《臨床檢驗血液學》

實驗十五、異常骨髓片檢驗（八）

WBC增多骨髓片的檢驗上次實驗情況

以小組為單位，觀察WBC增多的骨髓涂片，并做相應的細胞化學染色講解細胞化學染色、實驗課目的要求、注意事項布置及實驗報告內(nèi)容

（一）上次實驗情況

（二）小組看片并做細胞化學染色

獨立觀察WBC增多的骨髓片（10min）初步印象？

下一步該做哪些細胞化學染色？

（三）講解急白的細胞化學染色結合《------課件》等講解POX染色結合《------課件》等講解NSE染色+NaF試驗

結合《------課件》等講解NAS-DCE染色復習PAS染色

POX染色試劑聯(lián)苯胺溶液：聯(lián)苯胺0.3g36%亞硝基鐵氰化鈉溶液1ml95%乙醇加到100ml稀H2O2:H2O5ml3%H2O21d

POX染色原理[O]H2O2聯(lián)苯胺

聯(lián)苯胺藍棕黑/黃色沉淀POX亞硝基鐵氰化鈉

POX染色步驟聯(lián)苯胺液H2O21-2min4-8min沖洗沖洗涼干瑞氏染液Ⅱ、Ⅰ

POX染色結果觀察--分級

陽性結果為棕黑色。（-）無陽性顆粒。（±）顆粒細小、分布稀疏。（+）顆粒較粗、常呈局灶性分布、約占胞漿1/4。（++）顆粒粗大、分布較密、約占胞漿1/4-1/2。（+++）顆粒粗大、團塊狀分布、約占胞漿1/2-3/4。（++++）布滿整個細胞、可覆蓋核上。

POX染色結果觀察--正常細胞結果

粒系：早期原粒陰性，晚期原粒以下陽性，并隨著粒細胞成熟其陽性逐漸加強。嗜酸性粒細胞陰性，嗜堿性粒細胞陽性。單系：單系細胞多數(shù)陰性，少數(shù)弱陽性。網(wǎng)狀細胞、吞噬細胞可陽性。淋巴細胞、漿細胞、巨核細胞、有核紅細胞、組織細胞均陰性。

NAS-DCE染色試劑：固定液（甲醛）基質液（工作液）：

氯乙酸萘酚AS-D+二甲基甲酰胺

亞硝酸鈉液+鹽酸副品紅液

1/15M(pH7.4)磷酸鹽緩沖液

1%美蘭？？NAS-DCE染色步驟及原理:5min37℃30min5min涼干鏡檢沖洗沖洗沖洗固定液熏蒸工作液滴加在血膜上美蘭滴加在血膜上含AS-D萘酚底物細胞NAS-DCE釋放AS-D萘酚品紅固定細胞：藍色復染陽性：紅色

NAS-DAE染色原理醋酸AS-D萘酚AS-D萘酚堅牢藍BBNAS-DAE籃色沉淀

NAS-DAE染色試劑固定液（甲醛）?；|液(分兩份，其中一份加NaF)

醋酸萘酚AS-D+乙烯丙二醇+丙酮堅牢藍BB0.1M磷酸鹽緩沖液（pH6.8）

1%中性紅。

NAS-DAE染色步驟甲醛基質液5min60min沖洗沖洗涼干中性紅5min沖洗37℃涼干涼干鏡檢PAS染色步驟及原理:涼干鏡檢固定液滴加在血膜上HIO4滴加在血膜上雪夫氏液滴加在血膜上美蘭滴加在血膜上5min15min（37℃）20min沖洗沖洗沖洗2min沖洗陽性：紅色復染固定細胞：藍色HIO4細胞糖類雙醛基無色品紅無色品紅

PAS染色試劑：固定液：95%乙醇

10g/LHIO4

雪夫氏液（Schiff）：主要由堿性品紅和偏重亞硫酸鈉組成復染液：10g/L美蘭

POX等染色結果報告

陽性率（%）陽性指數(shù)或陽性分布情況陽性指數(shù)：計算方式同NAP積分陽性分布：（+）？%，（++）？%，----

細胞化學染色常規(guī)注意事項染色前要做記號，以免出現(xiàn)差錯固定前務必要辨認涂片的正反面復染：用中性紅或美蘭復染判斷染色是否成功：涂片中有否強陽性的細胞每一步驟的試劑必須覆蓋整個個血膜沖洗：直接流水沖洗，不要將反應液倒掉后沖洗，以免雜質沉積

（四）目的要求掌握：常見急性白血病的骨髓象特點。掌握：POX染色、特異性酯酶染色的原理、步驟、結果及臨床意義。熟悉：非特異性酯酶染色（包括氟化鈉抑制試驗）原理、步驟、結果及臨床意義。復習PAS染色。

（五）實驗報告（共同完成一份實