。不要將凍存袋放入含有缺陷短波單胞菌的水浴中?4天之后，從中取出局部培育液，放置于1TSA1Mackonkey瓊脂平板的3035℃下孵育至形成成熟的集落。在TSA平板上，而非Mackonkey瓊脂平板上觀看細(xì)菌生長(zhǎng)。承受常規(guī)的鑒別試驗(yàn)法確定細(xì)菌的種屬是否屬于枯草芽孢桿菌。4個(gè)陽(yáng)性比照凍存袋〔備注：VP-P008試驗(yàn)方案要求設(shè)兩個(gè)5560℃染料帶過(guò)凍存袋中可能具有的泄漏點(diǎn)。檢查凍存袋內(nèi)的肉湯中是否帶有亞甲基藍(lán)的顏色，以證明有無(wú)袋體泄漏。ND=未開(kāi)展。陽(yáng)性比照、陰性比照和支持生長(zhǎng)的樣品，均未進(jìn)展加壓測(cè)試和泄漏檢查。第Ⅱ局部：HPC產(chǎn)品經(jīng)Cell-Freeze?低溫凍存袋冷凍保存后的質(zhì)量65mlCML-50LN凍存袋為整套Cell-Freeze?凍存袋的代表產(chǎn)品，同時(shí)70mlCryocyteTMR4R9955凍存袋進(jìn)展了測(cè)試，但如同VP-P008試驗(yàn)方案所述，僅作為參考。共對(duì)3個(gè)批次共25個(gè)CML-100LN凍存袋〔898袋，以及25個(gè)CryocytTM凍存袋H07K01033批次〕進(jìn)展了測(cè)試。全部的凍存袋均裝入所需體積的、含10%DMSOHPC產(chǎn)品稀釋液。7.2.4照試驗(yàn)方案〔10.2.23.1.6節(jié)〕所述，凍存袋中的NC4.5×106/ml5.5×106/ml的范圍內(nèi)。所測(cè)試的凍存袋中實(shí)際NC的平均數(shù)為4.64×106/ml〔SD=0.08×106/m，范圍為4.×16至4.×10/m。在本局部的爭(zhēng)論中，凍存袋中的HPC4243天。2CML-50LNCryocyteTM凍存袋的完整性測(cè)試，MNC、CD34+CFU的計(jì)數(shù)值，冷凍保存和溶化之后這些凍存袋中回收的HPC凍存樣品等結(jié)果的總結(jié)。除了B-HPC--1-CML64-4凍存袋之外，全部業(yè)已溶化的凍存袋均通過(guò)了VP-P008第10.1.11〔6.2.4節(jié)，故此無(wú)法進(jìn)展完整性測(cè)試。全部受試樣品的活性MNC的回收率〔與凍存前的樣品相比較〕均符合≥70%的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。CML-50LNCryocyteTMR4R9953凍存袋中HPCMNC平均回收率分別為81SD=6，范圍70至94〕和81SD=4，范圍72至91。全部受試樣品的活性CD34+細(xì)胞的回收率也均符合≥70%的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。CML-50LN凍CryocyteTMR4R9953HPCCD34+細(xì)胞平均回收率分別為84〔SD=7，范圍71至97〕和83SD=7，范圍70至96。全部受試樣品在溶化后均消滅CFU1CFU的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。平均而言，CML-50LNCryocyteTMR4R9953HPCCFU回收率分別為78〔SD=27，范圍37至140〕和80〔SD=16，范圍44至114。留意：相對(duì)于MNC和CD34+細(xì)胞確定數(shù)量而言，所得出的回收率的較大標(biāo)準(zhǔn)差以及較大的數(shù)值范圍，均為CFU試驗(yàn)的固有變異性的實(shí)際反映。爭(zhēng)論2023〔PROJ1078號(hào)試驗(yàn)方案根底上，驗(yàn)證Cell-Freeze?低溫凍存袋確保其物理完整性的力量以及經(jīng)過(guò)LN中的液相長(zhǎng)期低溫凍存〔6周〕后HPC的質(zhì)量。依據(jù)VP-P008試驗(yàn)方案開(kāi)展?fàn)幷?。VP-P008中的全部關(guān)鍵掌握設(shè)置均得以滿足。第6.0節(jié)所爭(zhēng)論的、過(guò)程偏離觀看項(xiàng)，對(duì)爭(zhēng)論結(jié)果均無(wú)影響。就凍存袋物理完整性評(píng)價(jià)而言，總共對(duì)3135CML-100LN凍存袋進(jìn)展了測(cè)Cell-Freeze?凍存袋的代表。溶化后的CML-100LN凍存袋，全部通過(guò)了所開(kāi)展的物理完整性測(cè)試，包括最初的加壓測(cè)試和肉眼檢查，以及隨后的微生物激發(fā)和染料浸泡測(cè)試。故此，可得出Cell-Freeze?低溫凍存袋符合凍存袋完整性所要求的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：基于Khuu等.Cytotherapy，202346539-549頁(yè)的觀看值在VP-P008試驗(yàn)方案中設(shè)定的完整性失效率為≤1.7%0%。在細(xì)胞質(zhì)量評(píng)價(jià)方面，基于冷凍保存和溶化后的MNC、CD34+細(xì)胞和CFU的生長(zhǎng)力量的325CML-50LN凍存袋〔Cell-Freeze?低溫凍存袋VP-P008試驗(yàn)方案中所確定的MNC和CD34+細(xì)胞的回收率≥70%以及存在≥1CFUMNCCD34+CFU的平均回收率分別為81〔SD=6，范圍70至94、84SD=7，范圍71至97〕和78%〔SD=27，范圍37至14016.2.4節(jié)所述，該只凍存袋在溶化過(guò)程中因意外掉落于地板上而裂開(kāi)。CMBaxterCryocyteTMCell-Freeze?凍存袋相并行的測(cè)試，但所得信息僅限于參考。依據(jù)與CML-100LN凍存袋一樣的程序，對(duì)25只CryocyteTMR4R9953凍存袋〔110